La modificación genética y la biotecnología

Los biólogos han desarrollado técnicas para la manipulación artificial de ADN, células y organismos. Estas se
desarrollaron tras el descubrimiento de la estructura y el papel del ADN como código universal, la aplicación de la
microscopia electrónica a la biología celular y la capacidad de aislar orgánulos de células viables para estudios
bioquímicos in vitro. La nueva tecnología incluye:

 Ingeniería genética: transferencia de un gen de un organismo (donante) a otro (receptor).

 Secuenciación del ADN: creación de bibliotecas genómicas con la secuencia precisa de nucleótidos del ADN de
organismos individuales.
 Huella genética: en la que se analiza el ADN con el fin de identificar el individuo a quien pertenece una muestra
de ADN.

Dos procesos fundamentales en la ingeniería genética

1. Electroforesis en gel
 Se utiliza para separar moléculas como las proteínas y los fragmentos de ácidos nucleicos. Es fundamental
para investigar la secuencia de bases de fragmentos concretos del ADN. También se utiliza para identificar
organismos y especies concretas (perfil genético).
 Las proteínas o fragmentos de AN se separan en función de su carga neta y masa. Los fragmentos de ADN
(fadn) tienen distintas longitudes.
 Se cortan una serie de pozos cerca de un extremo del gel y este se sumerge en una solución de sal que
conduce la electricidad. Se deposita una pequeña cantidad de mezcla que se pretende separar en uno de los
pocillos.
 Después de la separación, los fragmentos no son visibles de inmediato pero pueden identificarse mediantes
sondas de genes y tinciones de ADN:
o Sondas de genes: consisten en una única hebra de ADN con una secuencia de bases que es
complementaria a la de un gen particular cuya presencia o posición de desea verificar. La sonda
debe marcarse (hacerla radiactiva) para que cuando el gel se exponga a una película radiográfica, se
muestre la presencia de esa sonda particular con el fragmento complementario.
o Tinciones: localizan de inmediato la posición de todos los fragmentos de ADN. Pueden ser bromuro
de etidio (los fragmentos de ADN presentan fluorescencia cuando se aplica radiación UV de onda
corta) o azul de metileno (tiñe el gel y el ADN pero el color se desvanece rápidamente).

2. Reacción en cadena de la polimerasa

 Se amplifica la doble cadena de ADN, es decir, se hacen muchas copias. Estas pueden amplificarse con la
PCR, replicando ADN mediante un proceso in vitro totalmente automatizado para producir una gran
cantidad de la secuencia concreta de genes. Una solo molécula es suficiente como material de partida.
 Los productos son copias exactas. Se utiliza la enzima polimerasa (resistente al calor) en la PCR.

La ingeniería genética aplicada a la producción de insulina humana

 Transferencia de los genes humanos que codifican la insulina a una cepa de la bacteria E. coli.
 La insulina esta formada x 2 polipeptidos cortos unidos entre si x ptes de disulfuro. Una vez ensamblada la
hormona, permite que las células del org regulen la cantidad de azúcar en sangre.
 Se requiere un aporte regular de insulina para tratar la diabetes dependiente de insulina.
 Se diseñaron cultivos de E. coli para que las bacterias fabriquen y secreten insulina humana cuando se cultivan
en un fermentador industrial con nutrientes apropiados.
 Obtencion de una copia de los genes de la insulina humana mediante aislamiento del ARNm: se aisla el ARNm
de la insulina en una muestra de tejido de páncreas humano. Se utiliza la enzima transcriptasa inversa (obtenida
de un retrovirus) junto con el ARNm aislado para formar una única hebra de ADN. Se convierte este ADN en un
ADN de doble hebra, usando ADN polimerasa. De esta manera se fabrica el gen. El gen aislado se denomina ADN
complementario (ADNc).
 Insercion del ADN en un plásmido para utilizarlo como vector: la ingeniería genética utiliza con frecuencia los
plásmidos (pequeñas moléculas de ADN circulares que se transmiten a las células hijas cuando la bacteria se
divide) de las bacterias como vectores para la transferencia de genes amplificados. Se aíslan los plásmidos del
citoplasma y se abre el ADN circular del plásmido usando una enzima de restricción. Esta enzima deja expuesta
ciertas secuencias especificas del ADN, que se denominan extremos cohesivos. Estos son segmentos cortos de
bases desapareadas que se forman en el extremo de c/corte. Se crean copias de la misma secuencia del extremo
cohesivo en el ADNc de la insulina mediante la adicion de segmentos cortos de ADN que luego son recortados.
 Insercion de vectores plasmidicos en la bacteria huésped: los plásmidos recombinantes vuelven a introducirse
en las células bacterianas. Las bacterias se describen como transformadas.
 Identificacion de las bacterias transformadas antes de la clonación: solo un n° limitado de las células
procesadas adquieren con éxito los plasmidos recombinantes. Unicamente estas bacterias seran capaces de
sintetizar la insulina y son las que deben ser clonadas y después cultivadas en un fermentador. Las bacterias
transformadas con éxito pueden ser seleccionadas utilizando un plasmido con genes de resistencia a antibióticos
(plasmidos R). Se pueden usar otros marcadores.
 Un nuevo desarrollo en la producción de insulina: en la actualidad se utilizan células de levadura manipuladas
genéticamente para producir insulina, en vez de E. coli. Las proteínas secretadas x la celular son fabricadas x los
ribosomas del RER y se transfieren al aparato de Golgi. Aquí, la insulina adquiere su estructura 4ternaria antes
de ser secretada x las células de levaduras transformadas.
 Marcadores alternativos para la ingeniería genética: los marcadores son genes que se utilizan para identificar
las células a las cuales el gen ha sido transferido con éxito. En la actualidad, en vez de genes de resistencia a
antibióticos se utilizan genes que producen sustancias fluorescentes junto con el ADNc del gen deseado. Este
gen marcador solo se expresa cuando el gen deseado ha sido insertado con éxito en plásmidos y estos se
encuentran en las bacterias transformadas.
 Otro método de aislamiento de genes para su uso en ing genética: se puede sintetizar una copia de un gen en
el laboratorio si se conoce la secuencia lineal de aa del polipéptido o proteína que codifica. Los datos en el
código genético proporcionan la secuencia de nucleótidos a partir de los que puede construirse una copia del
gen.