ICB 420-1

Biocatálisis y reactores enzimáticos

Pontificia Universidad Católica de Valparaíso
Ayudantía N°3: Determinación de Parámetros Cinéticos (KI).

1. Se desea determinar el tipo de inhibición y el valor de las constantes cinéticas de la

enzima aminoacilasa. La reacción catalizada corresponde a acetiltreonina → treonina +
acetato. Experimentalmente los resultados de velocidad de reacción son los siguientes,
utilizando un inhibidor externo a la reacción:

V (mmol/h)

S(mM) i=2 (mM) i=4 (mM) i=8 (mM)

0,3 1,2 0,94 0,65

0,5 1,85 1,47 1,043

1 3,13 2,56 1,89

1,8 4,5 3,83 2,96

2,7 5,51 4,82 3,86

4,6 6,77 6,13 5,17

6,1 7,35 6,78 5,87

7,6 7,77 7,24 6,39

2. La enzima La enzima arilesterasa (E.C. 3.1.1.2) cataliza la reacción fenilacetato 🡪 fenol +

acetato. Se han obtenido los siguientes resultados de velocidad inicial de reacción (v
µmoles/min) a distintas concentraciones de fenilacetato (s) y de fenol (p).

V (mM/min)
S (mM) P = 0 (mM) P = 20 (mM)
2 35,29 25,21
5 75 53,57
10 120 85,71
20 171,43 122,45
40 218,18 155,84
80 252,63 180,45

Se pide terminar:

a. El tipo de inhibición que ejerce el fenol sobre la arilesterasa

b. Los valores de la velocidad máxima de reacción, constante de Michaelis y
constante de inhibición por fenol.

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Ayudantía N°3: Determinación de Parámetros Cinéticos (KI).

3. Los siguientes resultados se obtuvieron con una glucosa 6 fosfatasa (EC 3.1.3.9). La
enzima cataliza la hidrólisis de glucosa 6 fosfato (G6P) a glucosa (G) y fosfato inorgánico
(Pi).

velocidad inicial de reacción

(µmol glucosa/min*mg enzima)

[G6P] mM [G]=0 mM [G]=20 mM [G]=40 mM [G]=80 mM

10 57,1 42,6 33,9 24,1

20 88,9 67,8 54,8 39,6

40 123,1 96,4 79,2 58,4

80 152,4 122,1 101,9 76,6

Determine el tipo de inhibición ejercida por glucosa y determine la expresión de

velocidad con sus parámetros cinéticos.

4. Nucleosidasa inosina (EC 3.2.2.2) cataliza la hidrólisis de inosina monofosfato (IMP) en

hipoxantina (Hx) y ribosa fosfato (R5Pi). Un preparado de enzima de Azotobacter
vinelandii ha demostrado inhibición no competitiva parcial por adenina (A). Los
siguientes resultados de la tasa inicial de hidrólisis de IMP se obtuvieron sin la adición
de adenina:

[IMP] (mM) V (umoles Hx * min-1 *mgenzima-1)

0,23 40
0,5 75
1 120
1,33 141
1,73 161
2,1 175

La velocidad de reacción máxima aparente en concentración saturante de adenina se

reduce en un 70%. Con una concentración de adenina de 35 mM el valor de Vmax
aparente es 125 μmol · min-1*mg-1. Determine los valores de los parámetros cinéticos
de la enzima y la expresión de velocidad de la hidrólisis de IMP.

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5. (Desafío-Tarea). Según la siguiente ecuación, identifique a que tipo de inhibición

corresponde y determine una expresión para la velocidad de reacción. Resolver
algebraicamente dejando expresado por separado Vap y Kap.

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