PROBLEMAS DE CINÉTICA ENZIMÁTICA CON DOS SUSTRATOS

1.- El estudio cinético de la adenosin-trifosfato-creatina transfosforilasa de cerebro de vaca se

ha efectuado en el estado estacionario. La enzima cataliza la reacción:

Mg – ATP + Creatina ---------------- Mg-ADP + Creatina- fosfato + H+

Se ha seguido la reacción enzimática a diferentes concentraciones de los sustratos por
valoración a pH constante, de los protones liberados. Las velocidades iniciales de la reacción
se expresan en moles de protones liberados / min x mg de proteína y vienen dados en
la tabla siguiente. Determinar el mecanismo de la reacción y el valor de todos los
parámetros cinéticos.
[ Mg-ATP] (mM) velocidad velocidad Velocidad Velocidad
0,2 16,5 29,0 53,5 92,0
0,5 30,5 51,0 86,0 131,0
1,0 42,5 68,5 108,0 153,0
4,0 60,0 92,0 134,0 174,0
[Creatina] (mM) 2 4 10 40

2.- La fosfolipasa A2 cataliza la hidrólisis del enlace éster en posición 2 de los 1,2-
diacilfosfolípidos . La enzima requiere la presencia de iones Ca 2+. Para determinar el
mecanismo cinético de la reacción se midieron las velocidades de hidrólisis para diferentes
concentraciones de dibutirillecitina (DBL), en presencia de concentraciones fijas de Ca 2+. La
reacción se sigue mediante valoración del ácido liberado. Los resultados obtenidos aparecen
expuestos en la siguiente tabla, en donde las velocidades iniciales de la reacción se expresan
en moles de ácido liberado / min mg de proteína. Establecer el mecanismo cinético de la
reacción y calcular el valor de los parámetros cinéticos correspondientes.
[DBL] (mM) Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad
2,5x10-2 0,60 1,07 1,45 1,75
5,0x10-2 0,83 1,40 1,85 2,20
10,0x10-2 1,00 1,70 2,15 2,50
20,0x10-2 1,15 1,85 2,35 2,70
[Ca2+] (mM) 11,4 22,7 34,0 45,4
Solución: Secuencial ORDENADO

3.- Una enzima cataliza una reacción entre dos sustratos A y B. Para determinar el mecanismo
cinético de la reacción se han medido las velocidades iniciales de la reacción para diferentes
concentraciones de B en presencia de concentraciones fijas de A. Los resultados aparecen
expuestos en la siguiente tabla, en donde las velocidades iniciales de la reacción se expresan
en Molar de producto aparecido por segundo. Se pide: (a) cuál es el mecanismo de la reacción
y (b) calcular el valor de todos los parámetros.

[A] (mM) V V V V V
0,125 3,213x10-9 3,795 x10-9 6,126 x10-9 8,712 x10-9 11,252 x10-9
0,250 5,708x10-9 6,753 x10-9 10,969 x10-9 15,726 x10-9 20,424 x10-9
0,500 9,333x10-9 11,066 x10-9 18,137 x10-9 26,319 x10-9 34,475 x10-9
1,000 13,675x10-9 16,257 x10-9 26,941 x10-9 39,685 x10-9 52,552 x10-9
[B] (mM) 7,1x10-3 8,8x10-3 17,7x10-3 35,4x10-3 70,8x10-3
Solución: Secuencial al AZAR;

4.-Se ha aislado la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa de Penicillium duponti. Para establecer el

mecanismo de la reacción catalizada por esta enzima se midieron las velocidades iniciales a
pH 8,0 y 25ºC para concentraciones variables de glucosa-6-fosfato en presencia de
concentraciones fijas de NADP+. Los resultados aparecen expuestos en la siguiente tabla, en
donde las velocidades iniciales de la reacción se expresan en unidades / ml. Determinar el
mecanismo y calcular el valor de los parámetros cinéticos.

[Gluc.-6-P] Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad

(mM)
0,067 0,314 0,374 0,414 0,496 0,560
0,089 0,380 0,453 0,501 0,600 0,679
0110 0,433 0,516 0,571 0,684 0,773
0,180 0,563 0,671 0,742 0,889 1,005
0,450 0,785 0,935 1,035 1,239 1,401
[NADP] 0,045 0,067 0,089 0,180 0,450
(mM)
Solución: Secuencial al AZAR

5.- La N-metilglutamato deshidrogenasa de Pseudomonas aminovorans cataliza la oxidación

de N-metil-L-glutamato (NMLG), actuando como aceptor de electrones el 2,6-
diclorofenolindofenol (2,6 DFIF). Para determinar el mecanismo cinético de la reacción se
midieron las velocidades iniciales para concentraciones variables de N-metil-L-glutamato en
presencia de concentraciones fijas del aceptor de electrones. Las reacciones enzimáticas se
llevaron a cabo en tampón fosfato potásico 0,2 M, pH 7,0 y 25ºC, y los resultados obtenidos
aparecen expuestos en la siguiente tabla, en donde las velocidades iniciales de la reacción se
expresan en mU/ml de la mezcla de reacción. Establecer el mecanismo cinético y calcular el
valor de todos los parámetros cinéticos.

[NMLG] Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad

(mM)
0,04 1,587 2,127 2,325 2,439 2,702
0,08 2,083 3,030 3,571 3,846 4,166
0,10 2,222 3,333 3,846 4,166 4,761
0,20 2,564 4,166 5.000 5,555 6,666

[2,6DFIF] 0,05 0,100 0,150 0,250 0,500

(mM)
Solución: Ping-Pong;

6.- Se emprendió el estudio cinético de la monoaminooxidasa mitocondrial de hígado de rata

con objeto de determinar su mecanismo de acción. La enzima cataliza la reacción:
R-CH2-NH2 + O2 + H2O  R-CHO + NH3 + H2O2
La cual se siguió midiendo la variación en la absorbancia a 250 nm, longitud de onda a la que
absorbe el benzaldehido, producto de la oxidación de la benzilamina en presencia de
concentraciones fijas de O2. Los resultados aparecen expuestos en la siguiente tabla, en donde
las velocidades iniciales de la reacción se expresan en unidades arbitrarias. Se pide: (a) el
mecanismo de la reacción y (b) el valor de los parámetros cinéticos.

[Benzilamina] Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad

(mM)
0,20 0,609 0,716 0,775 0,904
0,25 0,666 0,794 0,870 1,027
0,50 0,809 1,016 1,136 1,432
1,00 0,901 1,175 1,351 1,792
[Oxígeno] (mM) 0,095 0,170 0,230 0,740
Solución: Ping-Pong;

7.- La hexoquinasa citoplasmática de cerebro cataliza la formación de glucosa-6-fosfato y de

ATP-Mg. Para dilucidar el mecanismo cinético se han medido las velocidades de la reacción a
diferentes concentraciones de sustrato. La tabla siguiente resume estas experiencias, en donde
las velocidades se expresan en unidades arbitrarias. Determinar el mecanismo cinético de la
reacción y el valor de todos los parámetros cinéticos.

[ ATP-Mg] Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad

(mM)
0,10 0,59 0,67 0,76 0,88 1,00
0,15 0,80 0,90 1,00 1,20 1,40
0,20 0,98 1,10 1,25 1,45 1,70
0,33 1,30 1,50 1,70 2,00 2,30
1,00 2,00 2,30 2,60 3,00 3,60
[Glucosa] 0,033 0,040 0,050 0,067 0,100
(mM)
Solución: Secuencial al AZAR;

8.- La glicerol deshidrogenasa de Aerobacter aerogenes, es una enzima que cataliza la

reacción:
NAD+ + Glicerol  Dihidroxiacetona + NADH + H+
Para elucidar el mecanismo de la reacción, se midieron las velocidades iniciales para
concentraciones variables de NADH en presencia de concentraciones fijas de dihidroxiacetona.
Los ensayos enzimáticos se llevaron a cabo a pH 6,1 y 27ºC de temperatura. Las velocidades
iniciales de la reacción se expresan en moles de NADH/min. mg de proteína. Determinar
el mecanismo de la reacción y calcular el valor de todos los parámetros cinéticos.
[NADH] Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad
(mM)
0,040 4,000 5,185 7,000 9,722 12,727
0,054 4,545 6,086 8,092 11,200 14,000
0,080 5,494 7,179 9,333 12,727 15,384
0,150 6,896 8,642 11,200 15,053 17,543
1,000 8,695 10,768 13,725 17,500 20,000
[DHA] (mM) 0,30 0,43 0,63 1,00 1,50

Solución: Secuencial Ordenado;

9.- Sea una enzima que cataliza la reacción:

A + B =============== S + P + H+
Para determinar el mecanismo de la reacción se han medido las velocidades iniciales de la
reacción para concentraciones variables de A, en presencia de concentraciones fijas de B. La
marcha de la reacción se ha seguido mediante la valoración, a pH constante, de los protones
liberados. Las velocidades de la reacción se expresan en moles de H+ liberados / ml x min. y
vienen dadas en la siguiente tabla:

[ A] (mM) Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad

0,20 16,529 28,985 54,054 95,238
0,25 19,608 33,898 60,606 105,263
0,40 27,027 45,455 76,923 125,000
0,50 30,769 51,282 85,106 133,333
1,00 42,553 68,966 105,263 148,148
2,00 53,333 83,333 121,212 166,667
[ B ] (mM) 2,0 4,0 10,0 40,0

Solución: Secuencial al AZAR;

10.- La enzima quelatasa cataliza la inserción del hierro en las porfirinas, para formar los
grupos hemo, el hierro puede ser sustituido por el cobalto o el cinc.
En la experiencia siguiente se ha medido por espectrofotometría la velocidad de fijación del
cobalto sobre la protoporfirina IX, a diferentes concentraciones de cobalto y de protoporfirina.
En la siguiente tabla se expresan las velocidades en nmoles de Co-hemo formado por minuto.

[ Co ] ( M) Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad

4 2,70 3,20 3,90 4,90
6 3,50 4,10 5,00 6,30
8 4,10 4,80 5,80 7,35
10 5,55 5,30 6,50 8,20

[protoporf.] (M) 2,5 3,3 5,0 10,0

Solución: Secuencial al AZAR;

11.- En una reacción enzimática con dos sustratos A y B se midieron las velocidades iniciales
en  moles/ml min. para distintas concentraciones de A, en presencia de una concentración fija
de B. Los resultados se expresan en la tabla siguiente. Determinar el mecanismo de la reacción
y el valor de todos los parámetros cinéticos.
[A] (M) Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad
1,0x10-4 3,030 5,755 12,500 20,513
2,0x10-4 3,419 6,584 14,815 25,397
5,0x10-4 3,704 7,207 16,667 29,630
1,0x10-3 3,810 7,442 17,391 31,373
[B] (M) 1,0x10-3 2,0 x10-3 5,0 x10-3 10,0 x10-3
Solución: Secuencial al AZAR;
12.- En una reacción de una enzima con dos sustratos A y B se midieron las velocidades
iniciales expresadas en M / min. Para distintas concentraciones de A en presencia de
concentraciones fijas de B. Los resultados se indican en la siguiente tabla. Determinar el
mecanismo de la reacción y el valor de todos los parámetros cinéticos.

[A] (M) velocidad Velocidad velocidad Velocidad

8,35x10-6 15,75 x 10-6 13,80 x 10-6 12,50 x 10-6 11,11 x 10-6

1,00x10-5 18,52 x 10-6 16,00 x 10-6 14,08 x 10-6 12,50 x 10-6
1,25x10-5 23,58 x 10-6 19,10 x 10-6 16,66 x 10-6 13,90 x 10-6
2,00x10-5 33,33 x 10-6 26,70 x 10-6 21,74 x 10-6 18,60 x 10-6
[B] (M) 12,5x10-6 0,92 x10-6 0,48 x10-6 0,3 x10-6
Solución: Ping-pong; Vmax = 3,2 x 10-4 M / min.; KA = 1,6 x 10-4 M; KB = 2,7 x 10-6 M.

13.-La fosfolipasa A2 cataliza la hidrólisis del enlace éster en posición 2 de los 1,2-
diacilfosfolípidos. La enzima requiere la presencia de iones calcio. Las velocidades iniciales de
la reacción se expresan en moles de producto /min. x mg de proteína. Determinar el
mecanismo de la reacción y el valor de todos los parámetros cinéticos.
Los datos para poder obtener los parámetros cinéticos se tienen que obtener a partir del
gráfico primario en el cual las concentraciones de dibutillecitina (DBL) son fijas y varían
las concentraciones de calcio.

[DBL] (mM) Velocidad Velocidad Velocidad Velocidad

2,5 0,60 1,07 1,45 1,75
5,0 0,83 1,40 1,85 2,20
10,0 1,00 1,70 2,15 2,50
20,0 1,15 1,85 2,35 2,70

[Ca2+] (mM) 0,568 1,135 1,700 2,270

14.- Una enzima cataliza una reacción entre dos sustrato A y B:

A +B C+D
Al representar 1/v frente a 1/[A] para las distintas concentraciones de B, se obtiene una serie de
rectas paralelas, lo que nos indica que se trata de un mecanismo _____ _____.
Si a continuación representamos frente a 1/[B] los valores de los puntos de corte con el eje de
abscisas del gráfico primario obtenemos el gráfico secundario de la figura 1,mientras que si
representamos los puntos de corte con el eje de ordenadas del gráfico primario obtendremos el
gráfico secundario de la figura 2. Indicar, para cada uno de los gráficos secundarios obtenidos,
la ecuación de cada recta y los parámetros cinéticos indicados en los recuadros
correspondientes.
Ecuación de la recta para el gráfico 1

Puntos de corte con el eje de abscisas =

Ecuación de la recta para el gráfico 2

Puntos de corte con el eje de ordenada =

(1) (2)