ICB 420-1

Biocatálisis y reactores enzimáticos

Pontificia Universidad Católica de Valparaíso
Ayudantía N°1: Determinación de actividad enzimática

1. La pendiente de la gráfica concentración de glucosa vs tiempo, obtenida utilizando un

medio de reacción de 60 ml de lactosa (250g/L) y 2 mg de enzima, es 0,678 g/L*min.
Determinar la actividad específica de la enzima.

2. Se dispone de una solución enzimática de β-galactosidasa, la cual se desea caracterizar

en términos de su actividad enzimática. Se sabe que la β-galactosidasa cataliza la
hidrólisis de lactosa en glucosa y galactosa, y que su actividad puede ser medida
mediante la determinación de la concentración de glucosa liberada en una solución de
lactosa.
Según su proveedor, presenta una actividad de 5 UI/mg de preparado. Definiendo la
unidad de actividad como la cantidad de preparado permite hidrolizar Lactosa y obtener
1 μmol de glucosa por minuto bajo condiciones de pH y temperatura de 7,5 y 37°C
respectivamente. Sin embargo, debido al prolongado tiempo de almacenaje se desea
comprobar la actividad de esta formulación para lo que se lleva a cabo una reacción con
10 mL de una solución de 100 (g/L) de Lactosa a la que se adicionan 0.5 mL de enzima a
(31,5 g/L) a distintos tiempos bajo las condiciones antes mencionadas. Indique si la
actividad enzimática del preparado se mantiene; en caso contrario indique el porcentaje
de actividad residual.

Tiempo [min] Concentración de Glucosa [g/L]

0 0,25
5 2,45
10 4,6
15 6,89
20 8,75
25 9,92
30 10,75
35 11,35

3. Una proteína comercial (Protease M Amano) obtenida desde Aspergillus oryzae presenta
según su proveedor una actividad de 3 UI/mg de preparado. Definiendo la unidad de
actividad como la cantidad de preparado que permite hidrolizar caseína y obtener 1
μmol (181 μg) de tirosina (detectada con el reactivo de Folin) por minuto bajo
condiciones de pH y temperatura de 7.5 y 37oC respectivamente. Sin embargo, debido
al prolongado tiempo de almacenaje se desea comprobar la actividad de esta
formulación para lo que se lleva a cabo una reacción con 10 mL de una solución de 230
(g/L) de caseína a la que se adicionan 0.5 mL de enzima a (80mg/L) a distintos tiempos
bajo las condiciones antes mencionadas. Indique si la actividad enzimática del preparado
se mantiene; en caso contrario indique el porcentaje de actividad residual.

AYUDANTE GONZALO LEIVA CARLESI 1

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Biocatálisis y reactores enzimáticos
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso
Ayudantía N°1: Determinación de actividad enzimática

Los resultados obtenidos son:

Tiempo [min] Concentración [µg/ml]

0 1,21
3 6,89
6 12,86
9 18,52
12 24,22
15 28,66
20 30,54
25 31,96

4. La hidroxilación del colesterol a 7-α-hidroxicolesterol es el primer paso en la degradación

del colesterol en ácidos biliares, catalizada por el colesterol 7-α-hidroxilasa (citocromo
P450 7A1). El colesterol se puede medir mediante un ensayo flurométrico y la
concentración de colesterol se puede determinar utilizando una curva de calibración
adecuada. Los siguientes resultados se obtuvieron al agregar 1 ml de una muestra que
contiene actividad de la enzima colesterol 7-α-hidroxilasa, a 9 ml de una solución de 50
g/L de colesterol en aceite (la masa molecular del colesterol es 386 [g/mol]

Tiempo de reacción [s] Colesterol [mg/ml]

0 0,45
30 0,432
50 0,42
100 0,39
180 0,342
240 0,306
320 0,285
360 0,271
420 0,263

Determinar la actividad en la muestra de 7-α-hidroxilasa.

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