Evaluación de Esterilidad del Suero Fisiológico: Resultados de Prueba y Análisis

Responsables

Alcance
Este POE se realizó con el fin de aprender a realizar una prueba correcta de esterilidad a un
producto farmacéutico. En este caso se utilizó suero fisiológico.
El personal encargado para realizar esta prueba son: microbiológicos, departamento de
control de calidad y farmacéuticos.
La técnica utilizada para poder analizar el producto farmacéutico fue la prueba de esterilidad
(USP 43, capítulo 71), esta prueba se hizo con el fin de determinar si se encontraban
microorganismos en el producto estéril utilizado.
Objetivo
Aprender a realizar la prueba de esterilidad a productos farmacéuticos para determinar si
efectivamente el producto farmacéutico empleado es estéril o no; esto con el fin de poder
garantizar la seguridad del producto y que cumpla con los estándares de calidad.
Metodología
1) En este laboratorio se realizó una prueba de esterilidad al producto farmacéutico suero
fisiológico, con el fin de poder confirmar que cumpliera como medicamento para uso
parenterales, es decir que sea estéril.
2) Primero se hizo una desinfección de la cabina y del mesón para eliminar cualquier
microorganismo, para esto se usó alcohol.
3) Para determinar si no había ningún microorganismo que pudiera contaminar el
producto farmacéutico, se hizo una prueba de superficie con los agares TSA y
Sabouraud, para identificar la presencia de microorganismos que pudieran estar
presentes en el mesón o en la cabina.
4) Se realizó un monitoreo microbiológico a los guantes del operario que le realizo la
prueba al producto farmacéutico para confirmar que no presentaban ningún tipo de
contaminación. Esta prueba se realizó 2 veces para cada mano, imprimiendo así los
dedos en el agar TSA y Sabouraud.
5) Por otro lado, se practicó una prueba de aire en la cabina, poniendo al lado derecho y
al lado izquierdo de esta 2 agar TSA y 2 agar Sabouraud, esto con el fin de determinar
si el espacio estaba contaminado con hongos o bacterias.
6) Se hicieron controles negativos y positivos a los respectivos agares, en el cual se
inoculó al control positivo del agar TSA el microorganismo S.aureus y al agar
Sabouraud el microorganismo C.albicans.
7) Luego se llevó el medicamento a la cabina de flujo laminar en el que el producto
farmacéutico se le hizo el método de filtración por membrana; en el cual, al suero
fisiológico se le hizo un lavado con peptona al 0.1%.
8) Después la membrana se cortó con ayuda de pinzas y tijeras previamente esterilizadas
y se llevó a incubar cada mitad de la membrana al caldo TSA y el caldo Tioglicolato.
Además, se repitió el proceso con una nueva membrana, pero esta vez se llevó a
incubar con microorganismos, los cuales fueron S.aureus para el caldo Tioglicolato y
el microorganismo C.albicans para el caldo TSA.
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9) También se hizo una prueba de promoción de crecimiento de los medios de cultivos

caldo TSA y caldo Tioglicolato, en el que se inocularon el microorganismo C.albicans
para el caldo TSA y el microorganismo S.aureus para el caldo Tioglicolato; esto con
el fin de que los medios estuvieran aptos para el crecimiento adecuado de los
microorganismos.
Control de calidad
Las pruebas que se deben realizar para este procedimiento son:
1. Prueba de monitoreos ambientales, en el cual se debe realizar monitoreos con ayuda
de isótopos o placas de contacto, a las superficies que puedan estar en contacto con
los implementos a utilizar, equipos, medios de cultivo y el producto farmacéutico que
puedan contaminar la muestra. Se debe de realizar el monitoreo microbiológico a los
guantes de los operarios. Y por último se debe de hacer una prueba al aire, dejando un
medio de cultivo sólido abierto en todo el procedimiento, para poder determinar si hay
algún microorganismo en el aire. Estos monitoreos se hacen con ayuda de los agares
TSA y Sabouraud. (USP 43, capítulo 1116).
2. También se debe de realizar una prueba de promoción de crecimiento de los medios
de cultivos para determinar, si los medios son aptos para que crezcan los
microorganismos. En esta prueba se inocula un microorganismo y llevar a incubar, ya
sea a 22°C para hongos o 32°C para bacterias, para poder observar el crecimiento de
estos (GTC 171 Microbiología de alimentos y alimento para animales, 2008).
3. Ya para finalizar, se debe realizar la prueba de esterilidad al producto farmacéutico; el
método que se utilizó para analizar el suero fisiológico fue por filtración por
membrana, para determinar que no hubiera microorganismos en el producto estéril.
Los medios de cultivo que se usan para esta prueba son, caldo TSA y el caldo
Tioglicolato (USP 43, capítulo 71).

Resultados
Caldo TS

Controles Resultados

negativo no hubo turbidez

positivo turbidez, crecimiento, score 2

muestra + microorganismo turbidez, crecimiento, score 2

muestra más oscuro que el control negativo

Caldo Tioglicolato

Controles Resultados
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negativo no hubo turbidez

positivo turbidez, crecimiento, score 2

muestra + microorganismo turbidez, crecimiento, score 2

muestra color más claro que el del control negativo

Agar TSA

Controle Resultado Mano Resulta Cabina Resultad Cabina Mesón

s s dos os

negativo crecimient derecha 1ufc derecha 1ufc más de más de

o por toda 500ufc 500ufc
la placa
más de
1000ufc,
colonias
de color
beige

positivo crecimient izquierd no hubo izquierda no hubo

o por toda a crecimi crecimie
la placa ento nto
más de
1000ufc

Agar Sabouraud

Controle Resultad Mano Resultad Cabina Resultad Cabina Mesón

s os os os
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negativo 1ufc derecha 3ufc derecha 1ufc, más de 18ufc,

pequeña 2 colonia 100ufc, colonias
de color colonias muy colonias filament
blanco filament diminuta, filament osas de
osas cremosa osas de color
blancas, color color blanco
y1 rosado blanco
colonia claro
cremosa
color
rosado
claro

positivo 150 ufc, izquierda 2 ufc izquierda 1 ufc

entre colonias 1 colonia
colonias blancas grande
sobre la filament
superfici osa color
e, y blanco
debajo
de esta,
colonias
blancas
cremosas

Análisis de resultados
Para la prueba de esterilidad se realizaron diferentes controles de calidad como el lugar de
trabajo, al operario, al ambiente y a un producto estéril.
Control de superficies: Para este control se utilizaron los medios de TSA para bacterias y
agar sabouraud para hongos. A las dos superficies que se les realizó el control de superficies
fue a la cabina de flujo laminar y al mesón de trabajo.
Mesón: En el TSA se observó que creció más de 500 UFC y en el agar sabouraud crecieron
18 UFC, los hongos que crecieron en el agar son filamentosos y de color blanco, algunos
hongos que pueden crecer en el sabouraud y que tiene estas características son Trichophyton
rubrum, Fusarium sp. (RODRÍGUEZ, 2017) (Zenner, n.d.) Algunos microorganismos que se
pueden encontrar en un laboratorio son bacterias como Bacillus anthracis, Bordetella
pertussis, Campylobacter, Clostridium, Pseudomonas pseudomallei, Salmonella typhi, entre
otros; y hongos como Coccidioides immitis, Cryptococcus neoformans, Trychophyton,
Cladosporium trichoides, Penicillium marnefei, Exophiala dermatitidis, entre otros.
(Mazzali, 2019)
Cabina: En el TSA se observó que creció más de 500 UFC y en el agar sabouraud creció más
de 100 UFC, los hongos que crecieron en el agar son filamentosos y de color blanco, algunos
hongos que pueden crecer en el sabouraud y que tiene estas características son Trichophyton
rubrum, Fusarium sp. (RODRÍGUEZ, 2017) (Zenner, n.d.)
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En ambos controles hubo una contaminación, esto ocurrió debido a que a la hora de hacer la
limpieza del mesón se utilizó alcohol; sin embargo, el alcohol puede no ser eficiente en la
remoción de los microorganismos, el mesón también debió haberse limpiado con hipoclorito
de sodio, el cual es el que se recomienda para limpiar las superficies del laboratorio. (USP 43,
capítulo 1072)
El control que se le realizó al mesón, la cual se puede inferir como clase ISO 6, no cumple
con lo establecido con la USP, ya que hubo un crecimiento alto de microorganismos en los
agares, como ISO 6 no debe haber un crecimiento de más de 3 UFC de microorganismos. El
control de la cabina, la cual debe ser de clase ISO 5, no cumple con lo establecido con la
USP, ya que en los agares se presenció crecimiento de microorganismos y como ISO 5 no
debe haber ningún crecimiento de microorganismos. (USP 43, capítulo 1116)
A cada agar se les realizó un control negativo, en el TSA hubo crecimiento de más de 1000
UFC y en el agar sabouraud 1 UFC de color blanco, algunos hongos que crecen en este agar y
tiene esa característica son Candida albicans, Penicillium candidum. (Gil, 2023) Estos agares
se pudieron haber contaminado por un mal manejo a la hora de servir los medios de cultivo
en cada caja de Petri. Como en el control negativo hubo crecimiento de microorganismos, se
invalidan los controles y se deben repetir la prueba. (USP 43, capítulo 797.150)
Control de guantes del operario: Para este control se utilizaron los medios de TSA para
bacterias y agar sabouraud para hongos En el TSA se encontró que creció 1 UFC en la mano
derecha y en la izquierda ninguna y en el agar sabouraud se halló que creció 3 UFC en la
mano derecha, estas colonias son filamentosas y de color blanco, algunos hongos que
pudieron contaminar la muestra son Trichophyton rubrum, Fusarium sp (RODRÍGUEZ,
2017) (Zenner, n.d.); y 2 UFC en la mano izquierda, la colonias son de color blanco, algunos
hongos que pudieron contaminar la muestra fueron Candida albicans, Penicillium candidum.
(Gil, 2023) Esta contaminación puede deberse a que el operario estaba contaminado y no
pudo ponerse los guantes estériles sin contaminarlos.
Este control de operario no cumple con lo establecido en la USP, ya que en los agares
utilizados hubo crecimiento de microorganismos, los guantes utilizados deben ser de clase
ISO 5, lo que quiere decir que en los agares no debía de haber crecimiento de
microorganismos. (USP 43, capítulo 1116) En los controles negativos de los agares se
presentaron crecimientos de microorganismos, algunos hongos que pudieron contaminar el
control son Candida albicans, Penicillium candidum. (Gil, 2023) Como en el control
negativo hubo crecimiento de microorganismos, se invalida la prueba y se vuelve a repetir.
(USP 43, capítulo 797.150)

Control ambiental: Para este control se utilizaron medios de cultivo como TSA para
bacterias y agar sabouraud para hongos En el TSA se encontró que creció 1 UFC en el lado
derecho de la cabina y ninguna bacteria en el lado izquierdo de la cabina y en el agar
sabouraud se halló que creció 1 UFC en el lado derecho de la cabina, esta colonia es cremosa
y de color rosa; y 1 UFC en el lado izquierdo de la cabina, esta colonia es filamentosa y de
color blanco, algunos hongos que pudieron contaminar los agares fueron Trichophyton
rubrum, Fusarium sp (RODRÍGUEZ, 2017) (Zenner, n.d.), esto pudo deberse a que tanto el
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lugar como el operario debió estar contaminado. Esto ya que antes de hacer el control
ambiental los operarios tuvieron que salir del laboratorio hacia el campus, lo que ocasionó
que los operarios perdieran su esterilidad y se contaminaran con bacterias y hongos presentes
en el ambiente, algunas bacterias como las Pseudomonas, Acinetobacter, Bacillus, que están
presentes en el suelo y agua, también se pueden encontrar los Staphylococcus o E. coli, y
algunos hongos como Alternaria, Cladosporium, Candida y Saccharomyces cerevisiae
(Flores, n.d.). Otra contaminación que pudo tener la cabina, fue que esta no se limpió
correctamente y en el control de superficie se encontró que esta estaba contaminada. Este
control ambiental no cumple con lo establecido en la USP para control ambiental, ya que
crecieron microorganismos en los agares y como la cabina debe ser de clase ISO 5, ósea que
deben haber 0 UFC. (USP 43, capítulo 1116) Esta prueba se debe repetir, ya que en el control
negativo hubo crecimiento en ambos agares, lo que significa que el agar estaba contaminado
o por un mal manejo del vertido en placa se contaminó. (USP 43, capítulo 797.150) Algunos
hongos que pudieron contaminar el agar sabouraud son Candida albicans, Penicillium
candidum. (Gil, 2023)
Control de muestra estéril: El producto estéril que se utilizó para hacer el control fue suero
fisiológico estéril, para esta prueba se utilizaron el caldo TS para hongos, levaduras y
bacterias aerobias; y el caldo tioglicolato para bacterias anaerobias y aerobias. En el caldo TS
se observó que el control de la muestra presentaba una coloración más oscura que la del
control negativo. Esta coloración se puede producir por un crecimiento bacteriano en la
muestra el cual puede producir pigmentos, otra posibilidad de este cambio de color puede ser
que las sustancias que estén presentes en la mezcla hayan reaccionado con el agar y se haya
producido un cambio de color. (Gil, 2023) En el caldo tioglicolato se encontró que el control
de la muestra es más clara de que del control negativo, esto puede ser debido a que la muestra
no contiene microorganismos o que los microorganismos presentes en la muestra están
metabolizando los componentes del agar de una manera que resulte de un cambio de color
menos pronunciado. (Gil, 2023)
Para confirmar si en la muestra hay crecimiento de microorganismos de ambos caldos, se
pudo hacer una coloración Gram y unos repliques en medios de cultivo sólidos, si en dado
caso de que en la coloración Gram haya presencia microbiana se debe repetir la prueba y si al
repetir la prueba la flora microbiana es idéntica se debe reportar como no conforme, en
cambio si la flora microbiana es distinta se repite la prueba con el doble de unidades (USP 43,
capítulo 797.150).

Bibliografía
● Usp 43 págs 15-26 apartado 797.150 (Pruebas de esterilidad)
● Usp 43 págs 31-34 apartado 797.300 (Ambientes controlados)
● USP 43 págs 7972-7986 apartado 1116 (Control Microbiológico y Monitoreo de
Ambientes de Procesamiento Aséptico)
● USP 43 págs 7718-7724 apartado 1072 (Desinfectantes y antisépticos)
● GTC 171 Microbiología de alimentos y alimento para animales (2008) Guía para la
preparación y producción de medios de cultivo.
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● Flores, J. (n.d.). Hongos ambientales - HONGOS AMBIENTALES Estos hongos en

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● RODRÍGUEZ, R. J. (2017, October 20). DIAGNÓSTICO DE HONGOS
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● Gil, M. (2023, April 17). Agar Sabouraud: qué es, fundamento, preparación y usos.
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● Gil, M. (2023, May 11). Caldo soya tripticaseína: qué es, fundamento, preparación,
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