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MÉTODOS DE ASEPSIA Y UBICUIDAD MICROBIANA

Nombres E-mail
Tosse Bravo Daniela Sofia danielatosse@unicauca.edu.co
Otaya Cabrera Maria Liceth Daniela danielaotaya@unicauca.edu.co
Laboratorio de Microbiología, Biología, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la
Educación, Universidad del Cauca
Fecha de realización de la práctica: 03/01/2021
Fecha de entrega de informe: 07/01/2021

1. RESUMEN
En esta práctica de laboratorio se realizaron diferentes técnicas de asepsia, utilizando
cajas de petri con medios sólidos, los cuales fueron expuestos a distintos ambientes,
para demostrar la ubicuidad de los microorganismos. En este caso se trabajó con
microorganismos provenientes de superficies, como el mesón del laboratorio y pared
interna de la incubadora, esto con el objetivo de observar y entender la importancia de
la higienización de las mismas para así evitar la proliferación de colonias en las muestras,
para ello se emplearon algunos inhibidores de crecimiento, quienes influyen en la
eficiente o no, eliminación de agentes microbianos, algunos de los compuestos que
fueron utilizados fueron: etanol al 70% e hipoclorito en distintas concentraciones.
Además se discutió los resultados de otros ambientes (aire, manos y mucosas)
reportados por otro grupo de laboratorio, datando que en cada ambiente hay presencia
de microorganismos.
2. RESULTADOS
2.1. Técnicas de asepsia
● Sin técnicas de asepsia

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● Con técnicas de asepsia

2.2. Ubicuidad microbiana

2.2.1. Microorganismos en el aire
2.2.1.1. Sobre la incubadora

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2.2.1.2. En el pasillo

2.2.1.3. En el baño

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2.2.1.4. Dentro de la cámara de flujo laminar apagada

2.2.1.5. Dentro de la cámara de flujo laminar encendida

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2.2.1.6. Al lado del mechero encendido

2.2.2. Microorganismos en superficies

2.2.2.1. Mesón del laboratorio sin desinfectar

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2.2.2.2. Mesón desinfectado con etanol al 70%

2.2.2.3. Mesón desinfectado con hipoclorito al 5,25%

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2.2.2.4. Mesón desinfectado con hipoclorito al 2,5%

2.2.2.5. Mesón desinfectado con hipoclorito al 0,5%

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2.2.2.6. Pared interna de la incubadora

2.2.3. Microbiota del cuerpo humano

2.2.3.1. Manos

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2.2.3.2. Mucosas
● Fosas Nasales

● Lengua

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● Parpado

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS.

I) Registrar en una tabla los siguientes ítems: número total de colonias -UFC- por
ambiente muestreado, tipo de colonia según color, textura, forma, borde y margen
(figura 10), número de colonias de cada tipo.
Respuesta:
Tabla 1. Resultados Técnicas de asepsia

Forma Elevación Margen Color Numero de

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colonias

Sin técnicas de asepsia Irregular Elevada Entero Amarillo ≈8

Con técnicas de asepsia No No presenta No No 0

presenta presenta presenta

Tabla 2. Resultados microorganismos en el aire

Ambiente Forma Elevación Margen Color Numero de

colonias

Sobre incubadora Circular Plana Ondulada Amarillo/Naranja ≈2

Pasillo Irregular Plana Ondulada Blanco ≈2

Baño Circular Plana Ondulada Blanco 1

Dentro de la cámara Circular Elevada Ondulado Amarillo/Naranja 3

de flujo laminar
apagada

Dentro de la cámara No No No No presenta 0

de flujo laminar presenta presenta presenta
encendida

Al lado del mechero Puntiforme Plana Entero Blanco ≈80

encendido

Tabla 3. Resultados microorganismos en superficies

Ambiente Forma Elevación Margen Color Numero de

colonias

Mesón sin Irregular Plana Ondulado Amarillo/Nara ≈10

desinfectar nja

Mesón Irregular Plana Ondulado Amarillo/Nara ≈15

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desinfectado con nja

etanol al 70%

Mesón No presenta No presenta No presenta No presenta 0

desinfectado con
hipoclorito al
5,25%

Mesón No presenta No presenta No presenta No presenta 0

desinfectado con
hipoclorito al 2,5%

Mesón No presenta No presenta No presenta No presenta 0

desinfectado con
hipoclorito al 0,5%

Pared interna de la Irregular Plana Filamentoso Blanco ≈20

incubadora

Tabla 4. Resultados microbiota del cuerpo humano

Ambiente Forma Elevación Margen Color Numero de

colonias

Manos Circular/Irregular Plana Ondulado Amarillo/Naranja ≈40

Fosas Nasales Irregular Elevada Filamentosa Amarillo claro 1

Lengua Circular Convexa Ondulado Amarillo/Naranja ≈40

Parpado Irregular Plana Ondulado Blanco ≈20

II) Con base en los resultados resolver las siguientes preguntas.

a. ¿Existen diferencias en la abundancia y diversidad de los microorganismos
dependiendo del ambiente muestreado?. Sustentar la respuesta.

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Respuesta: Si, ya que puede presentarse una contaminación por agentes

internos y externos, es decir que los agentes internos pueden ser la
presencia de esporas en el ambiente y el lugar donde se almacenan las
muestras. Los agentes externos se dice que es por parte del ambiente;
todas las personas que ingresan al laboratorio, esto incluye la
manipulación de equipos y superficies como suelos, sillas, mesones,
tablero, entre otros; Pueden impurificar el espacio designado al análisis
microbiano, además cabe resaltar que este agente externo se encuentra
expuestos a diferentes tipos de lugares y por ende a diferentes
microorganismos y por tanto se va a reflejar con gran escala en los suelos
del laboratorio.

b. ¿Son similares o diferentes los microorganismos que se encuentran en

cada uno de los ambientes muestreados? Sustentar la respuesta.
Respuesta: Se encontraron diferentes microorganismos en los distintos
lugares de muestreo, ya que por su caracterización morfológica se
hallaron lisos, ondulados, irregulares, circulares y demás; También se
puede evidenciar en la coloración que presentaron.

III) Consultar y hacer una lista con nombres científicos de cinco microorganismos
comunes en los ambientes muestreados.
Respuesta: Los microorganismos han colonizado con éxito todos los ambientes
susceptibles de vida que existen en nuestro planeta. Habitan en las aguas oceánicas y
continentales, en las partículas de polvo y en los suelos de ecosistemas de todas las
franjas climáticas. Muchos de ellos se han adaptado a vivir en el interior de organismos
pluricelulares con los que han establecido relaciones de parasitismo, comensalismo e
incluso de simbiosis. Además dentro de este grupo diverso de microorganismos, hay
benéficos y fitopatógenos.

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Teniendo en cuenta lo anterior, los microorganismos más comunes en ambientes de

superficie terrestre son: Bacterias: Cureus, Streptococcus, Sthaphylococcus,
Pseudomonas y Micrococcaceae.

IV) Con base en la lista realizada, seleccionar tres microorganismos y consultar sobre su
clasificación taxonómica, su metabolismo y su importancia ecológica.
Respuesta:
● Streptomyces
Clasificación Taxonómica
Dominio: Bacteria
Filo: Actinobacteria
Orden: Actinomycetales
Suborden: Streptomycineae
Familia: Streptomycetaceae
Género: Streptomyces

Metabolismo e importancia.

Se encuentran predominantemente en suelos y en la vegetación descompuesta y la mayoría

produce esporas en los extremos de las hifas aéreas. Las especies del género Streptomyces
se caracterizan por poseer un metabolismo secundario (rutas metabólicas no requeridas
para la supervivencia) complejo y es el género más extenso de actinobacterias, un grupo de
bacterias gram-positivas de contenido GC generalmente alto. Dentro de su importancia se
producen numerosos antibióticos de uso clínico como estreptomicina, ácido clavulánico,
neomicina, cloranfenicol, etc. También frente a insecticidas y diferenciación mediante el
estudio de los mutantes carentes de sus genes. Las Streptomyces raramente son patógenas,
aunque pueden producir infecciones en humanos y en las plantas, ocasionando costras.

● Nitrobacter

Clasificación Taxonómica:
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Reino: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Alphaproteobacteria
Orden: Rhizobiales
Familia: Bradyrhizobiaceae
Género: Nitrobacter

Metabolismo e importancia

Es un género de bacterias gram negativas, la mayoría tiene forma de bastón, se conocen

comúnmente como nitrobacterias, y son quimioautotróficas que participan activamente en el
ciclo del nitrógeno. Las bacterias nitrificantes o nitrobacterias se clasifican como
quimiolitótrofos obligados, Esto significa que deben utilizar sales minerales inorgánicas como
fuente de energía y por lo general no pueden sintetizar la materia orgánica, deben oxidar
amoníaco y nitritos para suplir sus necesidades de energía y fijar el dióxido de carbono
inorgánico (CO2) para cubrir sus necesidades de carbono; Secretan una sustancia pegajosa
esencial que la utilizan para adherirse. En cuanto a su importancia desempeñan un papel
esencial en la acuaponía. Primeramente, las bacterias nitrosomonas convierten el amoníaco en
nitritos. Luego, las nitrobacterias convierten los nitritos en nitratos, de manera que son
fácilmente absorbidos por las plantas. Además, juegan un papel importante en el ciclo del
nitrógeno por oxidación de nitrito en nitrato en el suelo.

● Actinomyces
Clasificación Taxonómica:
Dominio: Bacteria
Filo: Actinobacteria
Orden: Actinomycetales
Suborden: Actinomycineae
Familia: Actinomycetaceae
Género: Actinomyces

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Metabolismo e importancia.

Son microorganismos unicelulares formados por micelios no tabicados, los cuales se observan
como filamentos ramificados que pueden fragmentarse y originar segmentos en forma de cocos
y bastones. Es un género de bacterias definido por Harz en 1877, del tipo gram-positivo. Algunas
especies son anaerobias, mientras que otras son facultativas anaerobias. Las especies de
Actinomyces no forman esporas, y, mientras que las bacterias individuales son esféricas, las
colonias forman estructuras semejantes en forma a las hifas de los hongos. Muchos
Actinomyces son patógenos oportunistas de los seres humanos y de otros mamíferos.

3. ANÁLISIS DE RESULTADOS
● Técnicas de asepsia
En el laboratorio de microbiología es imprescindible trabajar con material y soluciones estériles
con la finalidad de que los resultados que se obtengan correspondan a microorganismos que
están presentes en la muestra de estudio y no a contaminantes que proceden del medio; para
ello se utilizan las técnicas asépticas, las cuales son un conjunto de procedimientos y actividades
que se realizan con el fin de disminuir al mínimo las posibilidades de contaminación microbiana
en el laboratorio. Inicialmente, cuando se realizó el muestreo, sin tener en cuenta las técnicas
de asepsia se obtuvo como resultado la presencia de microorganismos (Tabla 1), esto debido a
que la muestra se expuso a diferentes contaminantes como lo fueron la saliva, la manipulación
de los equipos sin esterilizar, el aire, etc; caso contrario a la muestra sobre la cual si se aplicaron
todos los correctos procedimientos de esterilización, en donde, como se muestra en la tabla 1
no se generaron colonias en la misma gracias a las técnicas de asepsia.
● Ubicuidad microbiana
- Microorganismos del aire
La ubicuidad de los microorganismos se basa principalmente en tres características: su tamaño
pequeño, el cual les permite una gran capacidad de dispersión, su variabilidad, y flexibilidad
metabólica, que les permite tolerar y adaptarse rápidamente a condiciones ambientales
desfavorables.

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El aire no posee microorganismos propios, pero se conoce que éstos son capaces de crear
estructuras especializadas que les ha permitido resistir y sobrevivir en este medio, además de
ser capaces de dispersarse en ambientes exteriores e interiores gracias a las corrientes de aire,
las cuales ayudan en la recolección de los microorganismos presentes en otros ambientes
naturales como el suelo, el agua, las plantas y la microbiota del ser humano.
Además, los microorganismos que se encuentran en el aire pueden ser transportados
rápidamente, en forma de bioaerosoles, a través de grandes distancias con el movimiento del
aire que representa el mejor camino de dispersión. Este transporte se realiza sobre las
partículas de polvo, la piel, fibras de la ropa, en gotas de agua o en gotas de saliva que son
expulsadas al toser, estornudar o hablar.
El método que se realizó para obtener resultados acerca de los microorganismos que
permanecen en el aire, fue la sedimentación en placa, el cual es un método sencillo y muy
económico, que permite obtener cultivos de los diferentes tipos de microorganismos presentes
en el ambiente. De acuerdo a los resultados que se encuentran descritos en la Tabla 2, se infiere
que en el aire siempre se van a encontrar en suspensión diferentes tipos de organismos (forma
y color). Debido a que no se tiene un número exacto de las colonias que se presentaron en las
muestras obtenidas de los diferentes sitios, no se podría deducir qué zona tiene mayor impacto
microbiano y/o cúal tiene un ambiente controlado de microorganismos. Pero, si se logró
identificar algunas características macroscópicas de los diferentes microorganismos obtenidos,
lo cual establece que la práctica fue satisfactoria.
- Microorganismos en superficies
En primera instancia, cuando se realizó el muestreo en la superficie (mesón del laboratorio), se
desarrollaron diferentes tácticas para obtener la muestra y hacer el respectivo cultivo en el
medio sólido. De ello se adquirieron 6 cultivos de microorganismos, los cuales fueron revisados
regularmente, y por efecto, se logró evidenciar que la superficie sin limpiar y la pared interna de
la incubadora presentaron proliferación de microorganismos en sus cultivos (Tabla 3), caso
contrario con las superficies que fueron previamente desinfectadas con hipoclorito, en las que
no se observó la aparición de agentes microbianos (Tabla 3). Cabe resaltar que los hipocloritos
de sodio son los compuestos más ampliamente usados a nivel industrial e institucional y vienen

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en forma líquida (hipoclorito de sodio) o sólida (hipoclorito de calcio). Su uso está limitado por
su efecto corrosivo, su inactivación por materiales orgánicos y su inestabilidad relativa. El
compuesto activo que se libera es el ácido hipocloroso, y es el más usado en desinfección de
superficies, en la lavandería, para tratamiento de agua y de algunos desechos. Por esta razón,
los hipocloritos actúan como un agente letal para varios microorganismos, virus y bacterias
vegetativas; pero siendo menos efectivo contra esporas bacterianas, hongos y protozoarios. En
este se postula que pueden inhibir reacciones enzimáticas claves para la célula, desnaturalizan
proteínas bacterianas e inactivan ácidos nucleicos. Finalmente se dedujo que el hipoclorito a
mayor concentración (menor dilución) mostrará mayor eficacia, mientras que si disminuye la
concentración (0.5% y 2.5%) habrá menos eficacia, lo que significa que no reducirá en un 100%
la carga microbiana presente en la superficie (mesón del laboratorio).
En segunda instancia, se desinfectó la superficie con etanol al 70%, siendo este alcohol un
agente desinfectante, que actúa de forma antimicrobiana, desnaturalizando las proteínas,
permitiendo la ruptura de la membrana de diferentes grupos microbianos. A concentraciones
de 60% - 80%, tanto el etanol como el isopropanol, son potentes agentes virucidas, inactivando
casi todas las especies de virus lipofílicos y muchos de los virus hidrofílicos.
Pero de acuerdo a los resultados obtenidos, se observó que hubo desarrollo de colonias (Tabla
3), después de desinfectar la superficie con etanol, lo cual deduce que éste no actuó
eficazmente, debido quizás, a que se encontraba a una concentración menor de la necesaria
para la óptima desinfección de la superficie, o también se debió a la resistencia del tipo de
microorganismo presente en ésta.
Finalmente, al no desinfectar ninguna superficie, se demostró con mayor facilidad la ubicuidad
microbiana, debido a que no se usa ningún método de asepsia, haciendo que se propaguen
diferentes grupos microbianos (Tabla 3).
- Microbiota del cuerpo humano
La microbiota humana es el conjunto de microorganismos, con su respectivo material genético,
que se localizan de manera normal en distintos sitios del cuerpo humano. Algunos de ellos no
tienen ningún efecto directo sobre la salud del ser humano, ya que mantienen una relación

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simbiótica; por lo que juegan un importante papel en el cuidado de la salud de la propia

persona.
Por tanto dentro de la microbiota del ser humano, está la flora de la piel que se clasifica en flora
residente y flora transitoria. La flora residente existe en la piel normal, de gente sana, son
permanentes y no pueden ser removidas totalmente y no son generalmente dañinas. Además
estos microorganismos no se pueden eliminar por fricción mecánica sola, por ello se debe
emplear un antiséptico antes de efectuar procedimientos invasivos. Existen otros
microorganismos que se transfieren a la piel de un modo u otro y se denomina flora transitoria.
Estos se hallan con mayor frecuencia en las infecciones asociadas a la atención sanitaria y es por
lo tanto el blanco principal de la higiene. Estos microorganismos se pueden transmitir después a
otros pacientes o al medio ambiente si no se eliminan por fricción mecánica, por las
propiedades detergentes del agua y el jabón o por agentes antisépticos.
Ahora bien, en las manos existen miles de bacterias, microbios, gérmenes y otra gran cantidad
de agentes infecciosos que son imperceptibles para el ojo humano. Las manos, y sobre todo las
manos sucias, conforman un ecosistema ideal para el crecimiento de bacterias y otros
microorganismos. De igual manera ocurre con el lavado de manos que solo es realizado
únicamente con agua de grifo el cual quitó partículas grandes de suciedad y de algunas
bacterias, pero por otro lado, millones de bacterias fueron dejadas, como se observa en la tabla
4, ya que el enjuague de las manos con agua de grifo no es una manera eficaz de limpiarlas
completamente.
Mantener las manos limpias es un requisito obligado para evitar la transmisión de
enfermedades e infecciones al resto del organismo, por lo que lavar las manos con jabón y agua,
reduce el número de bacterias. Sin embargo, según Águila (2004) la eliminación de todas las
bacterias depende del tipo de antibacterial, como del tiempo que se emplea en el lavado, ya
que las manos se deben lavar al menos durante un minuto completo.
El segundo análisis se realizó en las fosas nasales (mucosa nasal), con un resultado aproximado
de 1 colonia de forma irregular, un resultado reducido. Las fosas nasales están protegidas por
una mucosa que está conformada por un epitelio de células productoras de moco, que recubre
los conductos respiratorios, con una capa fina, y que tiene como función bloquear bacterias,

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virus, sustancias nocivas para el organismo que ingresan por el aire; así mismo, proporcionar la
humedad y la temperatura adecuada del ambiente al ingreso a los pulmones. Ahora bien, el
número minúsculo hallado en la muestra analizada, se dio gracias a que la mucosa posee una
enzima llamada lisozima la cual es la encargada en destruir la numerosa cantidad de gérmenes
presentes en el aire, además de existir una red linfática interna y cerrada encargada de la
defensa inmunitaria. Esta red fabrica los macrófagos, células especializadas en destruir los
microbios que entran con el aire aspirado. Por lo tanto en esta cavidad respiratoria no se
encontrará mayor número de bacterias, no tiene medios para la proliferación óptima.
La flora bacteriana oral se va formando con el paso de los años, denominada microbiota oral. La
cavidad oral humana se encuentra en óptimas condiciones de humedad y temperatura (35°C)
para favorecer el crecimiento de hasta 100 millones de bacterias. Algunas bacterias mueren
llegando a la boca, desintegradas por las enzimas salivales, mientras que otras pasan al
estómago cuando la saliva es tragada, falleciendo por la acción de las enzimas estomacales. El
problema se manifiesta cuando las que logran sobrevivir actúan provocando daños en la boca.
Ahora, teniendo en cuenta los resultados de la tabla 5, en el primer análisis de la boca de un
estudiante, se encontraron alrededor de 40 colonias bacterianas con formas circulares, esto
porque, como se mencionó anteriormente, la cavidad oral cuenta con condiciones óptimas para
el crecimiento de ellas. Una acción importante a tener en cuenta es que el número de bacterias
en cada persona es inconstante a consecuencia de diferentes actos como lo son comer,
cepillarse, bostezar, toser, hábitos de higiene, entre otras.
Como última muestra, se examinaron los párpados oculares, donde se encontraron alrededor
de 20 o más colonias microbianas irregulares. Los párpados son un pliegue de piel puestos en la
parte inferior como en la superior del ojo, con el fin de proporcionar una cobertura de
protección contra agentes externos, naturalmente está conformado por varias especies de
Staphylococcus las cuales son resistentes a la respuesta inmune de las secreciones del ojo, de
hecho algunas bacterias cooperan en la respuesta inmune contra otras bacterias de diferente
origen. En algunos casos no se logra este objetivo con toda certeza, ya que puede surgir un
sobre-crecimiento de las bacterias naturales de los ojos, a causa de los cosméticos que están en
contacto con ellos y los párpados, además de las mismas manos del humano. De modo que el

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hallazgo de las unidades formadoras de colonias se pudo originar por alguna de estas dos
causas.
4. CONCLUSIONES
● Se evidenció la capacidad y facilidad de propagación de microorganismos.
● Se logró demostrar la ubicuidad de microorganismos en diversos lugares, además de la
importancia que se tiene para el control de la contaminación al momento de cultivar
cierto microorganismo, pudiendo observar los controles de asepsia en el laboratorio.
● De acuerdo a las concentraciones de los desinfectantes, se deduce que a mayor
concentración, hay mayor expectativa de acabar con la mayoría o casi toda actividad
microbiana.
● La condición microbiológica de los diferentes espacios está claramente relacionada con
la influencia del exterior, así como lo es el flujo de personas, entre otros.

5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
● MONTES, E., LLORET, I., & LÓPEZ, M. A. (2009). DISEÑO Y GESTIÓN DE COCINAS: Manual
de higiene alimentaria aplicada en el sector de la restauración. Díaz de Santos.
● ROGER Y. STANIER. (1992). MICROBIOLOGÍA. ENGLEWOOD CLIFFS, NEW JERSEY: Reverté,
S. A.
● SCOTT, B. &. (2009). DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO. PANAMERICANA.
● ATLAS, R. B. (2002). Ecología microbiana y Microbiología ambiental. Madrid: Pearson
education.
● E.M Gemma Mella A. Técnica Aséptica [Diapositivas Power Point]. Learning IIH.
https://www.hrrio.cl/documentos/eLearningIIH/profesionales/tecnicaaseptica

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