GUÍA N° 2: ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

FACULTAD CURSO AMBIENTE

LABORATORIO
CIENCIAS DE LA SALUD BIOQUÍMICA
MULTIFUNCIONAL

ELABORADO POR WILMER SILVA CASO APROBADO POR DENISSE CHAMPIN

VERSIÓN 001 FECHA DE APROBACIÓN Agosto 2019

1. LOGRO GENERAL DE LA UNIDAD DE APRENDIZAJE

Al finalizar la unidad, el estudiante reconoce los principios sobre dinámica, catálisis y las reacciones
enzimáticas para el estudio de las rutas metabólicas que regulan el metabolismo del ser humano.

2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO

• El estudiante comprueba la presencia de la catalasa en los tejidos animales y vegetales.

• El estudiante comprueba la acción hidrolítica de la amilasa presente en la saliva en el almidón.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

- 28 tubos de ensayo de 13 x 100 mm.

- 4 gradillas
- 3 placas Petri
- 4 vasos de precipitado de 100 mL
- 2 vasos de precipitado de 500 mL
- 1 pipeta de 20 mL
- 1 pipeta de 5 mL
- 5 goteros
- Mechero
- Baguetas
- Pinzas de madera para tubos
- 1 pizeta de agua
- 1 embudo
- Papel filtro

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 1 de 8

Material biológico:
- 6 cubitos de aproximadamente 1 cm3 de corazón de pollo, 6 cubitos de aproximadamente 1
cm3 de Rama de Apio y 6 cubitos de aproximadamente 1 cm3 de Papa.
- 2 cm3 de saliva.
Reactivos:
- Alcohol al 96%
- HCl 3M
- HCl 0.3 M
- NaOH 3M
- NaOH 0.3 M
- Lugol
- Reactivo de Benedict
- Solución de almidón a 2%
- 50 mL de Peróxido de Hidrógeno

4. PAUTAS DE SEGURIDAD

❖ MANEJO DE RESIDUOS

Una vez culminada la práctica de laboratorio, con ayuda del docente se procederá a la identificación y
segregación de los residuos generados (ejemplo: residuos químicos y/o residuos sólidos) para su manejo,
según se detalla a continuación:

Residuos químicos:

1. El docente verterá el residuo líquido que contiene el matraz en el sistema armado que se encuentra
dentro de la campana extractora o en la mesa indicada por el docente.
2. Agregar agua destilada al matraz, repetir el procedimiento N°01.
3. El alumno verterá el residuo que contiene el tubo de ensayo en el sistema armado indicado por el
docente.
4. Agregar agua destilada al tubo de ensayo (¼ del volumen del tubo), repetir el procedimiento N°03.
Nota:
- Usar guantes de seguridad durante este procedimiento.
- Usar la menor cantidad de agua.

Residuos Sólidos:

Según las indicaciones del docente se realizará la segregación de los residuos sólidos en los tachos
correspondientes para su recolección.

❖ SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Para el buen desarrollo de las prácticas de laboratorios todos los presentes dentro del ambiente práctico
deberán respetar las siguientes señales de obligación que tienen una “X” al lado derecho de la imagen, en
algunos casos son EPP o equipos de protección personal los cuales serán de uso obligatorio y en otros casos
serán procedimientos a seguir.

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 2 de 8

 5. FUNDAMENTO

INTRODUCCIÓN

Los peroxisomas son orgánulos pequeños limitados por una sola membrana. A diferencia de las
mitocondrias y los cloroplastos, los peroxisomas carecen de DNA y ribosomas. Por lo tanto, todas las
proteínas peroxisómicas son codificadas por los genes nucleares, se sintetizan en los ribosomas libres
del citosol y luego se incorporan a peroxisomas preexistentes o recién formados.
El tamaño y la composición enzimática de los peroxisomas varían considerablemente según los
diferentes tipos de célula. Sin embargo, todos los peroxisomas contienen enzimas que usan oxígeno
molecular para oxidar diversos sustratos y formar peróxido de hidrógeno.

Una de las enzimas capaces de reducir el peróxido de hidrógeno es la catalasa, ésta se encuentra sobre
todo en los peroxisomas y en menor medida, en el citosol y la fracción microsómica de la célula. Las
actividades más intensas se alcanzan en tejidos con alto contenido de peroxisomas (riñones e hígado).
En las células del sistema inmunitario, la catalasa protege a la célula contra su propio estallido
respiratorio.
La catalasa es una hemoproteína que contiene cuatro grupos hem. Puede actuar como una peroxidasa,
pero también es capaz de catalizar la desintegración del H2O2 formado por la acción de oxigenasas, a
agua y oxígeno. En esta reacción se usan una molécula de H2O2 como un sustrato donador de electrón,
y otra molécula de H2O2 como un oxidante o aceptor de electrón. Es una de las reacciones enzimáticas
más rápidas conocidas; destruye millones de moléculas de H2O2 en potencia perjudiciales por segundo.
En casi todas las circunstancias in vivo, la actividad de peroxidasa de la catalasa parece ser favorecida.

Por otro lado, las glándulas salivares son glándulas exocrinas que vierten su contenido en la cavidad
bucal. Tienen a su cargo la producción y secreción de saliva, la cual humedece y protege la mucosa bucal.
La saliva ejerce acciones anticariogénicas, inmunológicas, además de participar en la digestión de
alimentos. Las unidades secretoras de las glándulas están representadas por adenómeros acinosos, los
cuales vierten su secreción a la cavidad bucal por medio de un sistema de conductos excretores.

La proteína más abundante aportada a la saliva por los ácinos serosos es la amilasa salival o ptialina,
una enzima que degrada almidón y glucógeno. Se considera que continúa actuando en el estómago
hasta que el pH ácido del jugo gástrico la desnaturaliza.

La hidratación de los polisacáridos es esencial para la

acción de la amilasa, ésta enzima es específica de los
enlaces internos α-1,4 glucosídicos y no de los α-1,6.
Además, la amilasa no actúa sobre los enlaces α-1,4 de
los residuos glucosilo que sirven como punto de
ramificación.

La amilasa se produce sólo en las glándulas salivares y

en las células de los ácinos pancreáticos. De este modo,
la amilasa en suero elevada puede ser un signo de
pancreatitis. Lesiones en las glándulas salivares, tales
como paperas, pueden aumentar también los niveles de
amilasa en suero.

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 3 de 8

 6. PROCEDIMIENTO (DESARROLLO DE LA PRÁCTICA)

6.1 Actividad enzimática de la catalasa

A. Presencia de catalasa.

- Enumerar 3 tubos de ensayos y colocar 1cm3 de los tejidos indicados.

- Adicione 2 mL de peróxido de hidrógeno (H2O2) a cada tubo de ensayo.

- Medir la altura que alcanza la reacción del peróxido de hidrógeno desprendido en cada uno de los
tubos.
Anotar las observaciones

- Tome el tiempo en que se lleva a cabo la reacción.

- Describa la velocidad de desprendimiento del oxígeno en cada muestra.
- Interprete la reacción que se produce.
- La acción que tiene la catalasa sobre el peróxido de hidrógeno.

B. Superficie de contacto del sustrato (catalasa).

- Enumerar 3 tubos de ensayos y colocar 1cm3 de los tejidos indicados y rompa las paredes y
membranas celulares con ayuda de una bagueta.

- Adicione 2 mL de peróxido de hidrógeno (H2O2) a cada tubo de ensayo.

- Medir la altura que alcanza la reacción del peróxido de hidrógeno desprendido en cada uno de los
tubos.

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 4 de 8

Anotar las observaciones
- Tome el tiempo que en que se lleva a cabo la reacción.
- Describa la velocidad de desprendimiento del oxígeno en cada muestra.
- Interprete la reacción que se produce.
- La acción que tiene la catalasa sobre el peróxido de hidrógeno.

I. EFECTO DEL PH

Medio ácido
En una placa Petri agregue 3mL de HCl 3M y colocar 1cm3 de apio, papa y corazón. Dejar reposar por 1
minuto.

- Enumere tres tubos de ensayo y coloque en cada tubo de ensayo la muestra de corazón de pollo,
apio y papa, previamente procesado con HCl.
- Marque con plumón marcador el volumen del tejido-
- Adicione 2 mL de peróxido de hidrogeno a cada tubo de ensayo.

Medio Básico
En una placa Petri agregue 3mL de NaOH 3M y colocar 1 cm3 de apio, papa y corazón. Dejar reposar por
1 minuto.

- Enumere tres tubos de ensayo y coloque en cada tubo de ensayo la muestra de corazón de pollo,
apio y papa, previamente procesado con NaOH.
- Marque con plumón marcador el volumen del tejido.
- Adicione 2 mL de peróxido de hidrogeno a cada tubo de ensayo.

Anotar las observaciones

- Mida la altura que ha alcanzado la concentración de oxígeno desprendido en cada uno de los tubos.
- Describa la velocidad de desprendimiento del oxígeno.
- Compare los resultados con los de la experiencia anterior.
- Interprete la reacción bioquímica que se produce.

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 5 de 8

II. EFECTO COMPETITIVO DEL ETANOL

- Enumerar tres tubos de ensayo y agregar 3mL de Alcohol al 96% y coloque 1 cm3 corazón de pollo,
apio y papa Dejar reposar por 1 minuto.

- Marque con plumón marcador el volumen del tejido.

- Adicione 2 ml de peróxido de hidrógeno a cada tubo de ensayo.

Anotar las observaciones

- Mida la altura que ha alcanzado la concentración de oxígeno desprendido en cada uno de los tubos.
- Describa la velocidad de desprendimiento del oxígeno.
- Compare los resultados con los de la experiencia anterior.
- Interprete la reacción bioquímica que se produce.

III. EFECTO DE LA TEMPERATURA

- Enumerar tres tubos y colocar 1 cm3 de muestra, luego agregar 2 mL de agua destilada.
- Sostener cada una con una pinza de madera y calentar con el mechero. Dejar hervir durante 1 minuto.
- Desechar el agua destilada restante.

- Marque con plumón marcador el volumen del tejido.

- Adicione 2 ml de peróxido de hidrogeno a cada tubo de ensayo.

Anotar las observaciones

- Mida la altura que ha alcanzado la concentración de oxígeno desprendido en cada uno de los tubos.
- Describa la velocidad de desprendimiento del oxígeno.
- Compare los resultados con los de la experiencia anterior.
- Interprete la reacción bioquímica que se produce.

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 6 de 8

Actividad enzimática de la Alfa-amilasa

A. Obtención de la enzima amilasa

- Enjuagar la boca con abundante agua y luego masticar un trozo de papel filtro para estimular la
salivación. Los fluidos segregados son filtrados y el filtrado es colocado en un tubo de ensayo hasta
un volumen de 2 mL.
- La saliva obtenida es diluida en 20 mL de agua destilada, así se obtiene la preparación de enzima
base.

B. Hidrólisis enzimática del almidón

- Se enumeran 4 tubos de ensayo y se le agrega los reactivos según la tabla adjunta.

- El tubo 1, no se somete a baño maría.

- Los tubos 2, 3 y 4 se colocan en baño maría a 50° C, durante 5 minutos dejando que la amilasa vaya
hidrolizando al almidón.
- Una vez transcurridos los 5 minutos se sacarán los tubos del baño maría a los 4 tubos se les harán
las pruebas de Lugol.

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 7 de 8

 7. ENTREGABLES

Informe de Laboratorio
Instrucciones: Responda adecuadamente cada una de las preguntas que se presentan a continuación:

1. ¿Cuál es la estructura y función de los peroxisomas?

2. ¿Cómo se produce el ingreso de proteínas al peroxisoma?
3. ¿Cuáles son las funciones de las glándulas salivales?
4. Explique la función enzimática de la Catalasa en nuestro organismo.
5. ¿Cuál es la importancia de la amilasa en la boca?
6. ¿Cuáles son las enzimas de importancia clínica? Explique 4 de ellas.

8. FUENTES DE INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

- Gonzáles de Buitrago, J. 2005. Técnicas y métodos de Laboratorio Clínico. 2ªedición. Masson S.A.
Barcelona – España
- Alberts, B., Jonson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, W. Biología Molecular de la Célula.
4ta Edición. Garland Science, Taylor & Francis Group, Londres.
- Lodish, H., Berk, A., Matsudaira, P., Kaiser, C., Krieger, M., Darnell, J., Scott, M. 2008. Biología
Celular y Molecular. 5ta Edición. Editorial Médica Panamericana.
- Lehninger, Albert; Nelson, David. L.; Mitchael M. Cox. 2006. Principios de Bioquímica. 4 tª Edición.
Ediciones Omega.

100000S08A – Bioquímica Guía N° 2 – rev0001 Página 8 de 8