INTEGRACIÓN DEL CURSO BIOQUIMICA

Practico

Pregunta 1)

a. Aumento de TAG en el panículo adiposo con una dieta glucídica:

Cuando un animal se alimenta con una dieta rica en carbohidratos, hay varias razones por las cuales
los triglicéridos (TAG) pueden aumentar en el panículo adiposo. Los carbohidratos se descomponen
en el cuerpo para proporcionar glucosa, que es utilizada como fuente de energía o almacenada en
forma de grasa. Aquí hay una explicación detallada:
​ Elevación de glucosa en sangre:
● Una dieta rica en carbohidratos, especialmente aquellos de rápida absorción como
los azúcares simples, aumenta la concentración de glucosa en sangre.
● El aumento de glucosa estimula la liberación de insulina desde el páncreas.
​ Estimulación de la síntesis de ácidos grasos:
● La insulina actúa como una señal para la síntesis de ácidos grasos.
● En presencia de altas concentraciones de glucosa y la acción de la insulina, las
células adiposas pueden aumentar la captación de glucosa y convertirla en ácidos
grasos a través de la lipogénesis.
​ Formación de TAG:
● Los ácidos grasos sintetizados se combinan con glicerol para formar triglicéridos
(TAG), que son la forma principal de almacenamiento de grasa en el panículo
adiposo.
​ Activación de enzimas clave:
● Enzimas clave en este proceso incluyen la glucosa cinasa, que facilita la entrada de
glucosa en las células, y la acetil-CoA carboxilasa, que es esencial para la síntesis
de ácidos grasos.

b. Marcado con 13C en aminoácidos:

Cuando se suministra glucosa marcada con 13C a un animal, esta glucosa seguirá las rutas
metabólicas normales, pero con la particularidad de que los átomos de carbono marcados serán
incorporados en los productos finales. Aquí está la explicación:
​ Rutas metabólicas de la glucosa:
● La glucosa marcada con 13C sigue las rutas metabólicas normales de la glucosa,
como la glucólisis y el ciclo de Krebs, en las células.
​ Incorporación de 13C en intermediarios metabólicos:
● Durante estas rutas, los átomos de carbono marcados con 13C se incorporan en
intermediarios metabólicos como el piruvato y el oxalacetato.
​ Formación de aminoácidos:
● Estos intermediarios metabólicos, que contienen átomos de carbono marcados,
pueden ser utilizados en la síntesis de aminoácidos.
● Los aminoácidos resultantes llevarán el marcador de 13C.
​ Marcado en proteínas:
● Los aminoácidos marcados se incorporan en las proteínas durante la síntesis
proteica.
● Como resultado, algunas proteínas contendrán átomos de carbono marcados con
13C.
Pregunta 2)
Explicación del marcado de 13CO2 y etanol con 13C en un cultivo de levaduras que fermentan
cebada para la producción de cerveza:
​ Suministro de glucosa marcada con 13C:
● La glucosa marcada con 13C se suministra al cultivo de levaduras.
​ Incorporación de 13C en intermediarios metabólicos:
● La levadura lleva a cabo la glucólisis, donde la glucosa se descompone para formar
piruvato.
● Durante este proceso, los átomos de carbono marcados con 13C se incorporan en
intermediarios metabólicos, incluido el piruvato.
​ Inicio de la fermentación alcohólica:
● En la fermentación alcohólica, el piruvato se convierte en etanol y dióxido de carbono
(CO2).
● Este paso es llevado a cabo por la acción de las enzimas presentes en la levadura.
​ Liberación de CO2 marcado con 13C:
● Durante la fermentación, parte del piruvato marcado con 13C se convierte en 13CO2
y se libera al ambiente.
● Este CO2 liberado contiene átomos de carbono marcados con 13C.
​ Formación de etanol marcado con 13C:
● La otra parte del piruvato marcado con 13C se convierte en etanol.
● El etanol resultante lleva los átomos de carbono marcados con 13C, ya que
provienen de la glucosa marcada suministrada.

Pregunta 3)
Cuando las levaduras cambian de un metabolismo anaeróbico (fermentación) a un metabolismo
aeróbico (respiración aeróbica) debido a la presencia de oxígeno, la ruta metabólica principal será la
respiración aeróbica. Durante la respiración aeróbica, la glucosa se somete a una serie de reacciones
en presencia de oxígeno para producir dióxido de carbono (CO2), agua y ATP (energía). En este
contexto, el producto principal que se encontrará marcado con 13C será el CO2. Durante la
respiración aeróbica, la glucosa marcada con 13C se descompone en dióxido de carbono (13CO2) y
agua. Este CO2 liberado en el proceso contendrá átomos de carbono marcados con 13C, lo que
permite rastrear el destino de la glucosa en presencia de oxígeno. Este tipo de experimento es
valioso para comprender cómo las levaduras utilizan diferentes rutas metabólicas en respuesta a
condiciones cambiantes, y el marcado con 13C ayuda a seguir el flujo de carbono a través de estas
rutas metabólicas.

Glucosa:
● Es probable que la glucosa producida durante la fotosíntesis esté marcada con el isótopo de
oxígeno ¹⁸O. Durante la fotosíntesis, las plantas utilizan el agua como fuente de oxígeno para
formar glucosa.
H2O respiratoria:
● El agua liberada durante la respiración (H2O respiratoria) puede estar marcada con ¹⁸O, ya
que parte del agua utilizada en los procesos metabólicos proviene del agua absorbida por las
raíces.
Glucosa:
● Es probable que la glucosa producida durante la fotosíntesis esté marcada con el isótopo de
hidrógeno ²H. Durante la fotosíntesis, las plantas utilizan el agua como fuente de hidrógeno
para formar glucosa.
H2O respiratoria:
 ● El agua liberada durante la respiración (H2O respiratoria) puede estar marcada con ²H, ya
que parte del agua utilizada en los procesos metabólicos proviene del agua absorbida por las
raíces.

Pregunta 4)

a. Suministro de 2H2O y formación de N2H4+:

Cuando una planta es suministrada con agua marcada con 2H2O, el isótopo pesado de hidrógeno
(²H) puede incorporarse en compuestos nitrogenados. Uno de estos compuestos es la hidrazina
(N2H4).
Explicación:
​ Suministro de 2H2O:
● La planta absorbe agua marcada con 2H (²H2O) a través de las raíces durante la
transpiración y la fotosíntesis.
​ Incorporación de ²H en compuestos nitrogenados:
● Durante la fotosíntesis, el hidrógeno marcado con ²H se incorpora en compuestos
nitrogenados, como la hidrazina (N2H4).
​ Formación de N2H4+:
● La hidrazina puede sufrir una oxidación en el entorno celular, formando el catión
hidroxilamina (N2H4+).

b. Disminución de N2H4+ en oscuridad:

La disminución de N2H4+ en condiciones de oscuridad puede deberse a que la fotosíntesis, que es
el proceso principal para la incorporación de ²H en compuestos nitrogenados, se reduce o detiene en
ausencia de luz. Aquí está la explicación:
​ Reducción de la fotosíntesis en oscuridad:
● La fotosíntesis implica la absorción de luz para convertir el agua y el dióxido de
carbono en glucosa y oxígeno.
● En ausencia de luz (condiciones de oscuridad), la fotosíntesis se reduce o cesa.
​ Menor incorporación de ²H en compuestos nitrogenados:
● La reducción de la fotosíntesis implica una menor incorporación de ²H en
compuestos nitrogenados, incluida la hidrazina.
​ Disminución de N2H4+:
● Como resultado, la cantidad de N2H4+ disminuye debido a la falta de fotosíntesis y,
por lo tanto, menos incorporación de ²H en compuestos nitrogenados.
En resumen, la presencia de ²H en el agua suministrada puede llevar a la formación de N2H4+ en la
planta, pero esta formación puede disminuir en condiciones de oscuridad debido a la reducción de la
fotosíntesis.
Sí, es posible que los aminoácidos de aspartato en los rumiantes alimentados con pasturas cuya
celulosa esté marcada con 13C estén marcados. Esto se debe a las complejas interacciones
metabólicas y de fermentación microbiana en el sistema digestivo de los rumiantes. Aquí hay una
explicación detallada de las reacciones y vías involucradas:

Pregunta 5)
​ Consumo de pasturas marcadas con 13C:
● Los rumiantes consumen pasturas cuya celulosa contiene carbono marcado con
13C.
​ Fermentación microbiana en el rumen:
● La celulosa es digerida por microorganismos presentes en el rumen de los rumiantes
a través de un proceso de fermentación microbiana.
 ​ Producción de productos intermedios:
● Durante la fermentación, se producen productos intermedios como ácidos grasos,
compuestos orgánicos y gases, liberando carbono marcado con 13C.
​ Formación de ácidos grasos volátiles (AGV):
● Los productos intermedios, especialmente los ácidos grasos volátiles (AGV), son
absorbidos por las células epiteliales del rumen.
​ Absorción y síntesis de aminoácidos en el intestino:
● Los AGV y otros productos de la fermentación son absorbidos por el intestino
delgado.
● En el intestino delgado, estos productos se utilizan en la síntesis de aminoácidos.
​ Síntesis de aspartato a partir de oxaloacetato:
● Uno de los aminoácidos que se puede formar es el aspartato.
● El aspartato se sintetiza a partir del oxaloacetato, un intermediario del ciclo de Krebs.
​ Incorporación del carbono marcado en el aspartato:
● Dado que el carbono marcado con 13C está presente en los productos intermedios
de la fermentación, se incorpora en los compuestos orgánicos, incluido el aspartato.
En resumen, el carbono marcado con 13C en la celulosa de las pasturas puede seguir un camino a
través de la fermentación microbiana, la absorción en el intestino, y la síntesis de aminoácidos,
incluido el aspartato. Este fenómeno es un ejemplo de cómo la dieta de los rumiantes puede afectar
la composición isotópica de los productos metabólicos, proporcionando información valiosa en
estudios de ecología y nutrición animal.

Pregunta 6)
Suministro de nitrato con 16N a una planta y marcado de la rubisco:

a. Posibilidad de encontrar rubisco marcada con 16N:

Sí, es posible encontrar la rubisco marcada con el nitrógeno 16 (16N) suministrado en forma de
nitrato a la planta. La rubisco es una enzima clave en el proceso de fijación de carbono durante la
fotosíntesis, y su estructura proteica está compuesta por aminoácidos que contienen nitrógeno
proveniente de la asimilación de compuestos nitrogenados del suelo.

b. Vías/procesos necesarios para que esto ocurra:

​ Absorción de nitrato por las raíces:
● La planta absorbe el nitrato (NO₃⁻) del suelo a través de sus raíces.
​ Transporte del nitrato al follaje:
● El nitrato absorbido se transporta desde las raíces hasta las hojas, donde se lleva a
cabo la fotosíntesis.
​ Reducción del nitrato a amonio (NH₄⁺):
● En las hojas, el nitrato se reduce a amonio a través de una serie de reacciones
enzimáticas, en las que participan diversas enzimas, incluyendo la nitrato reductasa.
​ Síntesis de aminoácidos con 16N:
● El amonio producido se incorpora en la síntesis de aminoácidos, incluidos aquellos
que forman parte de la estructura proteica de la rubisco.
​ Incorporación de aminoácidos en la rubisco:
● Los aminoácidos sintetizados a partir del amonio marcado se incorporan en la
estructura de la rubisco durante su síntesis.

Pregunta 7)
Plantas regadas con K¹⁵NO₃ y sus proteínas marcadas:
a. Secuencia de pasos-reacciones clave:
​ Riego con K¹⁵NO₃:
● Las plantas son regadas con una solución que contiene nitrato marcado con
nitrógeno-15 (K¹⁵NO₃).
​ Absorción y transporte del K¹⁵NO₃:
● Las raíces absorben el nitrato marcado con 15N y lo transportan hacia las hojas.
​ Asimilación del nitrato y síntesis de aminoácidos:
● El nitrato marcado con 15N es asimilado en las hojas y se utiliza en la síntesis de
aminoácidos.
​ Incorporación de aminoácidos marcados en proteínas:
● Los aminoácidos marcados con 15N se incorporan en la síntesis de proteínas en las
células de la planta.

b. Uso de K¹⁵NO₃ en la fijación de nitrógeno por rizobios:

Si se quisiera probar la fijación de nitrógeno realizada por rizobios, se usaría una molécula diferente,
como la urea o el amonio, ya que los rizobios son capaces de fijar nitrógeno atmosférico en forma de
amonio. No sería necesario utilizar K¹⁵NO₃, ya que los rizobios tienen la capacidad de convertir el
nitrógeno atmosférico en formas asimilables por las plantas. En este caso, la molécula con nitrógeno
utilizada dependería de la forma de nitrógeno que los rizobios son capaces de fijar y suministrar a la
planta simbióticamente.

Pregunta 8)

a. Parte del gen y tipo de mutación:

La gliceraldehído 3P deshidrogenasa (GAPDH) es una enzima crucial en la vía de la glucólisis,
catalizando la conversión de gliceraldehído 3-fosfato (G3P) a 1,3-bifosfoglicerato. Esta enzima es
esencial para la generación de energía en forma de NADH y la producción de precursores
metabólicos. La mutación por deleción de 6 bases en el gen que codifica para esta enzima podría
haber ocurrido en la región del gen responsable de la síntesis de la GAPDH.
Tipo de mutación:
La deleción de 6 bases implica la pérdida de información genética. Este tipo de mutación se clasifica
como una mutación de desplazamiento en fase, ya que cambia la lectura del marco de lectura
(reading frame) del gen, afectando la traducción de la información genética en una proteína funcional.
Esta mutación puede provocar un cambio significativo en la secuencia de aminoácidos de la proteína
resultante y, por lo tanto, afectar su función.

b. Vías metabólicas afectadas:

La gliceraldehído 3P deshidrogenasa está involucrada en la glucólisis, una vía metabólica central que
desempeña un papel clave en la generación de energía y la producción de precursores para diversas
vías biosintéticas. La afectación de esta enzima puede tener consecuencias significativas en la
capacidad de la planta para asimilar nitrógeno por varias razones:
​ Disminución de la producción de energía (ATP):
● La glucólisis es una fuente importante de ATP. La disminución de la función de la
GAPDH afecta la eficiencia de la generación de energía.
​ Alteración de la relación NADH/NAD+:
● La GAPDH utiliza NAD+ como coenzima y produce NADH. Una disminución en la
actividad de GAPDH puede afectar la relación NADH/NAD+, lo que podría influir en
otras reacciones metabólicas, incluidas aquellas relacionadas con la asimilación de
nitrógeno.
​ Impacto en la síntesis de compuestos nitrogenados:
 ● La glucólisis proporciona precursores para diversas vías metabólicas, incluidas
aquellas involucradas en la síntesis de aminoácidos y otros compuestos
nitrogenados. La alteración en la glucólisis puede afectar la disponibilidad de
precursores para estas rutas, lo que resulta en una menor capacidad de asimilar
nitrógeno.

Pregunta 9)

a. Parte del gen y tipo de mutación:

La NADH deshidrogenasa, también conocida como Complejo I, es una enzima esencial en la cadena
de transporte de electrones, donde juega un papel clave en la generación de energía en forma de
ATP. Una mutación por inserción de una base en el gen que codifica para una subunidad de la NADH
deshidrogenasa puede haber ocurrido en la región del gen que codifica para la estructura de la
subunidad afectada.
Tipo de mutación:
La inserción de una base es un tipo de mutación de desplazamiento en fase. Este tipo de mutación
resulta en la adición de una base adicional en la secuencia de ADN, lo que altera el marco de lectura
(reading frame) durante la síntesis de proteínas. Esto puede cambiar completamente la secuencia de
aminoácidos de la proteína, afectando su estructura y función.

b. Vías metabólicas afectadas:

La NADH deshidrogenasa es una enzima fundamental en la cadena de transporte de electrones, que
forma parte de la respiración celular. La cadena de transporte de electrones es crucial para la
producción de ATP a través de la fosforilación oxidativa. La afectación de esta enzima puede tener
varios impactos en las vías metabólicas y explicar las dificultades en el crecimiento de la planta:
​ Pérdida de eficiencia en la cadena de transporte de electrones:
● La NADH deshidrogenasa cataliza la transferencia de electrones desde NADH hasta
el complejo III de la cadena de transporte de electrones. La mutación puede resultar
en una pérdida de eficiencia en esta transferencia de electrones, comprometiendo la
generación de un gradiente de protones a través de la membrana mitocondrial
interna.
​ Disminución en la producción de ATP:
● La cadena de transporte de electrones está acoplada a la fosforilación oxidativa, que
impulsa la producción de ATP. La disminución en la eficiencia de la NADH
deshidrogenasa puede resultar en una reducción de la síntesis de ATP.
​ Generación de especies reactivas de oxígeno (ERO):
● Interrupciones en la cadena de transporte de electrones pueden llevar a la
generación de especies reactivas de oxígeno (ERO). El aumento de ERO puede
provocar estrés oxidativo y afectar negativamente a las células y tejidos.
​ Impacto en el metabolismo celular global:
● Dado que la producción de ATP está vinculada a muchos procesos metabólicos, una
disminución en la eficiencia de la NADH deshidrogenasa puede afectar el
metabolismo celular global y, en última instancia, el crecimiento de la planta.
En resumen, la mutación por inserción en el gen que codifica para una subunidad de la NADH
deshidrogenasa afecta la cadena de transporte de electrones y, por ende, la producción de ATP, lo
que explica las dificultades en el crecimiento de la planta.
Pregunta 10)

a. Tipos de mutaciones y región donde ocurren:

a.1. Homocigosis (Mutación presente en todos los alelos):
● En homocigosis, todas las copias del gen biosintético de pigmentos contienen la misma
mutación. Esto sugiere una mutación recesiva, donde la función normal del gen es
interrumpida por la mutación. El tipo de mutación podría ser una deleción, inserción o
sustitución de bases en una región crítica del gen, afectando la síntesis normal de pigmentos.
a.2. Heterocigosis (Solo algún alelo está mutado):
● En heterocigosis, solo algunas copias del gen contienen la mutación, y otras copias son
funcionales. Esto sugiere una mutación recesiva, ya que la presencia de una copia funcional
es suficiente para mantener una apariencia fenotípica normal. La mutación podría ser del tipo
deleción, inserción o sustitución, afectando la producción de pigmentos, pero no lo suficiente
como para impedir completamente la síntesis de pigmentos.

b. Vías metabólicas que explican este fenómeno:

b.1. Síntesis de pigmentos:
● La mutación en el gen biosintético de pigmentos afecta la síntesis normal de pigmentos en
ambas situaciones (homocigosis y heterocigosis).
b.2. Dependencia de azúcares para el crecimiento en homocigosis:
● La incapacidad de crecer en homocigosis sin suministro adicional de azúcar sugiere que los
pigmentos afectados desempeñan un papel crucial en una vía metabólica relacionada con la
fotosíntesis o el metabolismo del carbono. La mutación en homocigosis podría haber
afectado la producción de pigmentos esenciales para estos procesos, y la adición de
azúcares proporciona una fuente de carbono adicional para compensar la deficiencia.
b.3. Efecto en la coloración de la planta:
● La coloración blanca en homocigosis indica la falta total de pigmentos, lo que puede deberse
a la interrupción completa de la vía biosintética de pigmentos. En heterocigosis, la presencia
de al menos una copia funcional del gen permite una síntesis parcial de pigmentos,
resultando en una coloración verde pálida.
b.4. Papel de los pigmentos en la fotosíntesis:
● Los pigmentos pueden desempeñar un papel crucial en la absorción de luz durante la
fotosíntesis. La falta total de pigmentos en homocigosis podría interferir significativamente
con la capacidad de la planta para realizar la fotosíntesis, lo que justifica la dependencia del
suministro externo de azúcar.
En resumen, la mutación en el gen biosintético de pigmentos afecta la síntesis de pigmentos
esenciales para la fotosíntesis y el metabolismo del carbono. La incapacidad de crecer sin suministro
adicional de azúcar en homocigosis sugiere una disrupción completa en estas vías metabólicas,
mientras que la presencia de una copia funcional en heterocigosis permite cierta funcionalidad y una
coloración verde pálida.

Pregunta 11)

a. Tipos de mutaciones y región donde ocurren:

a.1. Tipos de mutaciones:
● La inserción de múltiples bases en el gen que codifica para la malato deshidrogenasa
mitochondrial sugiere una mutación de desplazamiento en fase. Este tipo de mutación altera
el marco de lectura (reading frame) del gen al añadir o eliminar un número no divisible por
tres de bases, lo que afecta la síntesis de proteínas.
a.2. Región donde ocurre:
 ● La mutación ocurre en el gen que codifica para la malato deshidrogenasa mitochondrial, que
es una enzima involucrada en el ciclo de Krebs o ciclo del ácido cítrico.

b. Vías metabólicas que explican este fenómeno:

b.1. Función de la malato deshidrogenasa en el ciclo de Krebs:
● La malato deshidrogenasa desempeña un papel crucial en el ciclo de Krebs al catalizar la
conversión del malato a oxalacetato, utilizando NAD+ como cofactor.
b.2. Impacto de la mutación en el ciclo de Krebs:
● La mutación por inserción en el gen de la malato deshidrogenasa mitochondrial puede tener
varios impactos en el ciclo de Krebs:
● Cambios en la estructura de la proteína: La inserción puede cambiar la secuencia de
aminoácidos de la enzima, afectando su estructura tridimensional y, por ende, su
función.
● Alteración del sitio activo: La mutación podría afectar el sitio activo de la enzima,
donde se llevan a cabo las reacciones químicas.
● Disrupción del marco de lectura: La inserción cambia el marco de lectura del gen, lo
que lleva a la síntesis de una proteína mal plegada o no funcional.
b.3. Efectos en el metabolismo energético:
● La malato deshidrogenasa es una enzima clave para la generación de energía en forma de
NADH durante el ciclo de Krebs. Cualquier alteración en su función puede tener un impacto
negativo en la producción de NADH, lo que afecta la eficiencia del metabolismo energético.
b.4. Dificultades en el crecimiento de la planta:
● Dado que el ciclo de Krebs está vinculado a muchas vías metabólicas, incluida la producción
de intermediarios para la síntesis de aminoácidos y otros compuestos, una mutación en la
malato deshidrogenasa puede afectar negativamente el crecimiento de la planta debido a la
interrupción en múltiples procesos metabólicos.
En resumen, la mutación por inserción en el gen de la malato deshidrogenasa mitochondrial afecta
negativamente el ciclo de Krebs y, por ende, el metabolismo energético y otras vías metabólicas
relacionadas, lo que resulta en dificultades en el crecimiento de la planta.