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Laboratorio de Bacteriologa FLUJOGRAMA PARA LA IDENTIFICACION DE Streptococcus y Enterococcus

MUESTRAS

Hisopado Faringeo

Esputo

Agua residual

AISLAMIENTO PRIMARIO

Prueba de Gram Agar sangre Incubacin 24 hrs. A 37 C en 10% de CO2 (microaerofilia)

0,5 ml Caldo Azida de Sodio Incubar 37C x 24hrs.

Agar sangre Azida de Sodio Incubacin a 37C X 24 hrs .

IDENTIFICACION PRESUNTIVA

Prueba de Gram Reconocimiento de colonias Prueba de catalasa Determinacin del tipo de Hemlisis

PRUEBAS DIFERENCIALES
Caldo BHI 6,5 % NaCl BHI 9,6 PH T 45C Bilis 40% TK (Teluro de potasio)

RESULTADOS Facultad de Ciencias Biolgicas Pgina 1

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RESULTADOS
IDENTIFICACION PRESUNTIVA Coloracin Gram: Observamos cocos Gram (+) dispuestos en pares encapsulados ( Streptococcus pneumoniae) y no encapsulados ,algunas formando cadenas unas mas largas que otras (Streptococcus y Enterococcus)

Dispuestos en pares

Dispuestos en cadenas

Comportamiento cultural En el caso de Streptococcus se presentaron colonias blanco cremosas, superficie brillante tipo roco, puntiformes dispuestas en cadena, pares o aisladas. La hemlisis fue de tipo alfa (halo verdoso) en caso de St. pneumoniae y hemlisis beta (halo transparente) en el caso de St.pyogenes En Enterococcus se observaron colonias pequeas de color blanco con hemlisis gamma (no hemlisis).

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Laboratorio de Bacteriologa PRUEBAS DIFERENCIALES Prueba de crecimiento (tolerancia) en 6.5% de NaCl: El microorganismo en estudio se inocula en un caldo tripticasa soya TSA o BHI conteniendo 6.5% de NaCl. Luego de un periodo de 18-24 horas a 35-37C se observa la presencia o ausencia de crecimiento en el medio de cultivo

Prueba de bilis esculina Esta prueba se realiza utilizando un medio llamado agar bilis esculina, el cual contiene 4% de sales biliares y 1% de esculina. Las bacterias que crecen en presencia de las sales biliares e hidrolizan esculina tornan el medio de color negro.

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Laboratorio de Bacteriologa Prueba de bacitracina Sirve para la determinar la resistencia de Streptococcus ante el antibitico bacitracina. La sensibilidad ante este frmaco se evidencia por la formacin de un halo alrededor del disco de bacitracina (sensible) colocado en una colonia sospechosa de Streptococcus pyogenes.

Disco de Bacitricina

No hay formacin de halo. RESISTENTE

Formacin de halo SENSIBLE

RESULTADOS: BHI 6,5 NaCl + TK Telurito de potasio +

GENEROS Streptococcus pyogenes Steptococcus pneumoniae Enterococcus

BHI 9,6 PH + + +

T 45C +

Bilis 40% +

Bacitracina

(*)Bilis esculina + +

+ -

(*) Esta prueba solo se realiz en Enterococcus

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DISCUSION DE RESULTADOS
El aislamiento primario de las muestras se hizo en Agar sangre. Nosotros usamos el Caldo Azida de Sodio especficamente para la muestra de agua residual pues sabemos que en ella hay una alta carga y variedad de microorganismos, por lo tanto nos permite solo el crecimiento de la flora Gram (+) inhibiendo a su vez a los Gram (-), para luego obtener colonias aisladas de Enterococcus en la placa de Agar sangre. Es importante saber que la prueba de la catalasa puede realizarse en placa, sin embargo sera incorrecto hacerlo en Agar sangre pues sabemos que los hemates son catalasa (+), lo que nos arrojara un resultado falso positivo. Al utilizar una lmina para esta prueba obtuvimos catalasa (-), resultado que caracteriza a este grupo y que lo diferencia de otros cocos Gram (+) como Staphylococcus. El tipo de hemlisis tambin es importante para el reconocimiento de la especie y sabemos que tipo se presenta en cada una. Pero en el caso de los Enterococcus se puede observar los tres tipos: , , , por ello se necesita precisar su comportamiento cultural. Luego de la identificacin presuntiva realizamos las pruebas diferenciales para estos dos gneros, como se observa en la tabla de resultados hubo crecimiento en los tubos esperados que confirman el aislamiento de Enterococcus. Esta prueba permite diferenciar las especies de Enterococcus (crecimiento positivo en presencia de 6.5% de NaCl) de los Streptococcus del grupo D (crecimiento negativo en presencia de 6.5% de NaCl). La presencia de la bilis no inhibe el crecimiento de los enterococos, pero s el del resto de las bacterias Gram positivas. Esta caracterstica junto con la capacidad de hidrolizar la esculina son propiedades constantes de esta familia. El producto resultante de la hidrlisis de la esculina es la esculetina y la glucosa, la primera forma un complejo con el Hierro (III) Citrato de un color pardo oscuro. Esta prueba tambin se utiliza para la identificacin presuntiva de Streptococcus del grupo D, como S.bovis y S.equinus, los cuales son positivos. Sin embargo debemos resaltar que en la prueba de pH en nuestros dos tubos hubo crecimiento, el cual se manifest no solo por la turbidez si no tambin en la precipitacin. Uno de los motivos se le puede atribuir a una equivocacin en el momento de la siembra y en otro caso se debera a la alta temperatura, pues normalmente se regula el pH antes de autoclavar los medios y en este caso las reacciones causadas por el calor (121C) haran inestable el pH. Finalmente se observ unas placas que nos muestran la sensibilidad a un antibitico especfico, en este caso bacitracina para la cual S. pyogenes es sensible. La bacitracina interfiere con una molcula que transporta los elementos estructurales del peptidoglicano en la membrana celular bacteriana.

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Cuestionario
1. Como se agrupan las bacterias segn Lancefield 2. Qu hemolisinas producen las Streptococaceas

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