UNIVERSIDAD TÉCNICA DE ORURO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y

NATURALES
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGÍAS,
PRODUCCIÓNY AGRONEGOCIOS
CARRERA DE INGENIERÍA

AGROINDUSTRIAL

SIEMBRA EN PLACA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

(SIEMBRA PROFUNDIDAD Y SUPERFICIE)

Materia: BIOQUÍMICA AGROINDUSTRI

Sigla: CIAI – 1032
Docente: Lic. Gina Arias
Universitaria: Cinthia Gómez Q.
Fecha :29/010/23

ORURO-CARACOLLO-BOLIVIA
 INDICE GENERAL

CONTENIDO PAGINA

Contenido
INTRODUCCION ................................................................................................................................... 3
OBJETIVO ............................................................................................................................................. 3
MATERIALES ........................................................................................................................................ 3
MARCO PRACTICO ............................................................................................................................... 4
vertido en placas ............................................................................................................................. 4
siembra............................................................................................................................................ 4
Siembra en superficie ...................................................................................................................... 4
Recuento y calculo de número de colonias .................................................................................... 8
CUESTIONARIO .................................................................................................................................... 8
CONCLUSONES .................................................................................................................................... 9
BIBLIOGRAFIA ...................................................................................................................................... 9
ANEXOS ............................................................................................................................................... 9

INDICE DE TABLAS

Contenido Pagina

Tabla 1 .COLIFORMES TOTALES........................................................................................................... 2

Tabla 2.HONGOS TOTALES ................................................................................................................. 5

INDICE DE FIGURAS

Contenido Pagina

Figura1. sembrando con diferentes muestras ............................................................................... 9

Figura2. las cajas petris con el cultivo harina de perro. .............................................................. 10
Figura3. Recuentos de las colonias y hongos .............................................................................. 10
 SIEMBRA EN PLACA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
(Siembra en profundad y superficie)

INTRODUCCION

Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio ya sea solido o líquido para
caracterizar su crecimiento, hacer su identificación y determinar sus actividades metabólicas. Es
importante recordar que la inoculación de los microorganismos en medios de cultivos debe ser de
forma aséptica (cerca al mechero o con campana de flujo laminar). Condiciones que limitan la
presencia de microorganismos indeseables o contaminantes. El recuento de microorganismos se
considera como indicador del grado contaminación, también se utiliza como indicador de vida útil de
un producto.

Según (Carrero & Gómez, 2018) menciona .Que el método consiste en realizar diluciones sucesivas
de la muestra en condiciones de esterilidad con objeto de sembrar después cantidades conocidas de
las mismas en una serie paralela de placas de Petri. Evidentemente, alguna de las diluciones será tal
que, al distribuir una parte de ella en la placa, originará colonias separadas. Conocidos el número de
colonias, la cantidad sembrada y la dilución correspondiente, esta técnica permite también evaluar el
número de gérmenes viables en la muestra original.

OBJETIVO

1. Conocer los diferentes métodos de cuantificación y aislamiento de bacterias a partir de

diferentes muestras.
2. Reconocer el crecimiento y las formaciones de colonias de los hongos, bacterias y levaduras
en los diferentes medios de cultivos
3. Realizar la interpretación de resultados de la cuantificación de los microorganismos
4. Conocer la ventaja y desventajas del método para el análisis microbiología de las diferentes
muestras

MATERIALES

 Matraz
 Tubos
 Cajas petri
 Hornilla
 Asa drygalski
 Pipetas de diferentes volúmenes
 Propipetas
 Agar Mac Conkey
 Agar nutriente
  Solución de dilución
 Muestra (Alimento o agua)
 Cepas E.coli

MARCO PRACTICO

vertido en placas

DILUCIONES

a) Se homogeniza la muestra, agitándolo, se toma 1 ml con una pipeta y se vierte en un tubo

que contenga 9 ml de solución de agua peptonada; se mezcla cuidadosamente, agitando
suavemente con un agitador magnético.

b) Con otra pipeta, se toma 1ml de la primera dilución y se vierte en el tubo de la segunda
dilución, que contiene 9 ml de la solución diluyente a) se agita con el vortex.

c) Se repite la operación en un tercer tubo, cuarto o más según el numero requerido de

diluciones (10 -1, 10 -3 y 10 -5).

siembra

 Identificar las placas petri con los datos correspondientes como ser:
 Numero de muestra
 Nombre del medio
 Numero de dilución
 Fecha de siembra
Siembra en superficie

 Distribuir el medio de cultivo en cajas Petri estériles

 Dejar solidificar
 Posteriormente se siembra la muestra sobre la superficie del medio de cultivo un
volumen de 0,1 ml y con la ayuda de una asa drigalski se distribuye la muestra por
toda la superficie del medio de cultivo. El proceso se realiza bajo la flama de un
mechero bunsen o en cámara de flujo laminar.
 Dejas que el medio de cultivo absorba la muestra
 Incubar las cajas Petri invertidas por 24 a 48 hrs a 35-37 ºC.
 Realizar recuentos de todas las colonias que hayan crecido en el medio de cultivo
 Tabla 1. COLIFORMES TOTALES
ˉ1
10 10ˉ 2 10ˉ 3 10ˉ 4
1248 45 55 3

1148 69 54

1120

10ˉ 1 10ˉ 2 10ˉ 3 10ˉ 4

10 veces 100 veces 1000 veces 100,00 veces

30-330 colonias 100.000 bacterias

 Interpretar los resultados usando la siguiente formula:

Colonias
contadas Volumen de muestras
X
UFC/ g o ml = ------------------------------------------------------------- X 1010
Factor de dilución

La muestra 10ˉ 1

1140 × 0.25 285

−1
× 10 = −1 × 10 × 10 = 28500
10 10
 1248 × 0.25 312
−1
× 10 = −1 × 10 × 10 = 31200
10 10

1120 × 0.25 280

−1
× 10 = −1 × 10 × 10 = 28000
10 10
La muestra 10ˉ 2

45 × 0.25
× 10 × 100 = 11250
10−2

69 × 0.25
× 10 × 100 = 17250
10−2

La muestra 10ˉ 3

55 × 0.25 137.5
−3
× 10 = × 1000 = 137500
10 10−3

54 × 0.25 135
−3
× 10 = −3 × 1000 = 135000
10 10

la muestra 10ˉ 4

3 × 0.25
× 100.000 = 75000 +
10−4

La sumatoria

10−1 28500 + 31200 + 28000 = 29233

10−2 11250 + 17250 = 14250

10−3 137500 + 135000 = 136250

10−4 75000

Total de colonias
 6368325

6.37 × 104 UFC.

1. Siembra en profundidad

 Sembrar 1 ml sobre la placas petri

 Añadir 15 ml del medio de cultivo previamente esterilizado en autoclave a 121º C
durante 15 min. y mantenido a 45ºC, el proceso se realiza bajo la flama de un
mechero bunsen o en cámara de flujo laminar.
 Inmediatamente después de verter el agar en las cajas petri homogenizar
cuidadosamente el contenido de la caja (agar más muestra) con movimientos
circulares en forma de ocho sobre una superficie plana evitando rebalse y toda
contaminación externa
 Dejar solidificar
 Incubar las cajas Petri invertidas por 24 a 48 hrs a 35-37 ºC.
 Realizar recuentos de todas las colonias que hayan crecido en el medio de cultivo

Tabla 1 HONGOS TOTALES

10ˉ 1 10ˉ 2 10ˉ 3 10ˉ 4

110 37 23 8

 Interpretar los resultados usando la siguiente formula:

Colonias
contadas X Volumen de muestras
UFC/ g o ml = -------------------------------------------------------------
Factor de dilución

La muestra 10ˉ 1

110 × 0.25 27.5

−1
× 10 = −1 × 10 × 10 = 2750
10 10

La muestra 10ˉ 2

37 × 0.25 92.5
−2
× 10 = −1 × 100 = 9250
10 10
 La muestra 10ˉ 3

23 × 0.25 57.5
−3
× 10 = −3 × 1000 = 57500
10 10

La muestra 10ˉ 4

8 × 0.25 20
−4
× 10 = −4 × 10.000 = 28500
10 10

La sumatoria

2750 + 9250 + 57500 + 200.000 = 6.7375

El total de los hongos

6.7375

6.74 × 104 UFC/𝑔

Recuento y calculo de número de colonias

Se deben considerar los siguientes casos:

a) Placas que contienen entre 25 y 250 colonias.

b) Seleccionar las placas libres de crecimiento invasivo.
c) Contar todas las colonias incluyendo aquellas de tamaño muy pequeño.
d) Anotar el número de colonias contadas en cada placa de cada dilución.

CUESTIONARIO

PREGUNTAS
.
1. Porque el agar nutriente es de uso general para el cultivo de bacterias
 El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria.
Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas. Además, el
crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias
pequeñas

CONCLUSONES

de acuerdo a lo realizado en la presente practica se dise que tiene una gran importancia para
preparar losmedios de cultivo añadir la cantidad de solucion exacta y disolverla correctamente para
obtener los resultados .

en el medio de cultivo se realizo la siembra de la harina de perro para saber cuantas bacterias o
hongos hay en la caja petri.

se vio cual es la ventaja y desventajas del método para el análisis microbiología de las diferentes
muestras.

llegando ala conclusión pasamos a las cajas petri invertidas por 24 a 48 hrs a 35-37 ºc. en un lugar
oscuro realizamos recuentos de todas las colonias que hayan crecido en el medio de cultivo en el
aula también sacamos los cálculos de las colonias y hongos .

BIBLIOGRAFIA

Carrero, f., & Gómez, .. (2018). aislmiento de microorganismos y molesculares.

http://revistas.uni.edu.ni/index.php/Nexo, 10.

ANEXOS

Figura1. sembrando con diferentes muestras

Figura2. las cajas petris con el cultivo harina de perro.

Figura3. Recuentos de las colonias y hongos