Universidad Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Ceron Joaquin Pedro Antonio

Hernández Soria Nydia Sibia
Mata Yedra Carlos Enrique
Moreno Contreras Cid Adair
Reyes Becerril Orlando

Fitopatología

Practica 2

Preparación de medios de cultivo y técnicas

de aislamiento de microorganismos

19 de septiembre del 20023

Introducción
El primer objetivo en la preparación de un medio de cultivo es suministrar los nutrientes
minerales en concentraciones adecuadas . Se deben incluir los macro elementos
(C,H,O,P,K,N,S.Ca y Mg) y los micro elementos(B.Zn,Mn,Cu,Mo,Fe y Cl) (Eskew et
al.,1984).
Un medio de cultivo se refiere al conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y algunos
otros componentes que ayudan a crear las condiciones necesarias para el desarrollo de
microorganismos. Estos tienen una gran diversidad metabólica por lo que existen también
diversos medios de cultivo, ya que no podemos tener un medio de cultivo universal que
englobe y cubra las necesidades de cada uno de los microorganismos existentes.

El crecimiento de un microorganismo en un medio de cultivo está en función de diversos

factores, de éstos los de mayor importancia son:

● · La disposición de los nutrientes necesarios.

● · Presencia de oxígeno necesario.
● · Humedad apropiada.
● · Valores de pH adecuados.
● · Temperatura de incubación precisa.
● · Esterilidad del medio y prevención contra posibles contaminaciones.

La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de

nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del equilibrio
osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un agar o caldo que
sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos. La preparación de los
medios de cultivo microbiológico es una tarea habitual en el control regular de los
microorganismos descomponedores y patógenos en las muestras microbiológicas.
Objetivos

Adiestra a los alumnos buscando hacer una preparación correcta de medios de cultivo y en
las técnicas de aislamiento de agentes fitopatógenos más utilizados.

Metodología

En esta práctica realizamos la preparación del medio de cultivo conocido como PDA (papa
dextrosa agar, para el cual se utilizaron 40 gr de papa, 4 gr de Dextrosa, 3 gr de agar y
200ml de agua destilada.

La papa se cortó en pequeños trozos y se colocó dentro del agua destilada en un vaso de
precipitado con una porción de agua que apenas cubría la papa, menor a los 200 ml, se
calentó para dejar hervir por 15 minutos, posteriormente se colaron en el matraz erlenmeyer
la dextrosa junto con el agar mezclandolos bien, una vez mezclados se agregó la infusión
de papa, se aforo a 200 ml , se mezcló perfectamente y se colocó dentro del autoclave por
15 minutos a 15 psi.

El preparado se vació en cajas petri, colocando una porción que cubriera en su totalidad el
fondo de la caja.

Se realizó aislamiento directo, partes vegetales en medio de cultivo, cámara húmeda y

dilución en serie, para la técnica de aislamiento directo se utilizó una fresa con crecimiento
de hongos de color azul de la cual se realizo un raspado con la aguja de diseccion y se
coloco en el medio de cultivo.
En la técnica de aislamiento de partes vegetales y cámara húmeda se procedió a cortar 10
cuadros de medio centímetro cuadrado de las hojas de fresa con aparentes signos de
enfermedad
● 5 se colocaron en medio de cultivo
● 5 en una caja petri sobre un fondo de papel húmedo.

La técnica de dilución en serie se realizó con suelo colectado en la facultad de estudios

superiores de Cuautitlán.
● Se tomó 1 gr de suelo y se diluyó en 10 ml de agua destilada agitando por 1 minuto,
una terminado el minuto se tomó una alícuota de 1ml y se agregó a un tubo se
ensayo con 9 ml de agua destilada, esto se repitió otras dos veces, por último se
tomó una alícuota del tubo de ensayo número 3 y otra del numero 4, ambas
alícuotas se sembraron en cajas petri diferentes con medio de cultivo.
Resultados y discusión:
al completar todo lo pasos, se
 Tubo 3 Tubo 4

Dilución 1/1000 1/10000

Dilución en sistema decimal 0.001 0.0001

Concentración diluida 1𝑥10

−3

−4
1x10

Factor de dilución. 1000 10000

Colonias en la caja incontables 52

Nota: El conteo que se realizó para la muestra 4 de dilución, se llevó a cabo dividiendo por
cuadrantes la caja Petri. El conteo total fue de 13 colonias.

13 colonias x 4 = 52 colonias

Dando un total de 52 colonias, podemos usar este resultado dado que se encuentra dentro
del rango de la recomendación general.

Para el UFC/ml tenemos entonces:

−4
UFC/ml = 52 x (1X10 )

−3
UFC/ml = 5.2 X10
Tabla 1. UFC en cada caja de Petri.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

Dilución 1/10 1/100 1/1000 1/10000

Dilución en 0.1 0.01 0.001 0.0001

sistema decimal

Concentración 1𝑥10
−1

diluida 1x10
−2
1x10
−3
1x10
−4

Factor de 10 100 1000 10 000

dilución.

Colonias en la incontables 425 39 5

caja

Resultados

¿Cúal es la concentración de UFC/ml de un cultivo stock de Pseudomonas si realizamos la

técnica de dilución en serie y obtuvieron los resultados de la tabla 1?
Nota: Decide con cual caja de Petri realizamos el cálculo. Y considera que sembrarás 1 ml
de cada dilución por caja.

La obtención de UFC/ml se lleva a cabo con el dato del tubo 3 debido a que por
recomendación general se recomienda realizarse en un parámetro de entre 30 y 70
colonias.

UFC/ml de cultivo (stock) = 1 ml sembrado x 39 colonias x 1000 (factor de dilución)

3 4
39 000 = 30 x 39x10 = 3. 9 𝑋 10
Conclusión
Con esta práctica sentamos las bases para la realización del postulado de Koch numero
dos, que nos dice que el organismo debe ser aislado y cultivado en un medio puro. Esto lo
podemos realizar mediante las técnicas de preparación de medios de cultivo y de
aislamiento, ahora contemplamos un panorama más amplio sobre los medios de cultivo
existentes y las técnicas de aislamiento para en un futuro poder hacer uso de cualquiera de
ellos según los requerimientos del patógeno a estudiar.

Bibliografía:

SENASICA-CNRF-Laboratorio de Bacteriología . (s/f). Gob.mx. Recuperado el 19 de septiembre de

2023, de http://sinavef.senasica.gob.mx/CNRF/AreaDiagnostico/LaboratoriosDxF/Bacteriologia
TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO.(n.d.) Recuperado el 17 de septiembre de 2023 de
https://viresa.com.mx/blog_tipos_medio_cultivo
(S/f). Gob.mx.Recuperado el 17 de septiembre de 2023, de
https://www.gob.mx/cms/uploads/attachment/file/728771/1._FT_Aislamiento_de_bacterias_fitopat
_genas_y_pruebas_de_patogenicidad_1.0_2020.pdf

https://www.gob.mx/cms/uploads/attachment/file/147124/7SRRC-SENASICA.pdf