UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE

PANAMÁ
FACULTAD DE INGENIERÍA CIVIL
LICENCIATURA EN INGENIERÍA AMBIENTAL

Laboratorio N°10
Conteo en placas (diluciones en serie)

Profesora: Danna Villarreal

Shantale Gómez 8-937-146

Andrea Ahumada 8-931-1650
Christopher Ellis 8-934-2205

Grupo: 1IB-131, subgrupo A

Fecha: 21-6-2019

I Semestre
 Introducción

El crecimiento bacteriano es la reproducción asexual o división celular de

una bacteria en dos células hijas, en un proceso llamado fisión binaria. Ambas
células provenientes de la fisión no necesariamente sobreviven.
La supervivencia de las bacterias está determinada por las condiciones de
su ambiente: un medio de cultivo con los nutrientes necesarios, pH óptimo,
ambiente temperado y fuentes de energía como azucares; todo esto permite
predecir el crecimiento bacteriano, es así como, si el número de sobrevivientes
excede la unidad promedio, la población bacteriana sufre un crecimiento
exponencial.
La cinética de crecimiento bacteriano viene modelada con cuatro fases
diferentes: fase lag, exponencial, estacionaria, y la fase de muerte. Durante la fase
lag la bacteria se adapta a las condiciones circundantes para su crecimiento, en
este periodo las bacterias comienzan a madurar y ocurre la síntesis de RNA,
enzimas y otras moléculas necesarias para su desarrollo. La fase exponencial está
caracterizada por la duplicación de las bacterias y puede continuar
indefinidamente hasta que el medio pierda sustancias nutritivas. La fase
estacionaria se da usualmente por la presencia de algún factor limitante de
crecimiento como el agotamiento de algún nutriente esencial, en esta fase
comienza a haber un decaimiento en la calidad de las células y la producción de
proteínas de competencia por nutrientes. En la fase de muerte las bacterias
terminan su ciclo vital y producen metabolitos secundarios que pueden o no ser
beneficiosos para el investigador o el microorganismo.
Al cultivar bacterias es usualmente necesario contar cuántas bacterias hay en una
muestra por medio de algunos métodos, como el cultivo bacteriano de diluciones
de la muestra inicial; con este método es posible contar células vivas sola ente ya
que las bacterias muertas no pueden formar colonias. 
 Índice

Contenido
Marco teórico.................................................................................................................................3
Objetivo........................................................................................................................................3
Discusión:...................................................................................................................................3
Materiales....................................................................................................................................4
Procedimiento................................................................................................................................6
Análisis de resultados.................................................................................................................7
TABLA Nº1..................................................................................................................................7
Cálculo de UFC:......................................................................................................................9
TABLA Nº2..................................................................................................................................9
Cálculo de UFC:....................................................................................................................11
Conclusiones...............................................................................................................................12
Bibliografía....................................................................................................................................13
 Marco teórico
Objetivo: Que el estudiante maneje las técnicas de conteo de placas.

Discusión:
Uno de los procedimientos de rutina para la determinación en el contenido
bacteriano de leche, agua, alimentos y muchos otros tipos de productos es la
técnica de conteo en placa. Este procedimiento se basa en el concepto que cada
célula desarrolle una colonia y de esta manera el número de colonias en la placa
revela el número de organismos presentes en la muestra y que tienen la
capacidad de crecer bajo las condiciones de incubación escogida.
Muchas de las experiencias a desarrollar en este curso incluyen conteo en placa,
la técnica aprendida en esta experiencia le sirve para pruebas futuras.
El material de muestra generalmente se diluye en agua salina estéril, con la
finalidad de obtener entre 30 y 300 colonias, cantidad que puede ser evaluada con
buena aproximación de la población microbiana existente. Debido a que no se
conoce con anterioridad el número preciso de microorganismos presentes en la
muestra, se recomienda realizar disoluciones para un resultado que concuerde
con el ámbito de 30 y 300 colonias.
Diluciones:
La dilución es el procedimiento que se sigue para preparar una disolución menos
concentrada a partir de una más concentrada.
Definición general de disolución: Una dilución es una mezcla homogénea,
uniforme y estable, formada por dos o más sustancias denominadas
componentes. La sustancia presente en mayor cantidad suele recibir el nombre de
solvente, y a la de menor cantidad se le llama soluto y es la sustancia disuelta. El
soluto puede ser un gas, un líquido o un sólido, y el disolvente puede ser también
un gas, un líquido o un sólido.
En este caso utilizaremos agua destilada como solvente y aguas residuales como
soluto.
En muchos casos se necesita preparar disoluciones con concentraciones
extremadamente bajas de un soluto, hasta un punto que es difícil o imposible en la
práctica medir la cantidad necesaria de producto sólido o el volumen de solución
madre. En esas situaciones es necesario preparar una solución de mayor
concentración (solución de stock o solución madre) y hacer diluciones sucesivas a
partir de ésta hasta alcanzar la concentración deseada.
En la mayoría de los casos, se trabaja con diluciones decimales. El caso más
sencillo es la preparación de 10 ml de la dilución 1/10 de la muestra. Para ello, se
añade 1 ml de muestra a 9 ml de diluyente; es decir de cada 10 ml de esta dilución
1/10, 1 ml corresponde a la muestra. Expresándolo mediante una ecuación:

Se pueden preparar diluciones sucesivas. Por ejemplo, si se requiere la dilución

1/100, o expresado de otro modo la dilución 10-2, a partir de esta dilución 1/10, se
elaboraría de acuerdo con la ecuación siguiente:

Materiales
Los materiales utilizados en esta experiencia fueron:
 Muestras de suelo tomadas en la UTP
 Frascos con agua de disolución
 Placas estériles
 Agar nutritivo
 Pipetas estériles de 1ml, 5 y 10ml
 Baño de agua caliente aproximadamente, 45ºC
Procedimiento

1. Realice las siguientes disoluciones de la muestra de tierra: 1/10, 1:100,

1:1000, 1:10000, utilizando frascos de agua de disoluciones estériles.
2. Rotule platos Petri para cada dilución preparada, indicando además el
tiempo y la temperatura de incubación.
3. Haga por duplicado la siembra de 1mL cada disolución y adicione las
placas Petri como lo indica el profesor.
4. Adicione aproximadamente 15 mL de agar (a 45°C), inmediatamente rote el
plato para distribuir el inocuo a través del medio en ambas direcciones y
con cuidado de no derramarlo.
5. Adicione aproximadamente 15 mL de papa dextrosa e inmediatamente rote
el plato para distribuir el inocuo a través del medio en ambas direcciones y
con cuidado de no derramarlo.
6. Permita que los medios solidifiquen. Incube por 24 horas a 37°C en
posición invertida.
7. Bajo la lupa iluminada, realice el conteo y calculen el promedio de las
siembras correspondientes a cada dilución.
Análisis de resultados
TABLA Nº1: Resultados de las muestras cultivadas en agar nutritivo.

DILUCIÓN NÚMERO DE IMAGEN

COLONIAS
Control 3

10
−1
Incontable

10
−3
Incontable
10
−5
68

10
−7
8

10−9 38
Cálculo de UFC:

g
=
[
UFC ¿ de colonias
D ]
UFC 68 6
= −5 =6.8 x 10
g 10
UFC 8
= −7 =8.0 x 107
g 10
UFC 38
= −9 =3.8 x 1010
g 10

TABLA Nº2: Resultados de las muestras cultivadas en papa dextrosa.

DILUCIÓN NÚMERO DE IMAGEN
COLONIAS
Control 26

10
−1
Incontable
10
−3
Incontable

10
−5
300+

10
−7
7
 10
−9
3

Cálculo de UFC:

g
=
[
UFC ¿ de colonias
D ]
UFC 7 7
= −7 =7 .0 x 10
g 10
UFC 3 9
= −9 =3 x 10
g 10
Conclusiones

Las diversas técnicas de aislamiento y conteo bacteriano favorecen medir el

número de bacterias de una muestra basándose en la formación de colonias. 
Diluir la muestra las veces que sea necesario facilita el conteo de
microorganismos y dependiendo de cuánto se diluya la muestra, brinda una
perspectiva de la mucha o poca cantidad de concentración de microorganismos en
la tierra.
La técnica de dilución en serie se presta como una práctica útil para
eventualmente determinar la cantidad de unidades formadoras de colonias de
tierra, las cuales suelen tener altas concentraciones de microorganismos. Nos
permite, a través de los cultivos de diluciones menores, observar el panorama de
microorganismos presentes en dicha tierra sin el problema de la saturación de la
placa como tal.
Al igual que en cualquier otro proceso de laboratorio, resulta importante
tomar en cuenta las precauciones necesarias, tanto para la seguridad de quien
realiza la experiencia, como para evitar posibles fuentes de error, como lo son las
contaminaciones de las placas.
Bibliografía

https://diluciones.blogspot.com/

http://www3.uah.es/cuadernolab/p/index.php/diluciones-seriadas/

https://ocw.ehu.eus/pluginfile.php/1654/mod_resource/content/1/
Tema_1._Diluciones_y_concentraciones.pdf