〈401〉 FATS AND FIXED OILS - 240406 - 125835.en.es

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Impreso el: martes 10 de agosto de 2021, 06:09:59 p. m. Estado oficial: actualmente oficial el 10 de agosto de 2021 ID de documento: 1_GUID-DA3A8434-91C3-4E62-9AF4-33ED2BEE8369_3_en-US
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Impreso por: Le Tran Fecha Oficial: Oficial a partir del 01-dic-2013 Tipo de Documento: CAPÍTULO GENERAL @USPC 2021
1
a401norteGRASAS Y ACEITES FIJOS
Las siguientes definiciones y procedimientos generales se aplican a grasas, aceites fijos, ceras, resinas, bálsamos y sustancias similares.
Preparación de la muestra
Si una muestra de aceite muestra turbidez debido a la estearina separada, calentar el recipiente en un baño de agua a 50° hasta que el aceite esté claro.
o si el aceite no se aclara al calentarlo, páselo a través de papel de filtro seco en un embudo contenido en una camisa de agua caliente. Mezclar bien
y pesar de una vez tantas porciones como sean necesarias para las distintas determinaciones, preferentemente utilizando un frasco que tenga una
pipeta cuentagotas o una bureta pesadora. Si la muestra es sólida a temperatura ambiente, manténgala derretida hasta que se extraigan las
porciones deseadas de muestra.
PROCEDIMIENTOS
• SESPECÍFICOGRAMORAVIDAD:Determine la gravedad específica de una grasa o aceite como se indica enGravedad específicaa841norte.
•MELTINGtEMPERATURA:Determine la temperatura de fusión como se indica paraClase IIsustancias (verRango de fusión o
temperaturaa741norte).
• ACIDVALUE(FREEFABOGADOACID)
La acidez de las grasas y aceites fijos en esta farmacopea se puede expresar como la cantidad de ml de álcali 0,1 N necesarios para
Neutralizar los ácidos libres en 10,0 g de sustancia. La acidez frecuentemente se expresa como índice de acidez, que es la cantidad de mg de
hidróxido de potasio necesarios para neutralizar los ácidos libres en 1,0 g de la sustancia. A menos que se indique lo contrario en la monografía
individual, utiliceMétodo I. Método I
Procedimiento:A menos que se indique lo contrario, disolver aproximadamente 10,0 g de la sustancia, pesados con precisión, en 50 ml de una mezcla.
de volúmenes iguales de alcohol y éter (que haya sido neutralizado a fenolftaleína con hidróxido de potasio 0,1 N o hidróxido de
sodio 0,1 N, a menos que se especifique lo contrario) contenidos en un matraz. Si la muestra de prueba no se disuelve en el
disolvente frío, conectar el matraz con un condensador adecuado y calentar lentamente, agitando frecuentemente, hasta que la
l
muestra se disuelva. Añadir 1 ml de fenolftaleína SR y valorar con hidróxido de potasio 0,1 N VS o hidróxido de sodio 0,1 N VS hasta
que la solución permanezca ligeramente rosada después de agitar durante 30 s. Calcule el índice de acidez o el volumen de álcali 0,1
METROr
V
ia
N necesario para neutralizar 10,0 g de muestra (ácidos grasos libres), lo que sea apropiado. Calcule el valor de acidez:
= peso molecular del hidróxido de potasio, 56,11

Resultado = (METROr×V) × (norte/W.)
fic
= volumen (ml)
norte = normalidad de la solución de hidróxido de potasio o de la solución de hidróxido de sodio =
W. peso de la muestra tomada (g)
Si el volumen de hidróxido de potasio 0,1 N VS o hidróxido de sodio 0,1 N VS requerido para la titulación es menor que
2 ml, se puede utilizar un valorante más diluido o se puede ajustar el tamaño de la muestra en consecuencia. Los resultados pueden
expresarse en términos del volumen de valorante utilizado o en términos del volumen equivalente de hidróxido de potasio 0,1 N o
hidróxido de sodio 0,1 N.
O
Si el aceite se ha saturado con dióxido de carbono con el fin de conservarlo, refluya suavemente la solución de alcohol y éter.
durante 10 min antes de la titulación. El aceite también puede liberarse del dióxido de carbono exponiéndolo en un recipiente poco profundo en un desecador de
vacío durante 24 h antes de pesar las muestras de ensayo.
Método II
Procedimiento:Prepare 125 ml de una mezcla de disolventes que consta de volúmenes iguales de alcohol isopropílico y tolueno. Antes
Para su uso, agregue 2 ml de una solución de fenolftaleína al 1% en alcohol isopropílico a la mezcla de 125 ml y neutralice con álcali hasta
obtener un color rosado tenue pero permanente. Pesar con precisión la cantidad adecuada de muestra líquida bien mezclada indicada en
tabla 1y disolverlo en la mezcla de disolvente neutralizado. Si la muestra de prueba no se disuelve en el disolvente frío, conectar el matraz con
un condensador adecuado y calentar lentamente, agitando frecuentemente, hasta que la muestra se disuelva. Agite vigorosamente mientras
titula con hidróxido de potasio 0,1 N VS o hidróxido de sodio 0,1 N VS hasta el primer rosa permanente de la misma intensidad que el del
disolvente neutralizado antes de mezclar con la muestra. Calcule el índice de acidez como se indica enMétodo I.
tabla 1
Peso de la muestra
Índice de acidez (gramo)
0-1 20
1–4 10
4-15 2.5
15–74,9 0,5
≥75.0 0.1
• miESTRELLAVALUE
El valor de éster es la cantidad de mg de hidróxido de potasio necesarios para saponificar los ésteres en 1,0 g de la sustancia. Si el
Se han determinado el valor de saponificación y el valor de acidez, la diferencia entre estos dos representa el valor de éster, es decir,
valor de éster = valor de saponificación – valor de acidez.
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2
Procedimiento:Coloque 1,5 a 2 g de la sustancia, pesados con precisión, en un matraz tarado de 250 ml, agregue 20 a 30 ml de neutralizado.
alcohol y agitar. Añadir 1 ml de fenolftaleína SR y valorar con hidróxido de potasio alcohólico 0,5 N VS hasta que se neutralice el
ácido libre. Agregue 25,0 ml de hidróxido de potasio alcohólico 0,5 N VS y proceda como se indica en Valor de saponificación,
comenzando con “Calentar el matraz” y omitiendo la adición adicional de fenolftaleína SR. Calcule el valor del éster:
Resultado = [METROr× (VB−Vt) ×norte]/W.
METROr = peso molecular del hidróxido de potasio, 56,11

VB = volumen de ácido clorhídrico 0,5 N consumido en la prueba en blanco (mL) =
Vt volumen de ácido clorhídrico 0,5 N consumido en la prueba real (mL)
norte = normalidad exacta del ácido clorhídrico = peso
W. de la sustancia tomada para la prueba (g)
•HYDROXILOVALUE
El valor de hidroxilo es la cantidad de mg de hidróxido de potasio equivalente al contenido de hidroxilo de 1,0 g de la sustancia. Reactivo
piridina-anhídrido acético:Justo antes de su uso, mezclar 3 volúmenes de piridina recién abierta o recién destilada con 1
Volumen de anhídrido acético recién abierto o recién destilado.
Procedimiento:Transferir una cantidad de la sustancia, determinada por referencia aTabla 2y pesado con precisión, hasta un
matraz cónico de 250 ml con tapón de vidrio y agregue 5,0 ml deReactivo de piridina-anhídrido acético. Transfiera 5,0 ml deReactivo de
anhídrido piridinaacéticoa un segundo matraz cónico de 250 ml con tapón de vidrio para proporcionar el blanco de reactivo. Coloque
ambos matraces con condensadores de reflujo con juntas de vidrio adecuados, caliente en un baño de vapor durante 1 h, agregue 10
ml de agua a través de cada condensador y caliente en el baño de vapor durante 10 min más. Enfriar y añadir a cada uno 25 ml de
alcohol butílico, previamente neutralizado a fenolftaleína SR con hidróxido de potasio alcohólico 0,5 N, vertiendo 15 ml a través de cada
condensador y, después de retirar los condensadores, lavando las paredes de ambos matraces con los 10 ml restantes. porciones. A
cada matraz agregar 1 ml de fenolftaleína SR y valorar con hidróxido de potasio alcohólico 0,5 N VS, registrando el volumen, en ml,
consumido por el ácido residual en la solución problema comoty el consumido por el blanco comoB. En un matraz cónico de 125 ml,
mezclar unos 10 g de la sustancia, pesados con precisión, con 10 ml de piridina recién destilada, previamente neutralizada a
fenolftaleína SR, agregar 1 ml de fenolftaleína SR y valorar con hidróxido de potasio alcohólico 0,5 N VS. registrar el volumen, en ml,
l
consumido por el ácido libre en la muestra de prueba comoA. Calcule el valor de hidroxilo:
ia
Resultado = [(METROr×norte)/W.] × {B+ [(W.×A)/C] −t}

fic
norte = normalidad exacta del hidróxido de potasio alcohólico =

W. peso de las sustancias tomadas para la acetilación (g)
C = peso de las sustancias tomadas para la determinación de ácido libre (g)
Si se conoce el índice de acidez de la sustancia problema, calcule el índice de hidroxilo:

O
Resultado = [(METROr×norte)/W.] × (B−t) + Valor ácido

norte = normalidad exacta del hidróxido de potasio alcohólico =
W. peso de la sustancia tomada para la acetilación (g)
Tabla 2
Peso de
Valor de hidroxilo Espécimen de prueba
Rango (gramo)
0-20 10
20–50 5
50-100 3
100–150 2
150–200 1.5
200–250 1.25
250–300 1.0
300–350 0,75
• IODINAVALUE
El valor de yodo representa la cantidad de g de yodo absorbidos, en las condiciones prescritas, por 100 g de sustancia.
A menos que se especifique lo contrario en la monografía individual, determine el valor de yodo medianteMétodo I.
Método I (método Hanus)
Procedimiento:Transfiera una cantidad de muestra pesada con precisión, según lo determinado a partir deTabla 3, en un matraz de yodo de 250 ml,
disolverlo en 10 ml de cloroformo, agregar 25,0 ml de yodobromuro SR, insertar firmemente el tapón en el recipiente y dejar
(EST)
3
dejar reposar durante 30 min protegido de la luz, agitando ocasionalmente. Luego se añaden, en el orden indicado, 30 ml de yoduro
de potasio SR y 100 ml de agua, y se valora el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N VS, agitando vigorosamente después de
cada adición de tiosulfato. Cuando el color del yodo se torne bastante pálido, agregar 3 ml de almidón SR y continuar la valoración
con tiosulfato de sodio 0,1 N VS hasta que desaparezca el color azul. Realice una prueba en blanco al mismo tiempo con las mismas
cantidades de los mismos reactivos y de la misma manera (consulteValorimetríaa541norte, Titulaciones residuales). Calcule el valor
de yodo:
Resultado = [Ar× (VB−VS) ×norte]/(10 ×W.)
Ar = peso atómico del yodo, 126,90

VB = volumen de tiosulfato de sodio 0,1 N VS consumido por la prueba en blanco (mL) =
VS volumen de tiosulfato de sodio 0,1 N VS consumido por la prueba real (mL)
norte = normalidad exacta del tiosulfato de sodio VS =
W. peso de la sustancia tomada para la prueba (g)
[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Si más de la mitad del yodobromuro SR es absorbido por la porción de sustancia tomada, repita el procedimiento.
determinación, utilizando una porción más pequeña de la sustancia bajo examen.]
Tabla 3. Pesos de muestra

Indice de yodo Peso (gramos)
Esperado ±0,1
<5 3.0
5–20 1.0
l
21–50 0,4
Método II
51-100
101–150
151-200
ia 0,2
0,13
0.1
fic
Solución de yoduro de potasio:Disuelva 10,0 g de yoduro de potasio en agua para obtener 100 ml. Guardar en un lugar resistente a la luz.
contenedores.
Solución indicadora de almidón:Mezclar 1 g de almidón soluble con suficiente agua fría para formar una pasta fina. Agregue, mientras revuelve,
a 100 ml de agua hirviendo. Mezclar y enfriar. Utilice sólo la solución transparente.
Procedimiento:Derretir la muestra, si aún no está líquida. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-La temperatura durante la fusión debe exceder la temperatura de fusión.
punto de la muestra a no más de 10°.] Pasar a través de dos trozos de papel de filtro para eliminar las impurezas sólidas y los
últimos restos de humedad. La filtración puede realizarse en una estufa de aire a 100°, pero debe completarse en 5 min ± 30 s. La
O
muestra debe estar absolutamente seca. Toda la cristalería debe estar absolutamente limpia y completamente seca. Después de la
filtración, permita que la muestra filtrada alcance una temperatura de 68°–71 ± 1° antes de pesar la muestra. Una vez que la muestra
haya alcanzado una temperatura de 68°–71 ± 1°, pésela inmediatamente en un matraz de yodo de 500 ml, utilizando los pesos y la
precisión de pesaje que se indican en la tabla adjunta. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-El peso de la sustancia debe ser tal que haya un
exceso de yodocloruro SR de 50% a 60% de la cantidad agregada, es decir, 100% a 150% de la cantidad absorbida.] Agregar 15 ml de
una mezcla nueva de ciclohexano y ácido acético glacial (1:1) y agitar para disolver la muestra. Añadir 25,0 ml de yodocloruro SR,
insertar firmemente el tapón en el matraz y agitar para mezclar. Dejar reposar a 25 ± 5°, protegido de la luz, con agitación ocasional,
durante 1,0 o 2,0 h, dependiendo del Valor de Yodo (IV) de la muestra: IV < 150, 1,0 h; IV ≥150, 2,0 h. Luego, dentro de los 3 minutos
posteriores al tiempo de reacción indicado, agregue, en el orden indicado, 20 ml deSolución de yoduro de potasioy 150 mL de agua
recién hervida y enfriada, y mezclar. En 30 minutos, valorar el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N VS, mientras se agita por
medios mecánicos después de cada adición de tiosulfato. Cuando el color amarillo del yodo casi haya desaparecido, agregue 1 a 2 ml
deSolución indicadora de almidóny continuar la titulación con tiosulfato de sodio 0,1 N VS hasta que desaparezca el color azul.
Realice una prueba en blanco al mismo tiempo con las mismas cantidades de los mismos reactivos y de la misma manera (consulte
Valorimetríaa541norte, Titulaciones residuales). Calcule el valor de yodo como se indica enMétodo I.
• PAGEROXIDOVALUE
El Índice de Peróxido es el número que expresa, en miliequivalentes de oxígeno activo, la cantidad de peróxido contenida en
1000 g de la sustancia. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Esta prueba debe realizarse inmediatamente después del muestreo para evitar la oxidación de la muestra de
prueba.]
Procedimiento:A menos que se indique lo contrario, coloque unos 5 g de la sustancia, pesados con precisión, en un matraz cónico de 250 ml equipado
con tapón de vidrio esmerilado. Agregue 30 ml de una mezcla de ácido acético glacial y cloroformo (3:2), agite para disolver y agregue 0,5 ml de
solución saturada de yoduro de potasio. Agite durante exactamente 1 min y agregue 30 ml de agua. Titular con tiosulfato de sodio 0,01 N VS,
agregando el valorante lentamente con agitación continua, hasta que el color amarillo casi desaparezca. Agregar 5 ml de almidón SR y continuar
la valoración, agitando vigorosamente, hasta que desaparezca el color azul. Realizar una determinación en blanco en las mismas condiciones.
[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-El volumen de valorante utilizado en la determinación del blanco no debe exceder los 0,1 ml.]
Calcule el valor de peróxido:
Resultado = [1000 (Vt−VB) ×norte]/W.
(EST)
4
Vt = volumen de tiosulfato de sodio 0,01 N consumido en la prueba real (mL) =

VB volumen de tiosulfato de sodio 0,01 N consumido en la prueba en blanco (mL)
norte = normalidad exacta de la solución de tiosulfato de sodio =
W. peso de la sustancia tomada para la prueba (g)
• SAPONIFICACIÓNVALUE
El valor de saponificación es la cantidad de mg de hidróxido de potasio necesarios para neutralizar los ácidos libres y saponificar el
ésteres contenidos en 1,0 g de la sustancia.
Procedimiento:Coloque 1,5 a 2 g de la sustancia en un matraz tarado de 250 ml, pese con exactitud y agréguele 25,0 ml de alcohol 0,5 N.
hidróxido de potasio. Calentar el matraz en un baño de vapor, bajo un condensador adecuado para mantener el reflujo durante 30 min, rotando
frecuentemente el contenido. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-El tiempo de reflujo puede ser de hasta 90 min para asegurar una saponificación completa,
dependiendo del tipo de éster que se va a probar.] Luego agregar 1 ml de fenolftaleína SR y valorar el exceso de hidróxido de potasio con ácido clorhídrico
0,5 N VS. Realice una determinación en blanco en las mismas condiciones (verValorimetríaa541norte, Titulaciones residuales). La valoración también se
puede realizar potenciométricamente. Calcule el valor de saponificación:
Resultado = [METROr× (VB–Vt) ×norte]/W.

VB = volumen de ácido clorhídrico 0,5 N consumido en la prueba en blanco (mL) =
Vt volumen de ácido clorhídrico 0,5 N consumido en la prueba real (mL)
norte = normalidad exacta del ácido clorhídrico = peso
W. de la sustancia tomada para la prueba (g)
o
Si el aceite se ha saturado con dióxido de carbono con el fin de conservarlo, expóngalo en un recipiente poco profundo al vacío.
desecador durante 24 h antes de pesar las muestras de ensayo.
• Ud.NSAPONIFICABLEMETROATENCIÓN
ad
El término “materia insaponificable” en aceites o grasas se refiere a aquellas sustancias que no son saponificables por hidróxidos alcalinos pero
son solubles en los disolventes grasos ordinarios, y a los productos de saponificación que son solubles en dichos disolventes. Procedimiento:Transfiera
aproximadamente 5,0 g de aceite o grasa, pesados con precisión, a un matraz cónico de 250 ml, agregue 50 ml de una solución alcohólica.
Solución de hidróxido de potasio preparada disolviendo 12 g de hidróxido de potasio en 10 ml de agua y diluyendo esta solución con
alcohol hasta 100 ml, y calentando el matraz en un baño de vapor bajo un condensador adecuado para mantener el reflujo durante 1 h,
agitando frecuentemente. Enfriar a una temperatura inferior a 25° y transferir el contenido del matraz a un separador con llave de paso
ag
de politetrafluoroetileno, enjuagando el matraz con dos porciones de 50 ml de agua que se agregan al separador (no usar grasa en la
llave de paso). Extraer con tres porciones de 100 mL de éter, combinando los extractos etéreos en otro separador que contenga 40 mL
de agua. Gire o agite suavemente el separador durante unos minutos. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-La agitación violenta puede dar
como resultado la formación de una emulsión difícil de separar.] Deje que la mezcla se separe y deseche la fase acuosa inferior. Lavar el
extracto etéreo con dos porciones adicionales de 40 ml de agua y desechar la fase acuosa inferior. Lavar el extracto etéreo
sucesivamente con una porción de 40 ml de solución de hidróxido de potasio (3 en 100) y una porción de 40 ml de agua. Repita esta
Ap
secuencia de lavado con solución de hidróxido de potasio y agua tres veces. Lavar el extracto etéreo con porciones de 40 ml de agua
hasta que el último lavado no enrojezca mediante la adición de 2 gotas de fenolftaleína SR. Transferir el extracto etéreo a un matraz
tarado y enjuagar el separador con 10 mL de éter, agregando los enjuagues al matraz. Evaporar el éter en un baño de vapor y añadir 6
ml de acetona al residuo. Eliminar la acetona en una corriente de aire y secar el residuo a 105° hasta que los pesajes sucesivos difieran
en no más de 1 mg. Calcular el porcentaje de materia insaponificable en la porción de aceite o grasa tomada:
Resultado = 100 × (W.R/W.S)
W.R = peso del residuo (g)

W.S = peso del aceite o grasa tomado para la prueba (g)
Disolver el residuo en 20 mL de alcohol, previamente neutralizado hasta el punto final de fenolftaleína, agregar fenolftaleína.
TS, y valorar con hidróxido de sodio alcohólico 0,1 N VS hasta la primera aparición de un color rosado tenue que persiste durante
no menos de 30 s. Si el volumen de hidróxido de sodio alcohólico 0,1 N requerido es mayor a 0,2 mL, la separación de las capas fue
incompleta; el residuo pesado no puede considerarse “materia insaponificable” y se debe repetir la prueba.
• SOLIDIFICACIÓNtEMPERATURA DEFABOGADOACID
Preparación de los ácidos grasos:Calentar 75 ml de solución de glicerina e hidróxido de potasio (que se obtiene disolviendo 25 g de potasio
hidróxido en 100 mL de glicerina) en un vaso de precipitados de 800 mL a 150°, y agregar 50 mL de la grasa clarificada, derretida si es necesario. Calentar la
mezcla durante 15 minutos revolviendo frecuentemente, pero no permitir que la temperatura supere los 150°. La saponificación se completa cuando la
mezcla es homogénea y no hay partículas adheridas al vaso en el menisco. Vierta el contenido del vaso en 500 ml de agua casi hirviendo en un vaso o
cacerola de 800 ml, agregue lentamente 50 ml de ácido sulfúrico diluido [que se obtiene agregando agua y ácido sulfúrico (3:1)] y caliente la solución.
revolviendo frecuentemente, hasta que los ácidos grasos se separen limpiamente formando una capa transparente. Lavar los ácidos con agua hirviendo
hasta que queden libres de ácido sulfúrico, recogerlos en un vaso pequeño, colocarlos en un baño de vapor hasta que el agua se haya asentado y los ácidos
grasos estén claros, filtrar en un vaso seco mientras esté caliente y secar a 105° durante 20 minutos. Coloque los ácidos grasos tibios en un recipiente
adecuado y enfríe en un baño de hielo hasta que se solidifiquen.
Prueba de saponificación completa:Coloque 3 mL de los ácidos secos en un tubo de ensayo y agregue 15 mL de alcohol. Calentar la solución
hasta hervir y añadir un volumen igual de hidróxido de amonio 6 N. Resulta una solución clara.
Procedimiento:Usando un aparato similar alAparato de temperatura de congelaciónespecificado en el mismo, proceda como se indica
ProcedimientoenTemperatura de congelacióna651norte,leyendo "temperatura de solidificación" para "punto de solidificación" (los términos son
(EST)
5
sinónimo). El promedio de no menos de cuatro lecturas consecutivas del punto más alto al que aumenta la temperatura es la
temperatura de solidificación de los ácidos grasos.
•FABOGADOACIDCOPOSICIÓN
Solucion estandar:Preparar una mezcla de ésteres de composición conocida que contenga los ésteres requeridos en el individuo.
monografía. EsteSolucion estandarpuede contener otros componentes. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Las mezclas de ésteres están disponibles
comercialmente en Nu-Chek-Prep, Inc., PO Box 295, Elysian, MN 56028. Las mezclas típicas de ésteres de Nu-Chek-Prep útiles en esta prueba
incluyen Nu-Chek 17A y Nu-Chek 19A.] La mezcla Chek 17A tiene la siguiente composición:
Tabla 4
Número de
Porcentaje Éster de ácido graso Longitud de la cadena de carbono Dobles enlaces
1.0 miristato de metilo 14 0
4.0 palmitato de metilo dieciséis 0
3.0 estearato de metilo 18 0
3.0 Araquidato de metilo 20 0
3.0 behenato de metilo 22 0
3.0 lignocerato de metilo 24 0
45.0 oleato de metilo 18 1

15.0 linoleato de metilo 18 2
3.0 linolenato de metilo 18 3
l
20.0 Erucato de metilo 22 1
Porcentaje
ia
La mezcla Nu-Chek 19A tiene la siguiente composición:
Tabla 5
Número de
fic
Éster de ácido graso Longitud de la cadena de carbono Dobles enlaces
7.0 caprilato de metilo 8 0
5.0 caprato de metilo 10 0
48.0 laurato de metilo 12 0
15.0 miristato de metilo 14 0
7.0 0
O
palmitato de metilo dieciséis
3.0 estearato de metilo 18 0
12.0 oleato de metilo 18 1
3.0 linoleato de metilo 18 2
Solución metanólica de hidróxido de sodio 0,5 N:Disolver 2 g de hidróxido de sodio en 100 ml de metanol.
Solución de prueba:[norteBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Si hay ácidos grasos que contienen más de 2 dobles enlaces en la muestra de prueba, retire el aire de
el matraz purgándolo con nitrógeno durante unos minutos.] Transfiera aproximadamente 100 mg de la muestra de ensayo a un matraz cónico
de 50 ml equipado con un condensador de reflujo enfriado por agua adecuado y una barra de agitación magnética. Añadir 4 ml deSolución
metanólica de hidróxido de sodio 0,5 N,y reflujo hasta que desaparecen los glóbulos de grasa (por lo general, 5 a 10 min). Añadir 5 ml de una
solución preparada disolviendo 14 g de trifluoruro de boro en metanol para obtener 100 ml, agitar para mezclar y refluir durante 2 min. Añadir 4
mL de cromatográfico norte-heptano a través del condensador y a reflujo durante 1 min. Enfriar, retirar el condensador, agregar
aproximadamente 15 ml de solución saturada de cloruro de sodio, agitar y dejar que las capas se separen. Pasa elnorte-capa de heptano a través
de 0,1 g de sulfato de sodio anhidro (previamente lavado con cromatográficonorte-heptano) en un matraz adecuado. Transferir 1,0 ml de esta
solución a un matraz aforado de 10 ml, diluir con cromatografía.norte-heptano a volumen y mezclar.
Solución de idoneidad del sistema:Transfiera aproximadamente 20 mg de ácido esteárico, ácido palmítico y ácido oleico a un matraz cónico de 25 ml.
equipado con un condensador de reflujo enfriado por agua adecuado y una barra de agitación magnética, y proceda como se indica paraSolución de
prueba comenzando con “Agregar 5,0 ml de una solución preparada disolviendo”. sistema cromatográfico
(Vercromatografíaa621norte.)
El cromatógrafo de gases está equipado con un detector de ionización de llama, mantenido a una temperatura de aproximadamente 260°, un
sistema de inyección splitless y una columna capilar de sílice fundida de 0,53 mm × 30 m unida con una capa de 1,0 µm de fase G16. El cromatógrafo se
programa para mantener la temperatura de la columna a 70° durante aproximadamente 2 minutos después de la inyección, luego para aumentar la
temperatura a una velocidad de 5°/min hasta 240°, y finalmente para mantener esta temperatura durante 5 minutos. La temperatura del puerto de
inyección se mantiene a aproximadamente 220°. El gas portador es helio con una velocidad lineal de unos 50 cm/s.
Cromatografía elSolución de idoneidad del sistemay registre las respuestas máximas según lo indicado paraProcedimiento:el relativo
los tiempos de retención son aproximadamente 0,87 para palmitato de metilo, 0,99 para estearato de metilo y 1,0 para oleato de metilo; la resolución,
R,entre estearato de metilo y oleato de metilo es no menos de 1,5; y la desviación estándar relativa de las respuestas del área máxima
(EST)
6
para los picos de palmitato y estearato para inyecciones repetidas es no más de 6,0%. La desviación estándar relativa de la relación de
respuesta del área del pico de los picos de palmitato a estearato de estas inyecciones repetidas es no más de 1,0%.
Procedimiento:Inyecte por separado volúmenes iguales (aproximadamente 1 µL) delSolucion estandary elSolución de pruebaen el
cromatógrafo, registrar los cromatogramas, identificar los picos de éster de ácido graso en el cromatograma delSolución de prueba
comparando los tiempos de retención de estos picos con los del cromatograma delSolucion estandary mida las áreas de los picos de
todos los picos de ésteres de ácidos grasos en el cromatograma delSolución de prueba. Calcule el porcentaje de cada componente de
ácido graso en la muestra de prueba:
Resultado = 100 × (A/B)
A = área de la respuesta máxima obtenida para cada componente individual de éster de ácido graso
B = suma de las áreas de los picos de todos los picos, excluyendo el pico del disolvente, en el cromatograma delSolución de prueba
•OMEGA-3FABOGADOACIDDETERMINACIÓN YPAGROFILE
Se puede utilizar el siguiente procedimiento para la determinación del ácido eicosapentaenoico (EPA) (C20:5 n-3), docosahexaenoico
ácido (DHA) (C22:6 n-3) y ácidos omega-3 totales obtenidos de pescado, plantas o fuentes microbianas en aceites a granel y aceite encapsulado, ya sea como
triglicéridos o como ésteres etílicos. El término "triglicérido" se aplica a aceites de algas, aceites de pescado, aceites de hígado de pescado y productos que
contienen ácidos omega-3 en forma de triglicéridos. Los resultados se expresan como ácidos grasos libres o ésteres etílicos. Realice las pruebas lo más
rápido posible. Proteja las soluciones de la luz actínica, agentes oxidantes, catalizadores de oxidación y aire.
Contenido de EPA y DHA

Solución antioxidante:Disolver una cantidad pesada con precisión de hidroxitolueno butilado en 2,2,4-trimetilpentano.
para obtener una solución con una concentración de 0,05 mg por mL.
Solución estándar interna:Transfiera una cantidad pesada con precisión de ER Tricosanoato de Metilo USP a un matraz aforado.
disolver enSolución antioxidantey diluir con el mismo disolvente para obtener una solución con una concentración de aproximadamente 7,0 mg/ml.
[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Proteja la solución contra la evaporación durante su uso.]
Solución de prueba 1(para triglicéridos):En un matraz aforado de 10 mL disolver la masa de muestra a examinar, según
Tabla 6, ensolución antioxidante,y diluir con la misma solución a volumen. Transfiera 2,0 ml de esta solución a un tubo de vidrio y evapore el
disolvente con una suave corriente de nitrógeno. Añadir 1,5 ml de una solución al 2% (p/v) de hidróxido de sodio en metanol, tapar
ci
herméticamente con una tapa revestida de politetrafluoroetileno, mezclar y calentar en un baño de agua hirviendo durante 7 minutos. Enfriar,
agregar 2 ml de solución de tricloruro de boro-metanol (120 g en 1000 ml de metanol), cubrir con nitrógeno, tapar herméticamente, mezclar y
calentar en un baño de agua hirviendo durante 30 min. Enfriar a 40°–50°, agregar 1,0 ml de 2,2,4-trimetilpentano, tapar y mezclar en un
o
mezclador vórtex o agitar vigorosamente durante al menos 30 s. Agregue inmediatamente 5 ml de solución saturada de cloruro de sodio que
ad
contenga 1 volumen de cloruro de sodio y 2 volúmenes de agua. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Agitar de vez en cuando. Antes de usar,
decantar la solución de cualquier sustancia no disuelta y filtrar si es necesario.] Cubrir con nitrógeno, tapar y mezclar en un mezclador vórtex
o agitar bien durante al menos 15 s. Deje que la capa superior se aclare y transfiérala a un tubo separado. Agite la capa de metanol una vez
más con 1,0 ml de 2,2,4-trimetilpentano y combine los extractos de 2,2,4-trimetilpentano. Lavar los extractos combinados con dos cantidades
ag
de 1 ml cada una de agua y secar sobre sulfato de sodio anhidro.
Tabla 6
Ap
Cantidad de muestra
Aprox. Suma para ser pesado
EPA + DHA (gramo)
30%-50% 0,4–0,5
50%–70% 0.3
> 70% 0,25
Solución de prueba 2(para triglicéridos):Transfiera la cantidad equivalente de muestra utilizada para prepararSolución de prueba 1a 10 ml
matraz aforado, disolver y diluir conSolución estándar internaal volumen. Se puede aplicar un calentamiento suave (hasta 60°) para
obtener una solución transparente. Luego proceda como se indica enSolución de prueba 1comenzando con “Transferir 2,0 ml”.
Solución de prueba 3(para ésteres etílicos):En un matraz aforado de 10 mL disolver la masa de muestra a examinar, según
Tabla 6, en elSolución estándar internay diluir con la misma solución a volumen. Se puede aplicar un calentamiento suave (hasta 60°) para
obtener una solución transparente.
Solución de prueba 4(para ésteres etílicos):Transfiera la cantidad equivalente de muestra utilizada para prepararSolución de prueba 3a 10 ml
matraz aforado, disolver y diluir conSolución antioxidanteal volumen.
Solución estándar 1a:Transferir 60 mg de ER Éster Etílico del Ácido Docosahexaenoico USP, pesados con precisión, a un recipiente de 10 ml.
Solución estándar 1b:Transfiera 90 mg de ER Éster Etílico del Ácido Eicosapentaenoico USP, pesados con precisión, a un recipiente de 10 ml.
Solución estándar 1aySolución estándar 1bestán listos para el análisis de ésteres etílicos. Para el análisis de triglicéridos, continúe con
Solución estándar 2aySolución estándar 2b.
Solución estándar 2a:Transfiera 2,0 ml deSolución estándar 1aa un tubo de vidrio y evaporar el disolvente con una suave
corriente de nitrógeno. Luego proceda como se indica paraSolución de prueba 1comenzando con "Agregar 1,5 ml".
Solución estándar 2b:Transfiera 2,0 ml deSolución estándar 1ba un tubo de vidrio y evaporar el disolvente con una suave
corriente de nitrógeno. Luego proceda como se indica paraSolución de prueba 1comenzando con "Agregar 1,5 ml".
(EST)
7
Solución de idoneidad del sistema 1:Transfiera 0,300 g de palmitato de metilo, 0,300 g de estearato de metilo, 0,300 g de
araquidato y 0,300 g de behenato de metilo, pesados con precisión, en un matraz volumétrico de 10 ml, disolver y diluir
conSolución antioxidanteal volumen.
Solución de idoneidad del sistema 2:[norteBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Esta solución debe prepararse sólo para triglicéridos y sólo si tetracos-15-enoico
El éster metílico del ácido no se observa claramente en el cromatograma obtenido conSolución de prueba 2.] Transfiera 55,0 mg de éster
metílico del ácido docosahexaenoico y aproximadamente 5,0 mg de éster metílico del ácido tetracos-15-enoico (ácido nervónico), pesados
con precisión, a un matraz volumétrico de 10 ml, y disuélvalos y diluya conSolución antioxidanteal volumen. sistema cromatográfico
(Vercromatografíaa621norte, Idoneidad del systema

.) Modo:GC
Detector:Ionización de llama
Columna:Columna capilar de sílice fundida de 0,25 mm × 25 m unida con una película de fase G16 de 0,20 µm
Temperaturas
Puerto de inyección
Inyección dividida:250°
Inyección sin división:90°–250°
Detector:270°
Columna:VerTabla 7aoTabla 7b.
Tabla 7a (Inyección dividida)

Hora de espera
Inicial Hora de espera Temperatura Final en la final
Temperatura a 170° Rampa Temperatura Temperatura
(°) (minutos) (°/min) (°) (minutos)
l
170 2 3 240 2.5
ia Temperatura
-
era
-
tura
Tabla 7b (Inyección sin división)
A
Temperatura
-
era
Temperatura
-
era
-
tura
A
Final
Temperatura
-
era
Hora de espera
en
Final
Pintura al temple
fic
Inicial Hora de espera Rampa - Rampa - -
Temperatura a 90° Numero 1 tura Número 2 tura tura
(°) (minutos) (°/min) (°) (°/min) (°) (minutos)
90 2 30 170 3 240 2
Gas portador:Helio
Tasa de flujo:1 ml/min
O
Relación de flujo dividido:200:1. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Si es necesario, ajuste la relación de división y/o la dilución de la muestra para obtener un factor de cola de
0,8–1,5 para los picos de éster metílico de ácido graso enSolución de idoneidad del sistema 1, los picos de éster metílico o etílico del
ácido eicosapentaenoico y del ácido docosahexaenoico enSolución de prueba 1ySolución de prueba 4, observando al mismo tiempo
que paraSolución de prueba 1oSolución de prueba 4cualquier pico debido a los correspondientes ésteres de C18:3 n-3, C18:4 n-3, C20:4
n-3, C21:5 n-3 y C22:5 n-3 es claramente detectable. Si se utiliza el modo de inyección splitless, las soluciones deben diluirse aún más 1
en 200 conSolución antioxidante.] Tamaño de la inyección:1 litro
Idoneidad del sistema (para triglicéridos)

Muestras:Solución de idoneidad del sistema 1ySolución de prueba 2oSolución de idoneidad del sistema 2(si es aplicable)
Idoneidad del sistema (para ésteres etílicos)
Muestra:Solución de idoneidad del sistema 1
Requisitos de idoneidad del sistema
Porcentajes de área teórica (Solución de idoneidad del sistema 1):Los porcentajes de área, después de ajustar por el
Los pesos reales, de los picos de palmitato de metilo, estearato de metilo, araquidato de metilo y behenato de metilo, cada uno
deben estar dentro de ±1,0% (absoluto) de los valores teóricos proporcionados enTabla 8.
Tabla 8
Área teórica (%) en una solución de pesos iguales de palmitato de metilo,
Éster metílico de ácidos grasos Estearato de metilo, araquidato de metilo y behenato de metilo
palmitato de metilo 24.37
estearato de metilo 24,84
Araquidato de metilo 25.23
behenato de metilo 25,56
[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-El área teórica (%) en una solución de pesos iguales (Tabla 8) se deriva del cálculo teórico
factores de respuesta, que son 1,049, 1,029, 1,013 y 1,000 para palmitato de metilo, estearato de metilo, araquidato de
metilo y behenato de metilo, respectivamente.]
(EST)
8
Resolución:Para los triglicéridos (Solución de prueba 2oSolución de idoneidad del sistema 2): No menos de 1,2 entre los
Picos de éster metílico del ácido docosahexaenoico y éster metílico del ácido tetracos-15-enoico
Análisis (para triglicéridos)
Muestras:Solución estándar 2a, Solución estándar 2b, Solución prueba 1, ySolución de prueba 2
Inyecte cada muestra por duplicado y mida las respuestas máximas. Comparar el perfil cromatográfico dePrueba
solución 2con el deSolución de prueba 1e identificar el pico del estándar interno presente enSolución de prueba 2. Calcular el
porcentaje de EPA o DHA en la muestra de triglicéridos tomada:
Resultado = (RUd./RS) × (W.S/W.Ud.) ×F× 100
RUd. = relación entre la respuesta máxima de EPA o DHA y la respuesta máxima corregida del estándar interno en el
cromatograma deSolución de prueba 2, calculado:
[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-SirU1=0 debido a que no se observó ningún pico en el lugar geométrico del estándar interno en el cromatograma dePrueba
solución 1, entoncesRUd.=rT2/rU2.]
Resultado = 1/[(rU2/rT2) − (rU1/rT1)]
rU2 = respuesta del pico del estándar interno en el cromatograma deSolución de prueba 2 =
rT2 respuesta máxima de EPA o DHA en el cromatograma deSolución de prueba 2
rU1 = respuesta del pico de cualquier pico en el lugar geométrico del estándar interno en el cromatograma deSolución de prueba
rT1 1 = respuesta máxima de EPA o DHA en el cromatograma deSolución de prueba 1
RS = relación entre la respuesta máxima de DHA o EPA y la respuesta máxima del estándar interno en el cromatograma de
Solución estándar 2aoSolución estándar 2b
W.S = peso de DHA tomado para prepararSolución estándar 1ao peso de EPA tomado para prepararSolución estándar 1b
l
(mg)
W.Ud. = peso de la muestra tomada para prepararSolución de prueba 2(mg)
F ia
= factor para expresar contenido de DHA como ácidos grasos libres, 0,921; y factor para expresar el contenido de EPA como ácidos grasos libres,
0,915
Análisis (para ésteres etílicos)

Muestras:Solución estándar 1a, Solución estándar 1b, Solución de prueba 3, ySolución de prueba 4
fic
Inyecte cada muestra por duplicado y mida las respuestas máximas. Comparar el perfil cromatográfico dePrueba
solución 3con el deSolución de prueba 4e identificar el pico del estándar interno presente enSolución de prueba 3. Calcule el
porcentaje de EPA o DHA en la muestra de ésteres etílicos tomada:
Resultado = (RUd./RS) × (W.S/W.Ud.) × 100
RUd. = relación entre la respuesta máxima de EPA o DHA y la respuesta máxima corregida del estándar interno en el
O
cromatograma deSolución de prueba 3, calculado de la siguiente manera:
Resultado = 1/[(rU3/rT3) − (rU4/rT4)]

[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-SirU4=0 debido a que no se observó ningún pico en el lugar geométrico del estándar interno en el cromatograma dePrueba
solución 4, entoncesRUd.=rT3/rU3.]
rU3 = respuesta del pico del estándar interno en el cromatograma deSolución de prueba 3 =
rT3 respuesta máxima de EPA o DHA en el cromatograma deSolución de prueba 3
rU4 = respuesta del pico de cualquier pico en el lugar geométrico del estándar interno en el cromatograma deSolución de prueba
rT4 4 = respuesta máxima de EPA o DHA en el cromatograma deSolución de prueba 4
RS = relación entre la respuesta máxima de DHA o EPA y la respuesta máxima del estándar interno en el cromatograma de
Solución estándar 1aoSolución estándar 1b
W.S = peso de DHA tomado para prepararSolución estándar 1ao peso de EPA tomado para prepararSolución estándar 1b
(mg)
W.Ud. = peso de la muestra tomada para prepararSolución de prueba 3(mg)
Contenido de ácidos omega-3 totales (para triglicéridos)

Calcule el porcentaje del total de ácidos omega-3 en la porción de triglicéridos de la muestra tomada:
Resultado = EPA + DHA + [(Anorte - 3× (EPA + DHA)/(AEPA+ADHA)]
EPA = contenido de EPA, de la prueba deContenido de EPA y DHA(%) =

DHA contenido de DHA, de la prueba deContenido de EPA y DHA(%)
Anorte- 3 = suma de las áreas de los picos correspondientes a C18:3 n-3, C18:4 n-3, C20:4 n-3, C21:5 n-3 y C22:5 n-3 metilo
ésteres en el cromatograma obtenido conSolución de prueba 1
AEPA = área del pico correspondiente al éster metílico de EPA en el cromatograma obtenido conSolución de prueba 1
ADHA = área del pico correspondiente al éster metílico de DHA en el cromatograma obtenido conSolución de prueba 1
Contenido de ácidos omega-3 totales (para ésteres etílicos)

Calcule el porcentaje del total de ácidos omega-3 en la porción de muestra de ésteres etílicos tomada:
(EST)
9
Resultado = EPA + DHA + [(Anorte - 3× (EPA + DHA)/(AEPA+ADHA)]
EPA = contenido de EPA, de la prueba deContenido de EPA y DHA(%) =

DHA contenido de DHA, de la prueba deContenido de EPA y DHA(%)
Anorte - 3 = suma de las áreas de los picos correspondientes a C18:3 n-3, C18:4 n-3, C20:4 n-3, C21:5 n-3 y C22:5 n-3 etilo
ésteres en el cromatograma obtenido conSolución de prueba 4
AEPA = área del pico correspondiente al éster etílico de EPA en el cromatograma obtenido conSolución de prueba 4
ADHA = área del pico correspondiente al éster etílico de DHA en el cromatograma obtenido conSolución de prueba 4
• WATER YSEDIMENTO ENFIXADOohILS

Aparato:La centrífuga preferida tiene un diámetro de oscilación (d=distancia de punta a punta de los tubos giratorios) de 38 a 43 cm
y funciona a una velocidad de aproximadamente 1500 rpm. Si se utiliza una centrífuga de diferentes dimensiones, calcule la velocidad de revolución
deseada:
Los tubos de centrífuga tienen forma de pera y están diseñados para aceptar cierres. La capacidad total de cada tubo es de unos 125 ml.
Las graduaciones son claras y distintas y se leen hacia arriba desde el fondo del tubo según la escala que se muestra en
Tabla 9.
Tabla 9
Volumen División de escala
(ml) (ml)
l
0-3 0.1
3–5
5-10
10–25
ia 0,5
1.0
5.0
25–50 25.0
fic
50-100 50.0
Procedimiento:Coloque 50,0 ml de benceno en cada uno de los dos tubos de centrífuga y a cada tubo agregue 50,0 ml del aceite, calentado si
necesario volver a incorporar la estearina separada y mezclar bien a 25°. Insertar firmemente el tapón en los tubos, agitarlos
vigorosamente hasta que el contenido se mezcle bien y luego sumergir los tubos en un baño de agua a 50° durante 10 min. Centrifugar
durante 10 min. Lea el volumen combinado de agua y sedimento en el fondo de cada tubo. Centrifugar repetidamente durante
O
períodos de 10 minutos hasta que el volumen combinado de agua y sedimento permanezca constante durante tres lecturas
consecutivas. La suma de los volúmenes de agua y sedimento combinados en los dos tubos representa el porcentaje, en volumen, de
agua y sedimento en el petróleo.
• ANISIDINAVALUE
El valor de anisidina se define como 100 veces la densidad óptica medida en una celda de 1 cm de una solución que contiene 1 g de anisidina.
sustancia a examinar en 100 mL de una mezcla de solventes y reactivos de acuerdo con el siguiente método descrito. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN
OBJETIVOS-Realice las operaciones lo más rápidamente posible, evitando la exposición a la luz actínica.]
Solución de prueba A:Disolver 0,500 g de la sustancia a examinar en isooctano y diluir con el mismo disolvente hasta 25,0 ml. Solución de
prueba B:A 5,0 ml deSolución de prueba Aagregue 1,0 ml de una solución de 2,5 g/l depag-anisidina en ácido acético glacial, agitar y
almacenar protegido de la luz.
Solucion estandar:A 5,0 ml de isooctano agregue 1,0 ml de una solución de 2,5 g/l depag-anisidina en ácido acético glacial, agitar y
almacenar protegido de la luz.
Procedimiento:Medir la absorbancia deSolución de prueba Aa 350 nm utilizando isooctano como blanco. Medir la absorbancia de
Solución de prueba Ba 350 nm exactamente 10 min después de su preparación, utilizando elSolucion estandarcomo líquido de compensación.
Calcule el valor de anisidina a partir de la expresión:
Resultado = [25 × (1,2AS−AB)]/metro
AS = absorbancia deSolución de prueba Ba 350 nm =

AB absorbancia deSolución de prueba Aa 350 nm
metro = peso de la sustancia a examinar enSolución de prueba A(gramo)
•TOTALohXIDACIÓNVALUE(TOTOX)
El valor de oxidación total se define:
Resultado = 2fotovoltaico+AV
fotovoltaico = Valor de peróxido

AV = Valor de anisidina
(EST)
10
•TCARRERAMETROTALLOS
Aparato
El aparato normalmente consta de lo siguiente:
Matraces de digestión:Utilice un matraz de politetrafluoroetileno con un volumen de aproximadamente 120 ml, provisto de un cierre hermético, un
válvula para ajustar la presión dentro del recipiente, y un tubo de politetrafluoroetileno para permitir la liberación del gas. Sistema:
Haz que el matraz sea hermético, utilizando la misma fuerza de torsión para cada uno de ellos.
Horno microondas:Tiene una frecuencia de magnetrón de 2450 MHz con una salida seleccionable de 0 a 630 ± 70 W en 1%
incrementos, una computadora digital programable, una cavidad de microondas recubierta de politetrafluoroetileno con un extractor de velocidad
variable, un sistema de accionamiento de plataforma giratoria y un tubo de escape para ventilar los humos.
Espectrómetro de absorción atómica:Está equipado con una lámpara de cátodo hueco como fuente de radiación y una lámpara de deuterio.
lámpara como corrector de fondo. El sistema está equipado con lo siguiente:
1. Un horno de grafito como dispositivo de atomización de cadmio, cobre, hierro, plomo, níquel y zinc.
2. Un sistema automatizado de generación de vapor de hidruro de flujo continuo para arsénico y mercurio.
Procedimiento general
[CPRECAUCIÓN—Cuando se utilizan recipientes de digestión cerrados de alta presión y equipos de laboratorio de microondas, las medidas de seguridad
Se deben seguir las precauciones y las instrucciones de funcionamiento proporcionadas por el fabricante.]
[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Si se utiliza un aparato alternativo, puede ser necesario ajustar los parámetros del instrumento.] Limpieza:
Limpie toda la cristalería y el equipo de laboratorio con una solución de ácido nítrico de 10 mg/mL antes de su uso. Ácido nítrico sin trazas de
metales:El ácido nítrico cumple los requisitos con los valores máximos de arsénico (As), cadmio
(Cd), cobre (Cu), hierro (Fe), mercurio (Hg), plomo (Pb), níquel (Ni) y zinc (Zn) iguales a 0,005, 0,005, 0,001, 0,02,
0,002, 0,001, 0,005, y 0,01 ppm, respectivamente.
Ácido clorhídrico sin trazas de metales:El ácido clorhídrico cumple los requisitos con los valores máximos de As, Cd,
Cu, Fe, Hg, Pb, Ni y Zn equivalen a 0,005, 0,003, 0,003, 0,05, 0,005, 0,001, 0,004 y 0,005 ppm, respectivamente. Ácido
sulfúrico sin trazas de metales:El ácido sulfúrico cumple los requisitos con los valores máximos de As, Cd, Cu, Fe, Hg,
Pb, Ni y Zn equivalen a 0,005, 0,002, 0,001, 0,05, 0,005, 0,001, 0,002 y 0,005 ppm, respectivamente.
Solución madre de prueba:En un matraz de digestión colocar alrededor de 0,5 g de aceite graso, pesados con precisión, según lo indicado en cada individuo.
monografía. Añadir 6 ml deÁcido nítrico libre de metales trazay 4ml deÁcido clorhídrico sin trazas de metales. Cerrar el matraz. Solución
madre en blanco:Mezclar 6 ml deÁcido nítrico libre de metales trazay 4ml deÁcido clorhídrico sin trazas de metalesen una digestión
matraz.
Solución de prueba 1:Coloque el matraz de digestión que contiene elSolución madre de pruebaen el horno microondas. Realizar la digestión
l
en tres pasos según el siguiente programa: 80% de potencia durante 15 min, 100% de potencia durante 5 min y 80% de potencia durante 20
min.
ii
Al final del ciclo, deje que el matraz se enfríe. Añadir 4 ml deÁcido sulfúrico libre de metales trazaal matraz. repetir la digestión
programa. Después de completar la digestión, deje que el matraz se enfríe a temperatura ambiente. Abra el matraz de digestión
y transfiera la solución transparente e incolora obtenida a un matraz volumétrico de 50 ml. Enjuagar el matraz de digestión con 2
cantidades de 15 mL cada una de agua y recoger los enjuagues en el matraz aforado. Agregue 1,0 ml de una solución de 10 mg/
ml de nitrato de magnesio y 1,0 ml de una solución de 100 mg/ml de dihidrogenofosfato de amonio al matraz aforado. Diluir a
of
volumen con agua y mezclar. Esta solución esSolución de prueba 1.

Solución en blanco 1:Coloque el matraz de digestión que contieneSolución madre en blancoen el horno microondas. Proceda como se indica en
Solución de prueba 1comenzando por “Realizar la digestión en tres pasos según el siguiente programa”. Calibración directa:[norte
BENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Las
concentraciones de las soluciones estándar dependerán del contenido de metal de la prueba.
sustancia.] Para mediciones de rutina, 3 soluciones estándar,Solución en blanco 1,ySolución de prueba 1son preparados y examinados. Usar
Solución de prueba 1ySolución en blanco 1según lo preparado previamente o como se indica en la monografía. Preparar no menos de 3
soluciones estándar que contengan todos los elementos metálicos a ensayar. El valor de absorbancia esperado enSolución de prueba 1para
cada elemento metálico debe estar dentro de su correspondiente rango de absorbancia calibrado, preferiblemente en el medio del rango de
absorbancia calibrado. Cualquier reactivo utilizado en la preparación deSolución de prueba 1se añaden en la misma concentración a las
soluciones estándar.
Introduzca cada una de las soluciones en el instrumento utilizando el mismo número de réplicas para cada una de las soluciones a
obtener una lectura constante.
Prepare una curva de calibración a partir de la media de las lecturas obtenidas con las soluciones estándar trazando las medias.
en función de la concentración. Determine la concentración del elemento enSolución de prueba 1de la curva obtenida. Adiciones
estándar:Añadir a al menos cuatro matraces volumétricos idénticos volúmenes iguales deSolución de prueba 1como se preparó previamente
o como se indica en la monografía. Agregue a todos los matraces menos uno volúmenes progresivamente mayores de una solución estándar
que contenga una concentración conocida del elemento de prueba para producir una serie de soluciones que contengan concentraciones en
constante aumento de ese elemento que se sabe que dan respuestas en la parte lineal de la curva. Diluir a volumen el contenido de cada
matraz con el disolvente especificado en la monografía y mezclar. El matraz sin adición de solución estándar se etiqueta como solución de
prueba.
Introducir cada una de las soluciones en el instrumento, utilizando el mismo número de réplicas para cada una de las soluciones, para
obtener una lectura constante.
Grafique las absorbancias de las soluciones estándar y de la solución de prueba versus la cantidad agregada de elemento de prueba.
[NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-La solución de prueba debe trazarse como si tuviera un contenido de elemento de prueba agregado
equivalente a 0 mg o µg.] Extrapolar la línea que une los puntos en el gráfico hasta que coincida con el eje de concentración. La distancia
entre este punto y la intersección de los ejes representa la concentración del elemento de prueba en la solución de prueba.
Pruebas específicas
Cadmio (cd), cobre (cu), hierro (fe), plomo (pb), níquel (ni) y zinc (zn)
Solución madre estándar:Prepare una solución que contenga concentraciones conocidas de 5 µg/ml para cada elemento de
prueba. Soluciones estándar:En tres matraces aforados idénticos de 10 ml introduzca 10, 20 y 40 µL deSolución madre estándar,
respectivamente. A cada matraz agregar 5,0 ml deSolución de prueba 1, diluir a volumen con agua y mezclar.
Solución de prueba 2:En un matraz aforado de 10 ml agregar 5,0 ml deSolución de prueba 1, diluir a volumen con agua y mezclar.
(EST)
11
Solución en blanco 2:En un matraz aforado de 10 ml agregar 5,0 ml deSolución en blanco 1, diluir a volumen con agua y mezclar.
Procedimiento:Mida el contenido de Cd, Cu, Fe, Pb, Ni y Zn utilizando un horno de grafito de absorción atómica adecuado.
espectrofotómetro. Determinar simultáneamente las absorbancias deSolución en blanco 2,elSoluciones estándar,ySolución de
prueba 2al menos tres veces cada uno. El valor de absorbancia deSolución en blanco 2se resta del valor obtenido utilizando el
Soluciones estándarySolución de prueba 2. Proceda como se indica en elAdiciones estándarmétodo enProcedimiento general.
VerTabla 10para los parámetros instrumentales que pueden usarse.
Tabla 10
Cd Cu fe Pb Ni zinc
Longitud de onda (nm) 228,8 324,8 248,3 283,5 232 213,9
hendidura (nm) 0,5 0,5 0,2 0,5 0,2 0,5
Corriente de la lámpara (mA) 6 7 5 5 10 7
Temperatura de ignición (°) 800 800 800 800 800 800
Temperatura de atomización 2500

(°) 1800 2300 2300 2200 2000
corrector de fondo En Apagado Apagado Apagado Apagado Apagado
Flujo de nitrógeno (L/min) 3 3 3 3 3 3
Arsénico y mercurio
Mida el contenido de arsénico y mercurio frente a sus soluciones estándar en una concentración conocida utilizando elDirecto
calibraciónmétodo enProcedimiento general, con un sistema automatizado de generación de vapor de hidruro de flujo continuo. Para el límite
l
de especificación de 1 ppm de arsénico y el límite de especificación de 1 ppm de mercurio, prepare tres calibraciones de trabajo.
soluciones con concentraciones conocidas de 5, 10 y 20 ng/mL para cada elemento de prueba, respectivamente.
ia
El valor de absorbancia de la solución en blanco se resta automáticamente del valor obtenido con la solución de prueba.
Arsénico
Solución en blanco 3:Agregue 1,0 ml de una solución de 200 mg/ml de yoduro de potasio a 19,0 ml deSolución en blanco 1preparado
previamente. Deje reposar esta solución a temperatura ambiente durante aproximadamente 50 min o a 70° durante aproximadamente 4 min.
Solución de prueba 3:Agregue 1,0 ml de una solución de 200 mg/ml de yoduro de potasio a 19,0 ml deSolución de prueba 1preparado
fic
previamente. Deje reposar esta solución a temperatura ambiente durante aproximadamente 50 min o a 70° durante aproximadamente 4 min.
Reactivo ácido 1:Ácido clorhídrico sin trazas de metales
Reactivo reductor 1:Una solución de 6 mg/ml de tetrahidroborato de sodio en una solución de 5 mg/ml de hidróxido de sodio
Los parámetros instrumentales enTabla 11puede ser usado. Mercurio
Solución en blanco 4:Proceda como se indica enSolución en blanco 3.

Solución de prueba 4:Proceda como se indica enSolución de prueba 3.
O
Reactivo ácido 2:Una solución de 515 mg/ml deÁcido clorhídrico sin trazas de metales
Reactivo reductor 2:Una solución de 10 mg/ml de cloruro estannoso en una solución de 200 mg/ml deSin trazas de metales
ácido clorhídrico
Los parámetros instrumentales enTabla 11puede ser usado.
Tabla 11
Como Hg
Longitud de onda (nm) 193,7 253,7
Ancho de hendidura (nm) 0,2 0,5

Corriente de la lámpara (mA) 10 4
Caudal del reactivo ácido (mL/min) 1.0 1.0
Reducción del caudal de reactivo (mL/min) 1.0 1.0
Caudal de las soluciones de prueba en blanco, estándar (mL/min) 7.0 7.0
Cuarzo Cuarzo
Celda de absorción (calentado) (sin calefacción)
corrector de fondo Apagado Apagado
Caudal de nitrógeno (l/min) 0.1 0.1
• STEROLCOPOSICIÓN
Separación de la fracción de esteroles.
Solución de referencia A:Disolver una cantidad exactamente pesada de colesterol en cloroformo para obtener una solución al 5%.
(Virginia Occidental).
Desarrollo del sistema solvente:Una mezcla de tolueno y acetona (95:5) o una mezcla de hexano y éter (65:35) Solución de
prueba A:Pesar con precisión 5 g de la sustancia problema en un matraz de 250 ml. Agregar 50 mL de potasio alcohólico.
hidróxido SR 2 (hidróxido de potasio alcohólico 2 N) y calentar hasta ebullición suave con agitación vigorosa y continua hasta que se produzca
la saponificación (la solución se vuelve transparente). Continúe calentando durante 20 minutos más y agregue 50 ml de agua.
(EST)
12
desde la parte superior del condensador. Enfriar el matraz a aproximadamente 30°. Transfiera el contenido del matraz a un embudo de
decantación de 500 ml con varios enjuagues de agua, hasta un total de aproximadamente 50 ml. Añadir aproximadamente 80 ml de éter,
agitar vigorosamente durante aproximadamente 30 s y dejar reposar. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Cualquier emulsión puede destruirse
añadiendo pequeñas cantidades de alcohol etílico o metílico mediante un pulverizador.] Separar la fase acuosa inferior y recogerla en un
segundo embudo de decantación. Realice dos extracciones más en la fase agua-alcohol de la misma manera, utilizando 60-70 ml de éter en
cada ocasión. Se reúnen los extractos etéreos en un solo embudo de decantación y se lavan con agua, 50 ml a la vez, hasta que el agua de
lavado ya no sea alcalina con respecto a la fenolftaleína. Secar la fase etérea con sulfato de sodio anhidro y filtrar sobre sulfato de sodio
anhidro en un matraz de 250 mL previamente pesado, lavar el embudo y filtrar con pequeñas cantidades de éter. Destilar el éter hasta unos
pocos ml y llevar hasta sequedad bajo un ligero vacío o en una corriente de nitrógeno. Completar el secado a 100° durante aproximadamente
15 min y luego pesar después de enfriar en un desecador. Disolver los insaponificables así obtenidos en cloroformo para obtener una solución
con una concentración aproximada del 5%.
Solución de prueba B:Trate 5 g de aceite de canola de la misma manera que se prescribe para la sustancia problema enSolución de prueba A, comienzo
con “Agregue 50 ml de hidróxido de potasio alcohólico TS 2 (hidróxido de potasio alcohólico 2 N)”.
Solución de prueba C:Trate 5 g de aceite de girasol de la misma manera prescrita para la sustancia problema enSolución de prueba A, comienzo
con “Agregue 50 ml de hidróxido de potasio alcohólico TS 2 (hidróxido de potasio alcohólico 2 N)”.
Procedimiento:Sumergir la placa cromatográfica en capa fina (vera621norte),Gel de sílice de 20 cm × 20 cm sobre poliéster con una capa
espesor de 200 µm y tamaño de partícula de 5–17 µm,1completamente en hidróxido de potasio alcohólico 0,2 N durante 10 s, dejar secar en una vitrina
de gases durante 2 h y finalmente colocar a 100° durante 1 h. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Retirar del dispositivo de calentamiento validado y
mantener la placa en un desecador hasta que sea necesario su uso. Las placas deben utilizarse en un plazo de 15 días. También se encuentran
disponibles comercialmente placas cromatográficas de capa fina que no requieren preacondicionamiento.] Utilice una placa separada para cada solución
de prueba.
Coloque una mezcla de tolueno y acetona (95:5) o una mezcla de hexano y éter (65:35) en la cámara a una profundidad de
aproximadamente 1 cm. Cerrar la cámara con la tapa adecuada y dejar actuar al menos 30 min. Se pueden colocar tiras de papel de filtro
sumergidas en el eluyente en las superficies internas de la cámara. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-La mezcla de desarrollo debe
reemplazarse en cada prueba para garantizar condiciones de elución reproducibles.] Aplique 0,3 ml deSolución de prueba A
aproximadamente a 2 cm del borde inferior en una raya lo más fina y uniforme posible. En línea con la raya, coloque 2–3 µL deSolución de
referencia Aen un extremo del plato. Desarrollar los cromatogramas en una cámara equilibrada con elDesarrollo de sistema solventehasta
que el frente del disolvente alcance aproximadamente 1 cm desde el borde superior de la placa. Retire la placa de la cámara de desarrollo
y evapore el disolvente bajo una corriente de aire caliente [NBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-evitar el calor excesivo] o dejando la placa por un
momento bajo una campana. Rocíe la placa con una solución alcohólica al 0,2% de 2,7-diclorofluoresceína y examínela con luz ultravioleta
cl
a 254 nm. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-Las placas pretratadas con indicador UV también están disponibles comercialmente y se usan
de manera equivalente.] En cada una de las placas, marque los límites de la banda de esterol identificada al estar alineada con la tinción
obtenida deSolución de referencia Aa lo largo de los bordes de la fluorescencia, y además incluye el área de las zonas 2-3 mm por encima y
por debajo de las zonas visibles correspondientes aSolución de referencia A. Retire el gel de sílice en el área marcada en un embudo de
filtro con un tabique poroso G3.2Agregar 10 ml de cloroformo caliente, mezclar cuidadosamente con la espátula de metal, filtrar al vacío y
recoger el filtrado en el matraz cónico acoplado al embudo filtrante. Lavar el residuo en el embudo tres veces con éter, aproximadamente
de
10 ml cada vez, y recoger el filtrado en el mismo matraz conectado al embudo. Evaporar el filtrado a un volumen de 4 a 5 ml, transferir la
solución residual a un tubo de ensayo de 10 ml previamente pesado con fondo ahusado y tapón hermético, y evaporar hasta sequedad
mediante calentamiento suave en una corriente suave de nitrógeno. Disolver el residuo en unas gotas de acetona y evaporar nuevamente
hasta sequedad. Colocar a 105° durante aproximadamente 10 min, dejar enfriar en un desecador y pesar.
TratarSolución de prueba BySolución de prueba Cde la misma manera que se indica paraSolución de prueba
A. Determinación de los esteroles
Solución de prueba D:Al tubo de ensayo que contiene la fracción de esteroles separada de la sustancia problema mediante una capa fina
cromatografía añadir una mezcla recién preparada de piridina anhidra, hexametildisilazano y clorotrimetilsilano (9:3:1) [NBENEFICIOS SEGÚN
OBJETIVOS-Este reactivo también está disponible comercialmente y se utiliza de manera equivalente.] en la proporción de 50 µL por cada mg de
esteroles, evitando cualquier absorción de humedad. Inserte el tapón en el tubo de ensayo y agite con cuidado hasta que los esteroles se
disuelvan por completo. Dejar reposar durante al menos 15 min a temperatura ambiente y centrifugar durante unos minutos si es necesario.
Utilice el sobrenadante. [NORTEBENEFICIOS SEGÚN OBJETIVOS-La ligera opalescencia que se puede formar es normal y no provoca anomalía. Sin
embargo, la formación de un flóculo blanco o la aparición de un color rosado es indicativo de la presencia de humedad o deterioro del
reactivo. Si esto ocurre, se debe repetir la prueba.]
Solución de referencia E:A 9 partes de los esteroles separados del aceite de canola mediante cromatografía en capa fina, añadir 1 parte de
colesterol. Trate la mezcla de la misma manera que se indica enSolución de prueba D.
Solución de referencia F:Trate los esteroles separados del aceite de girasol mediante cromatografía en capa fina de la misma manera que
dirigido enSolución de prueba
D. sistema cromatográfico
(Vercromatografíaa621norte.)
El cromatógrafo de gases está equipado con un detector de ionización de llama y una columna capilar de vidrio o sílice fundida de 20–
30 m de longitud, diámetro interno de 0,25 a 0,32 mm, completamente recubierto con una capa de 0,10 a 0,30 µm de fase
estacionaria G27 o G36. La temperatura del puerto de inyección se mantiene a 280°, la temperatura del detector se mantiene a
290° y la temperatura de la columna se mantiene a 260 ± 5°. El gas portador es helio con una velocidad lineal de 20 a 35 cm/s o
hidrógeno con una velocidad lineal de 30 a 50 cm/s. Se utiliza una proporción de división de 1:50 a 1:100. cromatógrafo Solución
de referencia EySolución de referencia F,y registre las respuestas máximas como se indica enProcedimiento:el tiempo de
retención debe ser de 20 ± 5 min para el β-sitosterol y deben separarse todos los esteroles presentes. El cromatograma obtenido
conSolución de referencia Emuestra cuatro picos principales correspondientes a colesterol, brasicasterol, campesterol y
1Se puede obtener una placa TLC comercial de Sigma-Aldrich, n.º de catálogo z122785.
2Se puede obtener un producto comercial de Kimble/Kontes como filtro, buchner con disco fritado, Kimax 28400-152.
(EST)
13
β-sitosterol; y el cromatograma obtenido conSolución de referencia Fmuestra cuatro picos principales correspondientes a
campesterol, estigmasterol, β-sitosterol y Δ7-estigmastenol. Los tiempos de retención de los esteroles con referencia al β-
sitosterol se dan enTabla 12.
Tabla 12. Tiempos de retención relativos de esteroles para dos columnas diferentes
Identificación Columna G36 Columna G27
Colesterol 0,67 0,63
brasicasterol 0,73 0,71
24-metilen-colesterol 0,82 0,80
Campesterol 0,83 0,81
Campestanol 0,85 0,82
estigmasterol 0,88 0,87
Δ7-campesterol 0,93 0,92
Δ5,23-estigmastadienol 0,95 0,95
Clerosterol 0,96 0,96
β-sitosterol 1.00 1.00

sitostanol 1.02 1.02
Δ5-Avenasterol 1.03 1.03
l
Δ5,24-estigmastadienol 1.08 1.08
Δ7-estigmastenol
Δ7-Avenasterol ia 1.12
1.16
1.12
1.16
Procedimiento:Inyecte por separado volúmenes iguales (aproximadamente 1 µL) deSolución de prueba D, Solución de referencia E,ySolución de referencia F
en el cromatógrafo, registrar los cromatogramas y medir las áreas de los picos de los esteroles. Calcule el porcentaje de
fic
cada esterol individual en la fracción de esteroles de la sustancia problema tomada:
Resultado = 100 × (A/S)
A = área del pico debida al componente esterol a determinar

S = suma de las áreas de los picos debidas a los componentes indicados enTabla 12
REQUERIMIENTOS ADICIONALES
O
• USP REFERENCIASNORMASa11norte
ER Éster Etílico del Ácido Docosahexaenoico USP
ER Éster Etílico del Ácido Eicosapentaenoico USP
ER Tricosanoato de Metilo USP

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a401norteGRASAS Y ACEITES FIJOS

= peso molecular del hidróxido de potasio, 56,11

Resultado = [METROr× (VB−Vt) ×norte]/W.

METROr = peso molecular del hidróxido de potasio, 56,11

METROr = peso molecular del hidróxido de potasio, 56,11

norte = normalidad exacta del hidróxido de potasio alcohólico =

Si se conoce el índice de acidez de la sustancia problema, calcule el índice de hidroxilo:

Resultado = [(METROr×norte)/W.] × (B−t) + Valor ácido

METROr = peso molecular del hidróxido de potasio, 56,11

Resultado = [Ar× (VB−VS) ×norte]/(10 ×W.)

Ar = peso atómico del yodo, 126,90

Tabla 3. Pesos de muestra

Calcule el valor de peróxido:

Resultado = [1000 (Vt−VB) ×norte]/W.

Vt = volumen de tiosulfato de sodio 0,01 N consumido en la prueba real (mL) =

Resultado = [METROr× (VB–Vt) ×norte]/W.

METROr = peso molecular del hidróxido de potasio, 56,11

Resultado = 100 × (W.R/W.S)

W.R = peso del residuo (g)

1.0 miristato de metilo 14 0

4.0 palmitato de metilo dieciséis 0

3.0 estearato de metilo 18 0

3.0 Araquidato de metilo 20 0

3.0 behenato de metilo 22 0

3.0 lignocerato de metilo 24 0

45.0 oleato de metilo 18 1

3.0 linolenato de metilo 18 3

7.0 caprilato de metilo 8 0

5.0 caprato de metilo 10 0

48.0 laurato de metilo 12 0

15.0 miristato de metilo 14 0

palmitato de metilo dieciséis

3.0 estearato de metilo 18 0

12.0 oleato de metilo 18 1

3.0 linoleato de metilo 18 2

Resultado = 100 × (A/B)

Contenido de EPA y DHA

de 1 ml cada una de agua y secar sobre sulfato de sodio anhidro.

(Vercromatografíaa621norte, Idoneidad del systema

Tabla 7a (Inyección dividida)

Idoneidad del sistema (para triglicéridos)

palmitato de metilo 24.37

estearato de metilo 24,84

Araquidato de metilo 25.23

behenato de metilo 25,56

Resultado = (RUd./RS) × (W.S/W.Ud.) ×F× 100

Resultado = 1/[(rU2/rT2) − (rU1/rT1)]

Análisis (para ésteres etílicos)

Resultado = (RUd./RS) × (W.S/W.Ud.) × 100

cromatograma deSolución de prueba 3, calculado de la siguiente manera:

Resultado = 1/[(rU3/rT3) − (rU4/rT4)]

Contenido de ácidos omega-3 totales (para triglicéridos)

Resultado = EPA + DHA + [(Anorte - 3× (EPA + DHA)/(AEPA+ADHA)]

EPA = contenido de EPA, de la prueba deContenido de EPA y DHA(%) =

Contenido de ácidos omega-3 totales (para ésteres etílicos)

Resultado = EPA + DHA + [(Anorte - 3× (EPA + DHA)/(AEPA+ADHA)]

EPA = contenido de EPA, de la prueba deContenido de EPA y DHA(%) =

• WATER YSEDIMENTO ENFIXADOohILS

Resultado = [25 × (1,2AS−AB)]/metro

AS = absorbancia deSolución de prueba Ba 350 nm =

fotovoltaico = Valor de peróxido

volumen con agua y mezclar. Esta solución esSolución de prueba 1.