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Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. Carlos Sáenz Herrera
versión impresa ISSN 1017-8546

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Rev. méd. Hosp. Nac. Niños (Costa Rica) v.34 supl. San José 1999
Pruebas de sensibilidad antimicrobiana Métodología de laboratorio

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Dr. Marco Luis Herrera*

Consideraciones Generales La prueba de sensibilidad antimicrobiana es una de las tantas armas con las que contamos en el laboratorio para ayudar a los profesionales en medicina controlar los procesos infecciosos que se desarrolla en los pacientes(4).

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Pero para poder desarrollar todo el potencial con que se cuenta hay que cumplir con un requisito fundamental: es necesario lograr el aislamiento del agente productor del cuadro clínico mediante los cultivos correspondientes. Hay un axioma que no pierde actualidad y sobre el que es indispensable insistir: Primero cultivar y luego medicar. Antes de medicar (antibióticos) a un paciente, asegúrese de que ya se hayan recolectado las muestras para realizar los cultivos que requiere un buen diagnóstico. Esto asegurará hasta un máximo las posibilidades de aislar el agente etiológico. Contando ya con dicho agente el laboratorio puede hacer uso de las diferentes técnicas que se han desarrollado para guiar de la mejor manera posible al médico, en la escogencia del antibiótico a emplear en el control del proceso infeccioso. Como un comentario adicional, hay que recordar que muchas veces, lo que se observa in vitro no correspondiente a lo observado in vivo, razón por la cual, los señores clínicos deben poner especial atención en el seguimiento clínico de su paciente. La no concordancia entre los hallazgos en el laboratorio y la respuesta del paciente a la terapia antimicrobiana, tiene diferentes explicaciones, algunas de las cuales tienen relación con el comportamiento de los microorganismos y otras con el comportamiento individual de cada paciente. Un ejemplo para el primer caso es la producción en el paciente de enzimas inducidas durante el curso de una terapia antimicrobiana, enzimas que tienen la propiedad de inactivar el antibiótico sólo en el paciente(9). Por otra parte, siempre es conveniente revisar si realmente el paciente está ingiriendo el antibiótico como corresponde, si está siendo administrado en el plazo y en la concentración adecuada para ese paciente, sin olvidar la idiosincracia del mismo. La razón fundamental de una prueba de sensibilidad es la de realizar una predicción a través de una prueba in vitro, observar la respuesta del paciente a un determinado antibiótico, la evolución de la infección y detectar una resistencia relevante del organismo que está causando este proceso infeccioso(4). Hay aún muchos agentes microbianos para los cuales la escogencia de una terapia antimicrobiana continúa siendo empírica, porque estos agentes no han desarrollado resistencia contra los antibióticos(1). Por esta razón, la prueba de sensibilidad adquiere una mayor importancia para algunas especies bacterianas que no tienen una sensibilidad predecible. Ejemplos claros de este último tipo de microorganismos son: Staphylococcus sp., Enterococcus sp., Pseudomonas sp. y los miembros de la familia Enterobacteriaceae(4). Otros organismos donde la prueba de sensibilidad, sobre todo en los últimos años, ha adquirido una gran importancia son: Streptococus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae y Mycobacterium tuberculosis(4). Para efectuar las pruebas de sensibilidad, se cuenta con los siguientes métodos(4). A. B. C. D. Difusión en agar (Técnica de Bauer & Kirby) Dilución en agar Macrodilución en caldo Microdilución en caldo

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también puede usarse solución salina al 0. discos de papel impreganados con una concentración conocida del antibiótico. puede utilizarse el medio de cultivo conocido como agar chocolate con una base de GC y enriquecido con Isovitalex al 2%(1). el reforzado con sangre de carnero al 5%. que se respete la cadena de frío. En cuanto a la cepa bacteriana. Esta estandarización puede realizarse utilizando el estándar de McFarlane o utilizando un nefelómetro. es indispensable que sea fresca (un periodo de incubación no mayor de 24 horas) y que haya sido crecida en un medio de cultivo no inhibitorio(16). En cuanto al antibiótico. Siempre se debe ajustar la concentración del inóculo de la cepa a probar. Esto significa que debemos estandarizar dicho inóculo(16). y está diseñada específicamente para bacterias de crecimiento rápido domo los Staphylococcus sp. Para la preparación del inóculo lo más recomendable es usar aguar destilada estéril. A la hora de preparar el medio de cultivo. los medios de cultivo deben ser lo más frescos posible. Página 2 de 7 E. pero también un agar con más de 4 mm de profundidad puede producir una disminución en la migración (difusión) del antibiótico con la consiguiente falsa resistencia. A-Disfusión en agar (Técnica de Bauer & Kirby) La técnica de difusión en agar(16). no se debe reportar Omm. al incidir en un cambio en la velocidad y distancia de la difunsión del antibiótico(16). O los integrantes de la familia Enterobacteriaceae.. Esta técnica. Sin que importe el método a emplear. hay tres facetas o pasos que se deben considerar: el medio de cultivo a emplear. puede producir falsa sensibilidad y a su vez.4 medido a temperatura ambiente y una vez solidificado el medio de cultivo. para los cuales se recomienda una incubación de 24 horas. preparaciones farmacéuticas del antibiótico o tiras de plástico con una matriz propia y una gradiente decreciente del antibiótico determinado. Un agar muy suave. sin cambios de color y de consistencia y por supuesto. Otro punto de gran importancia es la profundidad del agar. Cada plato es observado en una luz indirecta y cada halo de inhibición es medido utilizando un caliper o en su defecto una regla graduada en la forma adecuada. Cada vez que se va a preparar el medio de cultivo. que no se humedezcan.scielo. el inóculo bacteriano llevado a una concentración igual a la del estándar 0. La cepa se debe rayar sobre la superficie del medio de solidificado el medio de cultivo. el número máximo de discos a colocar es de 5(1. para la técnica de la difusión en agar. y que realmente contengan la concentración del antibiótico que dice tener(16). con no más de 7 días de preparados y siempre deben ser guardados en bolsas plásticas selladas y a 4°C(16). Además. El más conocido es el Müeller-Hinton ya sea en agar o en caldo. se debe reportar 6 mm. la placa se incuba a 35ºC en aire ambiente y por un periodo no mayor a las 18 horas excepto para los aislamientos de Staphylococus sp y Enterococcus sp. ya que ese es el diámetro del disco. Lo importante es que estas diferentes presentaciones del antibiótico estén en la mejor condición posible.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . que sea polvo (no hidratado). Otro medio de cultivo usado en especial para la prueba de sensibilidad del Haemophilus influenzae es el HTM (Haemophilus Test Media). Vamos a discutir en primer lugar lo concerniente al medio de cultivo. Una vez realizado esto. Es conveniente. este pH debe ser correctamente regulado. 16). y asegurnádose de que la concentración del agar sea la correcta. La cepa se debe rayar sobre la superficie del medio de forma tal que se logre un crecimiento confluente(16). el cual se emplea en los métodos de difusión y de dilución enagar.cr/scielo. puede producir una falsa resistencia. ajustando el pH. http://www. Cualquiera que sea el método hay que controlar cada una de estas tres variables y cada una de ellas es importante a su manera. haciendo un plateo y un conteo colonial con la finalidad de asegurarse de que se está preparando correctamente(16). En ambos caos. Epsilon test (E test) Métodos aumatizados Pruebas especiales. hay que asegurarse que el polvo esté en buenas condiciones. pueden producir falsa resistencia o falsa sensibilidad al incidir en la polaridad de los antibióticos. el antibiótico a utilizar y la cepa bacteriana a probar. G. para la detección de la sensibilidad del Streptococus pneumoniae (1).4% o un caldo nutritivo(1. se procede a colocar los discos o las pastillas con el antibiótico. es cualitativa y sus resultados se pueden interpretar únicamente como sensible.5 de McFarlane. También cambios en el pH. las consideraciones son las siguientes: Podemos tener cuatro tipos de posibilidades. intermedio o resistente. cada cierto tiempo. F. Si se emplean placas de petri de 100 mm de diámetro. Todos estos medios de cultivo deben ser preparados de la mejor manera posible.5 de McFarlane(16). hay varios medios de cultivo que se pueden utilizar. Carlos Sáenz Herrera . pastillas con una concentración conocida del antibiótico. 2 y 7.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr.16). la estandarización se hace hasta el estándar 0. un agar muy duro.Pruebas .sa. Para la Neisseria gonorrhoeae. Un agar delgado. se aplica sobre la superficie de una placa seca de agar Müeller-Hinton que tenga un pH entre 7. permite una mejor difusión de los antibióticos produciendo una falsa sensibilidad. revisar el inóculo. además. Luego.. En especial. Según el método a emplear y según el agente a estudiar. la cual debe ser exactamente de 4 mm. principalmente para lograr una mejor detección de la resistencia a la oxacilina y a la vancomicina(16). En el caso de que no se presente un halo. en un plazo no mayor de 15 minutos. estos parámetros deben ser aún más claramente controlados.

no se puede afirmar. modificación que se hace principalmente en el periodo de incubación. un antibiótico con un peso molecular bajo como la penicilina. intermedio o resistente al antibiótico testado(1. En el caso de la vancomicina. la cepa se considera resistente y debe ser confirmado realizando una prueba más específica que nos informe hasta dónde llega esa concentración(1.. no crece. Para inocular el medio de cultivo.(16) En la técnica de la dilución en agar. 32. 16). 16). 0. tendrá mucha capacidad para migrar. cada una. lo recomendado es el empleo de un disco de oxacilina de 1 ug de potencia. 0. por el contrario.cr/scielo.9%. Dentro de sus desventajas está el hecho de que brinda sólo información cualitativa. B-Método de Dilución en agar Siendo la técnica de difusión en agar únicamente cualitativa. realizar la prueba de sensibilidad sobre el agar HTM e incubarlo a 35ºC por 16 a 18 horas en una atmósfera de 5 a 7% de CO2(1).16). si el halo de inhibición es mayor de 20 mm. depende del antibiótico y del tipo de cepa a probar. Otra desvetaja y la más importante. 8). http://www. es fácil de efectuar y de gran reproducibilidad bajo precio no requiere equipo especial sus resultados son fácilmente interpretados por los clínicos es muy flexible a la hora de escoger los antibióticos a probar(16). su halo de inhibición será muy pequeño. Neisseria gonorrhoecae. se preparan tubos con la concentración definida de antibiótico y se le agrega a cada tubo una cantidad conocida del agar Müeller-Hinton. Carlos Sáenz Herrera .25. Este es una placa de metal de 32 pozos y una lámina de metal con 32 proyecciones que toman. Para Haemophilus influenzae. preparar el inóculo en un caldo de Müeller-Hinton o solución salina estéril al 0. Se han desarrollado varios métodos en este campo como son las técnicas de la dilución en agar. Streptococcus pneumoniae y Moraxella catarrhalis. d. 0. 20 ul del inóculo estandarizado del agente y que se coloca sobre la superficie del agar con antibióticos. por la NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards) y el organismo es reportado como sensible. Si. Organismos con Haemophilus influenzae. De esta manera. aun cuando. En especial. 4. intermedio o resistente(7). en las de dilución. e. ésta es más sensible a la penicilina que a la vancomicina. De este tipo de técnicas podemos mencionar tres: la dilución es agar. por lo tanto su halo. se inocula una placa de Müeller-Hinton sin antibiótico. 7.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. en el medio de cultivo a emplear. ante todo presenta el problema de la contaminación y la dificultad para detectarla. Cada antibiótico tiene su halo de inhibición específico y éste depende del tamaño de la molécula del antibiótico y su polaridad. Por el contrario. 0. la incubación debe ser un poco más prolongada que para H. presenta varias ventajas como: a. La escogencia de la concentración en la que se inicia el gradiente. que sirve como control positivo de crecimiento. es la técnica de referencia. si el halo encontrado es menor de 20 mm. que para una cepa determinada. la dilución en tubo y la microtitulación.Pruebas . Influenzae (20 a 24 horas). se emplea un inoculador conocido como el inoculador de Steer. el inóculo bacteriano y el antibiótico. se reporta como resistente a esa concentración del antibiótico.5.06 ug de droga activa)(16). ya sea por microtitulación o por la técnica del E test(1. se reporta como sensible a esa concentración de antibiótico. 16. 8. 4. Para ambos.sa. con una concentración mínima inhibidoria menor de 0. este tubo se homogeniza y se chorrea en una placa de Petri vacía con lo que se logra una placa de agar Müeller-Hinton con el antibiótico diluido a una concentración determinada(16). Página 3 de 7 Los diámetros alrededor de cada disco son medidos y su interpretación se basa en guías publicadas cada cierto tiempo. o sea.125. Adicional a esto. Para Neisseria gonorrhoecae se debe utilizar agar base GC suplementado(4) y para Streptococcus pneumoniae agar sangre al 5% y que tenga Müeller-Hinton como base. 1.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . y teniendo en mente que en muchas oportunidades clínicas se hace necesario conocer con exactitud qué concentración de antibiótico es la necesaria para lograr controlar un proceso infeccioso dado. En éstas lo que se pretende es hacer un gradiente decreciente de la concentración de un antibiótico dado y probarlo contra un inóculo bacteriano estandarizado. Para estos agentes fastidiosos. La placa se incuba a 35ºC por 18 a 24 horas y se revisa el crecimiento. en el caso de una cepa sensible tendrá un diámetro muy amplio. La dilución en tubo sigue siendo el estándar dorado de las pruebas de sensibilidad.scielo. se considera que la cepa es sensible a la penicilina. Al igual que la técnica de difusión. lo recomendado es poner a crecer al organismo en un agar chocolate suplementado. Para esto se hace una CMI. manteniendo el resto de condiciones igual (35ºC y 5 a 7% de CO2)(1). Una vez incubado por 24 horas. c.. b. 2. es evidente la necesidad de contar con metodología que solvente ese problema.006 ug/ml(1). Si la cepa logra crecer en la superficie del medio de cultivo. Neisseria meningitidis. que tiene una molécula muy grande y muy hidrofóbica. la microtitulación y el E test (16). necesitan de una técnica de difusión modifica. es que esta técnica debe ser modificada para poderla emplear en organismos fastidiosos o de crecimiento lento(1. hay que controlar el medio de cultivo. en la atmósfera de incubación y en la preparación del inóculo(1). Generalmente se inicia a una concentración de 128 ug/ml y se hacen diluciones dobles hasta obtener el gradiente decreciente en la concentración de antibiótico (64. de esta manera. La técnica de difución en agar. existen guías propias de la NCCLS que se emplean para conocer si las cepas se reportan como sensible. sólo porque el primero tenga un halo de inhibición mucho mayor(16). siempre contra el control positivo. para el caso del Streptococcus pneumoniae.

En los pozos de 1 a 10 (con excepción de pozos 11 y 12). Preparar toda una gradiente de medios de cultivo con una concentración decreciente de antibiótico. Luego se colocan 50 ul de la solución madre del antibiótico.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. se realiza el plateo final en un medio de cultivo apropiado a la cepa y se incuba en las condiciones apropiadas hasta el otro día. de 96 pozos y un fondo en U(16). Cada placa permite realizar una CMI de un antibiótico a ocho cepas diferentes. hemos sacado 50 ul y hemos colocado 50 ul del inóculo bacteriano. al escogerse dos concentraciones. 50 ul de la solución madre de 512 ul. Generalmente la CMB es una o dos diluciones más alta que la CMI(16). si la cepa a estudiar es un Haemophilus sp. La placa se incuba a 35ºC por 18 a 24 horas. luego procedemos a realizar diluciones dobles hasta los pozos 10. Página 4 de 7 Con esta técnica. C-Macrotitulación en tubo Esta técnica se deriva de la anterior. sería de 128 ug. se cuentan las ufc.Pruebas . con tapa. estériles. o una CMI de una cepa contra ocho diferentes antibióticos. Basándose en este criterio. esta técnica exige mucho trabajo técnico y es lenta para la resultados. Carlos Sáenz Herrera . siempre para un volumen hasta el momento de 50 ul en cada pozo(16). lo que podría producir una falsa resistencia. pero no se utiliza por la cantidad de material que emplea. Por supuesto. si crece sólo en la concentración bajo el punto de quiebra. usando como referencia el control positivo en el cual sí hay crecimiento.sa. por o que si la solución madre tiene 512 ug/ml. D-Microtitulación Aquí empleamos unas placas plásticas. el siguiente de 32. en el primer pozo tendríamos una concentración real de 256 ug/ml. La interpretación es relativamente sencilla. El primer paso para proceder al montaje de una CMI/CMB utilizando la técnica de la microtitulación es colocar 50 ul del medio de cultivo en cada uno de los pozos de la placa a emplear(16). A un utilizando sólo dos concentraciones. el siguiente de 16 y así hasta el pozo 10 que tendría una concentración final de 0. y porque presenta el grave problema de la dificultad para detectar contaminaciones del medio de cultivo. ya sea con la tapa de la placa o con un plástico adhesivo permeable al oxígeno. El punto de quiebra es un valor matemático. 16). hace que esta técnica sea muy engorrosa por lo que en realidad se utilizan sólo dos diluciones. se incuba y luego se cuentan las colonias que crecen y esto se refiere al conteo bacteriano del inóculo inicial. si iniciamos con la solución madre de 512 ul. para un volumen final de 100 ul en ambos pozos(16).. Por último se colocan 50 ul del inóculo bacteriano estandarizado. Esta solución madre es diferente para cada antibiótico y su escogencia depende del tipo de antibiótico y la cepa a probar. una abajo y otra arriba del punto de quiebra.9% de las bacterias de un inóculo inicial. Una vez lista la placa. La CMI ya la hemos definido como la mínima concentración de antibiótico que inhibe el crecimiento posible de un inóculo bacteriano estandarizado. teniendo en cuenta que estamos haciendo una dilución 1: 2. colocamos 50 ul de la solución madre (en este ejemplo de 512 ug/ml) en el primer pozo y realizamos diluciones dobles hasta el pozo 10 del cual eliminamos 50 ul. se puede obtener la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI). la CMI se determina viendo en cuál pozo no hay crecimiento. dejando el 11 como control de crecimiento negativo y al pozo 12 de control positivo de crecimiento. de aquellos tubos en los que no se observe crecimiento. se multiplican por la dilución y se obtiene la concentración (ufc/ml) del inóculo empleado(16). pureza y crecimiento de todas las pruebas de sensibilidad. En este primer pozo la concentración del antibiótico. La CMB es la mínima concentración de un antibiótico que mata el 99. que expresa un punto o concentración arriba del cual la cepa se debe interpretar como resistente al antibiótico(16). se extraen 10 ul y se inoculan en el medio de cultivo. Luego de este periodo de incubación. se hace una serie de diluciones del inóculo. Sin embargo. (16). desarrolló una variación sustancial de esta técnica y la llama E test o Epsilon test(7. por consiguiente. La cepa se prepara en las mismas condiciones de turbidez. la que se define como la mínima concentración de antibiótico que inhibe el crecimiento de una cepa bacteriana determinada(16).. la técnica que se usa es la misma de la microdilución y la interpretación es la misma también(16). Para obtener la CMB. E-E test interpretación de los http://www. por lo que recientemente una casa comercial sueca. el pozo 2 tendrá una concentración de 64 ug. Para preparar las diferentes diluciones del antibiótico se parte de una solución madre que se debe diluir en las condiciones adecuadas para cada antibiótico. por eso se ha empleado otra técnica derivada de ésta: la microtitulación(16).cr/scielo.125 ug/ml.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . si la cepa crece en las dos concentraciones es resistente. Esto nos indica lo necesario que es conocer con toda exactitud el número de ucf/ml del inóculo estandarizado. La CMI será la concentración del último pozo en el cual no hay crecimiento. una arriba del punto de quiebra del antibiótico y otra debajo de este valor. El medio de cultivo empleado es Müeller-Hinton en caldo o el medio caldo HTM. esta técnica consume una gran cantidad de tiempo y trabajo. la cepa es intermedia y sensible si no crece en ninguna. Con esa técnica se pueden determinar dos diferentes valores: la CMI y la CMB(16). cubierta. Resumiendo. El control positivo tiene medio de cultivo más el inóculo bacteriano y el control negativo tiene medio de cultivo y antibiótico. en el primer pozo hemos puesto 50 ul de medio de cultivo.scielo.

En estos casos. Helicobacter pylory y Micobacterium tuberculosis. se determina solamente la CMI y ésta se encuentra en la interfase de la elipse(7. el de dilución y la microtitulación(9). El medio que se usa es agar sangre con sangre de caballo al 5% y con una base de Müeller-Hinton o puede utilizarse agar HTM o agar chocolate suplementado. 16). En la mayoría de los casos.scielo. ya tiene a disposición tarjetas para la prueba de sensibilidad de organismos anaeróbicos.cr/scielo. tendría una línea recta(13). Se recomienda que. se escoja la concentración más alta y también es muy importante la observación de pequeñas colonias presentes en las zonas de bajo crecimiento. Si hay crecimiento en estas placas. Carlos Sáenz Herrera . detección de la resistencia a la oxacilina en Staphylococcus. para la detección de la resistencia de los Staphylococcus a la oxacilina. Se trata del Sistema Automatizado Vitek de la casa comercial BioMerieux(13). se controla la curva normal obtenida en el pozo de control positivo. por lo que puede ser utilizada en casos de sinergismo entre la gentamicina y la streptomicina para el tratamiento de infecciones invasoras por Enterococcus(13). se pueden adquirir tiras de E test para pruebas de sensibilidad de las bacterias tradicionales y de las especiales como organismos anaerobios.. Para el tratamiento de infecciones serias por Enterococcus.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. no tendría una curva. mediante una bomba de vacío y luego las tarjetas son selladas herméticamente. 9). Nos faltan dos temas importantes. revisaremos solamente el único sistema con el cual se ha acumulado una amplia experiencia en el Hospital Nacional de Niños. Actualmente... El más sencillo el de dilución donde se emplean placas de Petri con Müeller-Hinton suplementado con gentamicina (500 ug) o streptomicina (200 ug). Este sistema no puede emplearse para las pruebas de sensibilidad de las cepas fastidiosas. Hay también. detección de la B-lactamasa y determinación de la actividad bactericida(9). Para ello hay tres métodos: el de difusión.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . Se trata de tarjetas de 30 pozos que llenan con el inóculo bacteriano estandarizado. Es importante mencionar que una prueba de sensibilidad realizada en un sistema automatizado. Cada uno de los pozos de antibióticos es referido al control positivo de crecimiento y la curva obtenida en cada uno a su vez. Aquí. el primero de ellos es la discusión de los métodos automatizados y por último aquellos métodos llamados espaciales. Así pues. La lectura debe ser muy cuidadosa y puede hacerse con la ayuda de una lupa. La casa comercial. Página 5 de 7 Este método emplea una tira con una matriz plástica que tiene una concentración decreciente de un antibiótico determinado. Campylobacter sp. pero no tenemos experiencia en este campo(13).Pruebas . http://www. E test para sensibilidad de los organismos levaduriformes(7). una cepa resistente. En cuanto a la resistencia de los Enterococcus contra la vancomicina. una cepa sensible. se puede hacer una prueba para detectar la resistencia del Enterococcus a estos aminoglucósidos. por lo que se insiste en el hecho de que este dato es semicuantitativo.sa. comúnmente se utiliza una combinación sinérgica entre la vancominina y un aminoglucósido que puede ser gentamicina o streptomicina. detección de la resistencia de Enterococcus contra la vancomicina. 13). El sistema Vitek trae una tarjeta (TA) que tiene estos antibióticos. hay resistencia a esos antibióticos(9). Aun así. Este método lo hemos usado para la detección de este tipo de agentes a partir de las heces de niños costarricenses y manos del personal de salud. F-Métodos automatizados En cuanto a los métodos automatizados(3). es esperable que en pocos años se pueda desarrollar un medio de cultivo que soporte el crecimiento de este tipo de cepas. lo que puede indicar resistencia o bajos niveles de ésta. proporciona un dato que se aproxima a una CMI ya que estos sistemas trabajan con 2 ó 4 diferentes concentraciones del antibiótico. este sistema ha venido a solventar una serie de problemas técnicos y en especial la reducción importante en el tiempo de incubación de la prueba. una cepa intermedia presentaría una curva mucho menos amplia y con un menor recuento bacteriano que el control. Los métodos a discutir son los siguientes: detección de la resistencia contra aminoglucósidos en los Enterococcus. tiempo que antes tomaba de 18 a 24 horas(3. G-Pruebas especiales Son técnicas que se utilizan con fines especiales y que se emplean en estudios de resistencia bacteriana en condiciones muy claramente definidas(9). sin embargo. recomienda. En E test ha venido a resolver una serie de problemas y a hacer más rápida y fácil la determinación de la CMI. se introducen a un incubador a 35ºC y cada 10 minutos el sistema hace una lectura y se mide la concentración del inóculo bacteriano. hemos empleado un agar sangre con base de MüellerHinton y 6 ug/ml de medio de vancomicina. La NCCLS. con resultados excelentes (en prensa). tendría una curva exacta o muy parecida a la normal. El sistema Vitek está hecho para las pruebas de sensibilidad de los organismos de crecimiento rápido y es aquí donde se ha sentido su impacto. la sensibilidad se reporta en tiempos tan bajos como 4 a 5 horas. el uso de un Müelle-Hinton suplementado con cloruro de sodio al 4% y 6 ug de oxacilina por ml de medio cultivo(7. Este utiliza tarjetas de plástico transparente para la prueba de sensibilidad. si la interfase cae entre dos puntos. Cada tarjeta tiene un pozo control positivo de crecimiento y es este pozo donde se construye una curva normal de crecimiento bacteriano(13).

. donde se usan discos sin antibiótico impregnados con la cepa a probar. Pfaller M... Ferraro M. Washington D. Las cepas de la ATCC. et al. NCCLS: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing.J. veremos un gran halo de inhibición. Washington D. El control de calidad debe ser efectuado al menos una vez por semana. Sixth edition. Inderlied C. [ Links ] 4. Baron E. con gran importancia clínica. podemos mencionar varios tipos como por ejemplo las B-lactamasas. La idea es rayar una cepa de Escherichia coli con sensibilidad comprobada al cloranfenicol sobre el agar y luego colocar discos de cloranfenicol y sobre ellos discos sin antibióticos impregnados con la cepa a probar. 11. PDM Epsilometer. 940 West Valley Raod.14. Jorgensen J. antiparasitarios y la resistencia en organismos anaeróbicos(2. et al.: Susceptibility tests of fastidious bacteria. Quedan sin tratar algunas otras técnicas.C. : Manual of Clinical Microbiology. Para poner en evidencia este tipo de cepas hemos usado una técnica muy sencilla.. Wayne PA. Eds: Murray P. Eds: Murray P.: American Society of Microbiology. 1995. Hindler J. las B-lactamasas de efecto expandido o inducibles y algunas otras como son la cloranfenicol acetil tranferasa (CAT) o aminoglucósido acetil tranferasa (AAT)(6. se ha desarrollado una técnica muy ingeniosa. 1995. presentan patrones de sensibilidad conocidos. Baron E. 4. et al. 1998.: American Society of Microbiology. Washington D. Pfaller M. Washington D.C. por lo que al montar una prueba de sensibilidad. como son los métodos genéticos para la detección de resistencia y las diferentes técnicas empleadas en el estudio de resistencia a los antivirales. Una vez incubada la placa por 24 horas. In: Manual of Clinical Micribiology Sixth edition. [ Links ] 8. se han detectado muchos tipos de B-lactamasas inducidas.: Instrument-Based Antibacterial Susceptibility Testing. En un plato de agar Müeller-Hinton. C. et al. 15).. Dicho control se realiza utilizando cepas control de la American Type Cultive Colection (ATCC) o de alguna otra institución internacional que se dedique a la producción y mantenimiento de cepas bacterianas. 1992. Eds: Murray P.C. [ Links ] 7. 9. 5.: Chloranfenicol acetyltransferase test. Si la cepa produce una B-lactamasa. se raya un inóculo bacteriano estandarizado y se colocan tres discos: aztreonam. El método más sencillo para la detección de la B-lactamasa es el uso de la cefalosporina cromogénica o Cefinasa de la casa BBL. Washington D. Eds: Murray P. & Sahm D.Pruebas .9). Baron E. Espinel I. [ Links ] 5. poniendo en evidencia la producción de la CAT. vol. pero no funciona el antibiótico en el paciente. 1995. ya que no son detectadas en el laboratorio por los métodos rutinarios.).php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . In: Manual of Clinical Microbiology. Pfaller M et al. Baron E. American Society of Microbiology. In: H. Sixth edition. producida por Haemophilus influenzae. Control de Calidad Una revisión sobre el tema de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana no puede estar concluido sin mencionar lo concerniente al control de la calidad(1. 1. Si la cepa produce CAT. si la cepa produce enzimas inducidas.. Carlos Sáenz Herrera . Swenson J.: American Society of Microbiology. Washington D. cefotaxime o ceftazidime y amoxicilina/ac.. ya que al poner la cepa en contacto con el antibiótico in vivo.: American Society of Microbiology.scielo. 10.. & Jorgensen J. los antimicóticos. Antimicrobial Susceptibility Testing: General Considerations. D. 1995. ésta debe encontrarse dentro de los límites máximos o mínimos impuestos por las regulaciones internacionales.: Antimicrobial Agents and Susceptibility Tests: Mycobacteria.C. si la cepa no produce esta enzima. 3. NCCLS document M100-s8 (ISBN 1-56238-337-X) NCCLS. USA. por lo que estos temas serán objeto de una publicación posterior.. cada vez que se cambia el lote del medio del cultivo o se prepara medio fresco y cada vez que se cambia un antibiótico o se inicie el uso de uno nuevo. 7. se presenta la inducción y no hay actividad del antibiótico.. la Escherichia coli presentará un halo de inhibición...Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. Clinical Microbiology Procedures Handbook. C. Sixth edition. En todos estos campos se ha avanzado mucho en los últimos años. Sixth edition. [ Links ] http://www. Baron E. & Peterson L.: Special Test for Detecting Antibacterial Resistence. inactivará al coranfenicol y la Escherichia coli no presentará un halo de inhibición. [ Links ] 3. 16). et al. & Pfaller M.sa. 1995. no habrá inhibición y por ende. Sixth edition. AB BioDisk NA Piscataway N. Doern G... Pfaller M. Pfaller M.(9) Para la detección de la resistencia al cloranfenicol mediada por una CAT. In: Manual of Clinical Microbiology.cr/scielo. 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Este es un tema de gran importancia. Baron E.

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