Anticuerpos Anti-Núcleo celulares

ANA
Objetivos

• Reconoce el fundamento teórico de la técnica de

Inmunofluorescencia directa e indirecta.
• Conoce , diferencia e Identificar patrones de tinción de
inmunofluorescencia en Placas DNA, EMA, AMA, AML, APCA, ANCA,
ANA-Hep-2

• Identificar paso a paso de Inmunofluorescencia Indirecta.

• Analizar puntos críticos del procedimiento.
Anticuerpos
Anti-nucleocitoplasmáticos (ANA)

• Anticuerpos anti-núcleo celulares

• Naturales, infecciones o Inmunológicos

• Enfermedades reumáticas o del tejido conectivo.

• Valor pronostico , diagnóstico y monitoreo de tratamiento.

 Introducción

ICAP (Consenso internacional patrones ANA)

Se inició como un taller con el objetivo de discutir en

profundidad y para promover el consenso en cuanto a
la directrices de patrones morfológicos observados en
el estudio por inmunofluorescencia indirecta en
células HEp-2.

Cita del trabajo: E.K.L. Chan, J. Damoiseaux, O.G. Carballo, et al.

Report of the First International Consensus on Standardized Nomenclature of Antinuclear Antibody HEp-2 Cell Patterns 2014-2015 (Front. Immunol. 2015, Aug 20;6:412)
Laboratorio Inmunología

Fuentes de luz:
Fuentes de luz:
-Lámparas
-Lámparas halógenas omercurio
halógenas o de de mercurio (potencias:
(potencias: 50 o 50 o
100100
w).w).
-Sistema de LED.
-Sistema de LED.
Aumento recomendado: 40x
Aumento recomendado: 400X
Recolección y almacenamiento de las muestras:

Recolección y almacenamiento
Tipo de muestra: suero. de las muestras:
Temperatura de refrigeración: 2-8°C (por 72 hrs).
Tipo de muestra:
Temperatura suero. -20 °C .
de congelación:
Evitar muestrasde
Temperatura muy Hemolisadas o lipémicas.
refrigeración: 2-8°C (por 72 hrs).
Temperatura de congelación: -20 °C .
Evitar muestras muy Hemolisadas o lipémicas.
 Células HEP-2

ORIGEN Células de carcinoma laringeo.

CARACTERÍSTICAS
● Núcleos celulares grandes, de tamaño y forma regulares.
● Citoplasmas amplios, distinción patrones citoplasmáticos.
● núcleo claramente delimitado.

LÁMINAS
● Distribución células distribución homogénea, número óptimo entre 70 y 100 células por
campo , aumento de 400, menos de 50 o más de 110 no es adecuado. Numero mitosis
● Debe poseer un número considerable de células en diferentes fases del ciclo celular.
● Debe tener una fluorescencia de fondo mínima.
Chan, E. K. L. et al. “Report of the first international consensus on standardized nomenclature of antinuclear antibody HEp-2 cell patterns 2014-2015”.Front. Immunol 6: Article 412; CC BY
 • Corresponde a la identificación de patrones
que deben informarse según el consenso
ICAP
Nivel • En el consenso Brasilero serían
competente patrones mandatorios en su
informe
(ICAP) • Son patrones clínicamente
relevantes o patrones que son
de fácil identificación
 • Corresponde a la identificación de patrones
que son de informe opcional según el
Nivel experto consenso ICAP

(ICAP) • En el consenso Brasilero serían patrones que

sólo informan profesionales de nivel experto
• Son de difícil identificación
 Anticuerpos Anti-nucleocitoplasmatáticos

Sustrato : Células epiteliales de carcinoma de laringe (Células Hep-2).

➢ Núcleos celulares grandes, de tamaño y forma regulares.

➢ Citoplasmas amplios, distinción patrones citoplasmáticos.
➢ Núcleo claramente delimitado.

Dilución screening : 1/80 Adultos (≥ 12 años)

1/40 Pediátrico (< 12 años)
AC-0 NEGATIVO
• El aumento recomendado para HEp-2 IFA es x400 (lente
objetivo x40) y un aumento más bajo hará que las
muestras positivas de baja intensidad se interpreten como
negativas
 AC- 1 Homogéneo

Antígeno asociado: Dna e histonas

Enfermedades Asociadas LES, lúpus inducido por medicamentos, artritis idiopática juvenil.

Fluorescencua homogénea y regular a través de todo nucleoplasma.

Células en mitosis ( M,TyA) tienen la cromatina intensamente fluorescente.
 AC -3 Centrómero

Antígeno Asociado: CENP-A/B

Enfermedades Asociadas: ES cutánea limitada, CBP
Granular grueso discreto (40 - 80/célula) dispersos en los núcleos y alineados en la masa de la cromatina en las células mitóticas.
 Granular (Moteado)
AC-4 NUCLEAR GRANULAR FINO

Antígeno Asociado: SS-A/Ro, SS-B/La.

Enfermedades Asociadas: SSj, LES, dermatomiositis

Gránulos diminutos finos a través de todo el nucleoplasma. Las células mitóticas (metafase, anafase y telofase) tienen la masa de la cromatina
no teñida.
AC-5 – NUCLEAR GRANULAR GRUESO/GRANDE
 AC-6-7: múltiples puntos nucleares

Antígeno Asociado: Sp-100, proteínas PML, MJ/NXP-2 Antígeno Asociado: P80-coilina, SMN
Enfermedades Asociadas: CBP, EAS, dermatomiositis. Enfermedades Asociadas: SSj, LES, ES, PM, individuos
asintomáticos.
Gránulos nucleares discretos contables (6 a 20
Puntos/célula) Gránulos discretos contables (1 a 6 gránulos
nucleares/célula. Estas son conocidas como cuerpos de
Cajal o cuerpos enrollados.
 AC-8 Nucleolar HOMOGENEO

Antígeno Asociado: CEPM/Scl-75, PM/Scl-100, nucleolina etc.

Enfermedades Asociadas: ES, ES/PM superposición
Fluorescencia difusa en todo el nucléolo, mientras que la placa metafásica no muestra tinción.
 AC- 11 Membrana Nuclear

Antígeno Asociado : Laminas ABC o proteínas asociadas.

Enfermedades Asociadas: LES, SSj, artritis seronegativa

Tinción homogénea del núcleo con mayor intensidad en la membrana nuclear externa, sin tinción en las placas de cromatina de la
metafase y anafase. Se puede observar un peculiar aumento de fluorescencia en los puntos de contacto entre células adyacentes.
Aparato
mitótico
 AC-25 – Huso mitótico

Enfermedades Asociadas: Raro en SSj.., LES, otras conectivopatías.

Tinción en las fibras del huso entre los polos en células en mitosis, junto con una tinción con forma de pequeños conos en los
polos. Las fibras del huso pueden teñirse tanto en patrones parecidos a NuMA como en algunos no-NuMA.
 AC-27 – Puente intercelular

Enfermedades Asociadas: Raro en ES, fenómeno de Raynaud

Tinción del puente que une las dos células hijas al final de la división celular, pero antes de que las células se separen totalmente.
 AC-28 Envoltura cromosómica mitótica.

Enfermedades Asociadas: Raro en lúpus discoide (LED) ,leucemia linfocítica crónica (LLC), SSj .

Tinción punteada en el borde de los cromosomas de células en profase y metafase, sin ninguna tinción en células en interfase.
Patrones Citoplasmáticos
 AC-15 - Citoplasmático fibrilar lineal

Antígeno Asociado: Actina, miosina.

Enfermedades Asociadas: Enfermedad mixta del tejido conjuntivo, hepatitis crónica activa, miastenia gravis, enfermedad de Crohn, CBP,
hemodiálisis de largo plazo, raro en EAS.

Este patrón se caracteriza por mostrar fibras del citoesqueleto, en ocasiones con depósitos granulares pequeños y discontinuos. La
tinción típica muestra fibras de actina estriadas que abarcan lo largo del eje de la célula.
 AC-20 - Citoplasmático granular fino

Antígeno Asociado: Jo-1/ sintetasa del Histidil del ARNt

Enfermedades Asociadas:Síndrome antisintetasa, PM/DM, ES limitada.

Pequeños gránulos dispersos en el citoplasma, en su mayoría con fondo homogéneo o granular fino denso.
 AC-21 Citoplasmático reticular/AMA

Enfermedades Asociadas: Común en CBP, ES generalizada.

Tinción de filamentos granulares gruesos que se extienden a través del citoplasma. Ej. anticuerpos anti- mitocondriales.
 AC-22 Granular Polar / Golgi

Antígeno Asociado: Giantina/macrogolgina, golgin-95/GM130, Golgina-160, golgina-97, golgina 245

Enfermedades Asociadas: Raro en SSj, LES, AR, EMTC

Granular discontinuo o tinción como listón granular perinuclear con distribución polar en el citoplasma.
 AC-23 Bastones y anillos

Enfermedades Asociadas:Algunos pacientes infectados por VHC tras tratamiento con IFN/ribavirina; raro en LES, Hashimoto y
controles sanos.

Corpúsculos con formas de anillos, comas o bastoncillos en el citoplasma de células en interfase. Visibles también en el núcleo en
algunos casos.
 Lectura
e
interpretación
• Lectura :
• Patrón de fluoresceína
• Intensidad
• Dilución

• Informe
• Nuclear : Se informa Patrón Homogéneo , dilución
>1/640 .
• Citoplasmático: Negativo.
• Mitótico : Negativo.