Fundamentos metodológicos, y aplicaciones de

otras pruebas en el diagnóstico hematológico

Mg. María Lázaro Cerrón
 PROPOSITO

Al finalizar la sesión de aprendizaje el estudiante será capaz

de realizar e interpretar el diagnóstico de alteraciones
hematológicas mediante las técnicas citoquímicas.
 DESOXINUCLEOTIDIL TRANSFERASA TERMINAL
Es una enzima intranuclear encontrada en las células madre
y en células linfoides inmaduras dentro de la médula ósea,
pero no en los linfocitos B maduros, presente en el 90% de
las LLA.
CITOQUIMICA DE LA LEUCEMIA AGUDA
TINCION CITOQUIMICA ELEMENTOS CELULARES TEÑIDOS BLASTOS IDENTIFICADOS
Mieloperoxidasa MPO Gránulos primarios neutrofílicos Mieloblastos fuertemente positivos,
monoblastos debilmente positivos.
Negro Sudán B Fosfolípidos Mieloblastos fuertemente positivos,
monoblastos debilmente positivos.
Esterasa específica(CAE) Enzima celular Mieloblastos fuertemente positivos,
Esterasa no específica Enzima celular Monoblastos fuertemente positivos.
Desoxinucleotidil Enzima intranuclear Linfoblastos positivos.
transfererasa Terminal
Acido peryódico de Shiff Glicógeno Variable, positividad fuerte en los
linfoblastos y en los pronormoblastos
mieloblastos negativos.
 CITOMETRIA DE FLUJO
Es una técnica de análisis celular multiparámetrico cuyo fundamento se basa
en hacer pasar una suspensión de células alineadas de una en una por delante
de un haz de luz laser focalizado.

Seleccionar y Medir la
Identificar y separar capacidad
enumerar físicamente funcional de
subpoblaciones subpoblaciones subpoblaciones
celulares de células celulares
deseada definidas
Es un método analítico por el que se
mide la emisión de múltiples
fluorescencias y la dispersión de luz
de células o partículas microscópicas,
alineadas secuencialmente mediante
una corriente líquida laminar, cuando
son presentadas de una en una y a
gran velocidad (hasta miles de
células/segundo) frente a un haz de
luz láser de longitud de onda
adecuada
PODEMOS MEDIR EN DOS GRUPOS
INTRINSECOS
CARACTERISTICAS
Características ANTIGENICAS DE
morfológicas de la CADA CELULA:
célula : tamaño y Inmunofenotipo
complejidad
COMPONENTES CITOMETRO
SISTEMA DE FLUIDOS

DE FLUJO
SISTEMA OPTICO

SISTEMA ELECTRONICO
O INFORMATICO
LECTURA DE SEÑALES – SEÑALES DE DISPERSION
 LECTURA DE SEÑALES – SEÑALES DE FLUORESCENCIA

Los fluorocromos son moléculas (colorantes) que aceptan energía lumínica a una determinada longitud de onda,
(por ejemplo de una fuente laser) y la desprenden a una longitud de onda mayor. Estos procesos son la excitación
Y la emisión. El proceso de emisión se produce rápidamente en el orden de nanosegundos y se conoce como
Fluorescencia.

Espectro de absorción o excitación

Espectro de emisión
Fluorocromo absorbe luz
Fluorocromo emite la luz

Si el fluorocromo interacciona con la luz de excitación del laser emite energía radiante y se produce cambio de color,
parte de la energía se utiliza para la absorción, la luz emitida es de menor energía que la de excitación, la longitud de
onda emitida es mayor. STOKES SHIFF (diferencia longitudes de onda y dá idea de calidad de un fluorocromo)
En esta imagen se ven las líneas que estilizan la llegada del haz de
laser sobre la célula en flujo y la emisión de fluorocromos. El rayo
azul es el láser, el verde y el naranja representan la emisión de los
fluorocromos Isotiocianato de Fluoresceina y Ficoeritrina.
 MUESTRAS CONTROL DE
APLICACIONES
EMPLEADAS CALIDAD
• Medula ósea • Estandar patrón • Dx tumores
• Sangre periférica normalidad • EMR
• Exudados- • Estandar • Dx leucemias y
trasudados alineamiento linfomas
• Tejidos(ganglios) • Dx
• Células cultivos inmunodeficiencias
y monitizacion
• Cuantificación de
linfocitos CD4+ y
CD8+
Se utilizan
diferentes
marcadores en base
a lo que se quiera
hallar pero el
fundamento es el
mismo.
 FISH
Es una técnica citogenética que consiste en la detección
mediante sondas fluorescentes de alteraciones asociadas con la
patología hematológica. Su principal ventaja es que puede
aplicarse sobre células en interfase (no requiere células en
división) y el estudio puede realizarse, por tanto, en un número
elevado de células de manera que aumentamos la detección de
alteraciones con respecto al estudio citogenética convencional.
Las alteraciones genéticas más
frecuentes en neoplasias
hematológicas son las
translocaciones cromosómicas,
las pérdidas de material
genético (delecciones o
monosomías
cromosómicas) y las ganancias
de material genético
(duplicaciones/amplificaciones o
trisomías cromosómicas). Todas
estas anomalías se pueden
detectar por PCR en tiempo real