LINFOCITOS T

ONTOGENIA

TCR Y OTRAS MOLÉCULAS DE UNIÓN

TCR

El TCR es un heterodímero y existen dos formas:

 TCR integrado por cadenas ɑ: los LT expresan mayoritariamente este TCR.
 TCR integrado por cadenas δ: pocos LT lo expresan.
El TCR se asemeja al Fab de las Ig ya que tienen porciones variables y constantes y los genes que los
codifican son similares. En ambas cadenas, el extremo N-terminal constituye la región variable V y los
dominios más próximos a la membrana se conservan por lo que se los llama dominios constantes C. Esta
unidas por puentes disulfuro intracatenarios. Tienen una región transmembrana de 20aa, en la cual hay
muchos aa con cargas positivas que podrían generar inestabilidad, pero que no ocurre al estar asociado
al CD3. También poseen un dominio citoplasmático.

La yuxtaposición espacial de la región Vɑ y V determina el sitio de reconocimiento antigénico del

receptor. En cada una de estas regiones variables se distinguen tres regiones de mayor variabilidad,
homólogas a las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de las inmunoglobulinas: CDR1,
CDR2 y CDR3; esta última es la que presenta mayor variabilidad.

El TCR está asociado al complejo CD3, el cuál está formado por dos heterodímeros (ɛδ, ɛ) y un
homodímero (δ o zeta). Este CD3 tiene tres funciones principales:
 Transducir la señal de activación al interior celular luego del reconocimiento del antígeno.
 Permite la expresión adecuada del TCR.
 Permite la estabilización del TCR ya que estabiliza las cargas positivas de su región tranmembranal.
Los segmentos cargados positivamente del TCR interactúan con los cargados negativamente del
CD3.

Correceptores

La asociación del TCR con las moléculas correceptoras CD4 y CD8 favorece la activación celular. Las
moléculas CD4 (LT CD4+) y CD8 (LT CD8+) reconocen porciones conservadas de las moléculas de clase
II y de clase I del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH), respectivamente.

LT Ontogenia - 1
Otras moléculas

Otras moléculas que interaccionan entre la CD y el LT.

ONTOGENIA

Los linfocitos T, al igual que el resto de las células del sistema inmunitario, se originan en la médula ósea,
pero los eventos de maduración de su desarrollo se llevan a cabo íntegramente en el timo. El timo está
constituido por numerosos lóbulos, en cada uno de los cuales se distingue una región externa cortical
(corteza tímica) y una región interna medular (médula tímica). En la corteza se encuentran las células
epiteliales corticales (estrelladas) y en la médula hay CD, macrófagos y células epiteliales medulares.
Los distintos estadios en el desarrollo de las células T se distinguen no sólo por la expresión de las
cadenas del TCR, sino también por la expresión de determinadas proteínas en la membrana celular.
Cuando el LT ingresa al timo (timocito) está en un estadio doble negativo ya que no expresa ningún
correceptor (ni CD4 ni CD8). Luego pasa a ser doble positivo y expresa ambos. Finalmente, se convierte
en simple positivo y expresa uno solo de ellos, siendo CD4+ o CD8+.

Genes que codifican para el TCR y proceso de recombinación

El proceso de recombinación que se da para originar el TCR es idéntico al proceso de recombinación del
BCR. Se utilizan recombinasas y SSR. OCURRE EN EL TIMO.

Cadena ɑ: región variable Cadena ß: región variable.

Es similar a la cadena variable liviana de la Ig. Es similar a la cadena variable pesada de la Ig.
Está codificada por dos segmentos V y J que se Está codificada por tres segmentos V, D y J.
recombinan para generar la cadena ɑ reordenada. Primero se recombina DJ y luego V con DJ.
Cromosoma 14. Cromosoma 7.

Cadena : región variable Cadena δ: región variable

Es similar a la cadena variable liviana de la Ig.
Está codificada por dos segmentos V y J que se
recombinan para generar la cadena reordenada.
Tiene menos posibilidades de generar diversidad
ya que el número de cada gen V y J es pequeño.
Cromosoma 14.
Es similar a la cadena variable pesada de la Ig.
Está codificada por tres segmentos V, D y J. Los
genes que la codifican están dentro de los genes
que codifican para la cadena ɑ.
Cromosoma 7.

LT Ontogenia - 2
¿Reordenamiento ɑß o  δ?

Si bien los timocitos DN dan lugar en forma mayoritaria a los

linfocitos Tɑß, también pueden generar células T con TCRδ.
Durante la ontogenia T, la decisión sobre el linaje por seguir se
toma en el estadio DN3 (doble negativo 3).

Los reordenamientos de las cadenas ß,  y δ comienzan en forma

simultánea. Un reordenamiento exitoso de la cadena  y de la
cadena δ implica el cese del reordenamiento de la cadena ß y la
consecuente expresión en la membrana de un TCRδ Este linfocito
sale a la periferia y no experimenta ningún proceso de slección
positiva o negativa.

Sin embargo, la mayoría de los timocitos logran un reordenamiento

exitoso de la cadena ß antes de que se genere un reordenamiento
exitoso de los loci  y δ, por lo que el mayor porcentaje de los
timocitos se desarrollan hacia el linaje Tɑß.

Reordenamiento de la cadena ɑß

El reordenamiento de la cadena ß se produce en dos etapas. En una primera instancia se reordenan los
fragmentos DJ en ambos cromosomas. A continuación se asocia un fragmento V al ya DJ reordenado.
Primero se intenta un cromosoma y, en caso de no lograrse el reordenamiento, se intentará en el segundo
cromosoma. Existe, por lo tanto, exclusión alélica para la cadena ß. Un reordenamiento exitoso se
visualiza con la expresión en la membrana de la cadena ß junto con una cadena ɑ sustituta y el complejo
CD3. Esto constituye el denominado receptor preTCR. En este punto ya es doble positivo y empiezan a
reordenar los genes V y J de la cadena alfa. Una vez que se reordenan, se expresa el TCR completo.

En el linfocito pro-T es cuando se empiezan a expresar RAG1 y RAG2 y la enzima TdT. Aca es cuando
ocurre el reordenamiento de los genes de la cadena ß (y de  y δ). Cuando este reordenamiento termina,
la cadena pesada se expresa en la membrana con una cadena liviana sustituta ya que los genes de la
cadenas ɑ aún no se han reordenado y con CD3 (pre-TCR). En este punto se avanza hacia pre-T.

Luego el linfocito preT prolifera. Se expresa de nuevo RAG1 y 2. Puede expresar TdT pero esta actúa
fundamentalmente en el reordenamiento de beta, no de alfa. Se reordena la cadena ɑ. Ahora el LT tiene
un TCR completo y en este punto también ya se están expresando los dos correceptores (CD4 y CD8).

LT Ontogenia - 3
Desarrollo en el timo

El ingreso de los progenitores en forma independiente de la vasculatura ocurre durante las primeras
etapas del desarrollo embrionario y es regulado por la acción de receptores de quimiocinas, como CCR7 y
CCR9 y sus ligandos, que atraen a estos progenitores. Después de la vascularización del órgano, que
ocurre en estadios más tardíos de desarrollo embrionario y luego del nacimiento, el ingreso de los
progenitores estaría regulado, además, por los ligandos de la P-selectina (PSGL-1) que expresan los
progenitores y la P-selectina expresada por el endotelio tímico. El desarrollo de los timocitos se lleva a
cabo a medida que estos se mueven dentro del timo interactuando
con distintas poblaciones celulares.

Estadio doble negativo

Cuando los precursores T ingresan en el timo reciben el nombre

de timocitos y la interacción con las células del estroma induce su
proliferación. Si bien estos timocitos comienzan a expresar en la
membrana marcadores T, como CD2, aún no expresan ningún
correceptor (por eso se los llama doble negativo). El estadio DN
puede subdividirse en cuatro etapas (DN 1-4)

Los precursores T ingresan en el timo por la zona corticomedular como células DN y avanzan a través de
la corteza a medida que progresan desde el estadio DN1 al DN2. En el estadio DN3 los timocitos se
encuentran en la región subcapsular del timo, desde donde migran progresivamente a la porción medular a
medida que avanzan en su desarrollo. La supervivencia y el desarrollo de los timocitos DN dependen de la
presencia de la citocina IL-7 y de ligandos de los receptores Notch, ambos producidos por las células
epiteliales tímicas de la corteza (CETc). Los receptores Notch son importantes para la diferenciación al
linaje T a partir de PLC.
En este estadio se genera el pre-TCR. La expresión del pre-TCR induce la expresión en membrana de las
moléculas correceptoras CD4 y CD8 y se avanza hacia el estadio doble positivo.

Estadio doble positivo

En este estadio comienza el reordenamiento de la cadena ɑ. Una vez que se logra un reordenamiento
productivo de dicha cadena, esta se expresa en la membrana junto con la cadena ß y el complejo CD3,
constituyendo el TCR. En este estadio los linfocitos continúan siendo inmaduros y expresan bajos niveles
del TCR.
La cadena ɑ no sufre exclusión alélica. Sin embargo, a pesar de reordenar los dos alelos de la cadena ɑ,
los linfocitos T maduros tienen una exclusión fenotípica. Las dos cadenas ɑ traducidas pueden llegar a
acoplarse a la cadena ß y expresarse en la superficie del timocito, pero sólo aquel TCR seleccionado
positivamente luego de interactuar con los complejos péptido-CMH expresados por las CETc mantendrá
su expresión en la membrana, mientras que el TCR (con la cadena ɑ del otro alelo) no seleccionado
disminuirá en forma paulatina su expresión.

LT Ontogenia - 4
En este estadio ocurre el proceso de tolerancia central.

Simple positivo
Una vez finalizado el proceso de inducción de tolerancia central T, los linfocitos T maduros emigran del
timo como simples positivos, expresando solo uno de los correceptores.

Tolerancia central T
Cuando los timocitos DP logran expresar en su membrana el TCR, los mecanismos de control comienzan
a centrarse en la especificidad del receptor antigénico. Estos mecanismos forman parte de lo que se
conoce como tolerancia central T y requieren un íntimo contacto entre los TCR de los timocitos y los
complejos péptido propio-CMH expresados por las células de la estroma tímica.

Las células epiteliales corticales (CETc) intervienen en el proceso de selección positiva, mientras que las
células epiteliales medulares (CETm) y las células dendríticas tímicas lo hacen en el proceso de selección
negativa, para lo cual, tanto unas como otras deben expresar péptidos provenientes de antígenos propios
en el marco de las moléculas de clase I y clase II del CMH.

Selección positiva
Las CETc pueden procesar y presentar antígenos de una forma particular, distinta de las CETm o del
resto de las células presentadoras de antígenos.
 Las CETc tienen, además del proteasoma común, un inmunoproteasoma, capaz de generar un
conjunto particular de péptidos que se presentarán en el marco de las moléculas de clase I del CMH.
 Tienen catepsina L, una proteasa lisosómica expresada en altos niveles en las CETc que sirve para la
presentación de péptidos por moléculas de clase II del CMH.
En definitiva, las CETc pueden mostrarles a los timocitos DP un panel de complejos péptido propio-CMH
que no puede encontrarse en ningún otro tipo de célula presentadora de antígenos.

En el estadio DP, los timocitos presentes en la zona cortical del timo expresan el TCRɑß recién
reordenado, el cual necesita interactuar con los complejos péptido propio-CMH expresados por las CETc
para que el timocito logre sobrevivir.
1. Si el TCR del timocito NO reconoce ningún péptido presentado:
- La cadena  del TCR puede experimentar sucesivos rearreglos hasta ser seleccionada
positivamente para reaccionar con el MHC-péptido propio
- Puede morir por abandono. Estas células no serán útiles para articular una respuesta inmune,
ya que no podrán reconocer péptidos derivados de los patógenos en el marco de las moléculas
del CMH propias.
2. Si el TCR recibe señales fuertes al reconocer los péptidos presentados, muere por apoptosis.
Algunos pueden sobrevivir y diferenciarse en CD4+ Treguladores.
3. Si el TCR recibe señales débiles o intermedias al reconocer los péptidos presentados, continúan su
desarrollo y se diferencian en simple positivo (ojo, más tarde pueden morir en la selección negativa).
a. Si la señal de supervivencia que recibe la célula DP durante la selección positiva se genera por
la interacción del TCR con una molécula de clase I, el timocito madurará como CD8+ y dejará
de expresar CD4.
b. Si la célula DP sobrevive por señales generadas a través de interacciones con una molécula de
clase II, el timocito madurará como timocito CD4+.
c. Si la célula DP sobrevive por señales generadas a través de interacciones con una molécula
CD1d, el timocito madurará como NKT.

LT Ontogenia - 5
Selección negativa

Los linfocitos  que fueron seleccionados positivamente y que ahora son SP, pasan a una etapa de
selección negativa para evitar que reaccionen con lo propio. La médula del timo es un sitio especializado
para la selección negativa, las células presentadores principales son:
 Células epiteliales de la médula tímica (CETm)
 Macrófagos y células dendríticas

Las CETm pueden presentar, a través de moléculas de clase I y de clase II del CMH, péptidos
provenientes de antígenos de otros tejidos (tejidos extratímicos). Esto es posible porque expresan el
factor de transcripción denominado AIRE, que les permite la expresión ectópica de un gran repertorio de
transcritos que codifican proteínas expresadas normalmente en diversos tejidos y órganos periféricos. Por
ejemplo, la insulina o la tiroglobulina.

Estas células cuando expresan las proteínas tejido-específicas, le presetan péptidos de las mismas a los
LT sobre mCMH. Los macrófagos y las CD también pueden presentarlos ya que, por ejemplo, podrían
procesar los antígenos tejido-específicos producidos por las CETm y luego presentarlos a los LT.
Los LT que reconocen esos Ag propios, mueren por apoptosis. Los que no reconocen los Ag propios,
salen a la periferia y recirculan por los órganos linfoides secundarios.

La deficiencia del gen AIRE genera el Síndrome autoinmune poliglandular de tipo I.

Generación de la diversidad
 Previo contacto con el antígeno extraño: RECOMBINACIÓN SOMÁTICA
- Existencia de varios segmentos V-D-J para las cadenas H, y V-J para las cadenas L (región variable)
- Unión combinatoria de los segmentos V(D)J
- Unión imprecisa de segmentos por adición de nuceótidos (P y N)
- Asociación de cadenas ß con ɑ

 No hay HIPERMUTACIÓN SOMÁTICA

LT reguladores

La diferenciación hacia el linaje Treg ocurre durante la ontogenia T, dando lugar a los linfocitos Treg de
diferenciación tímica o naturales (nTreg). Los Treg también pueden ser inducidos fuera del timo, en los
órganos linfáticos secundarios, dando lugar a la subpoblación de linfocitos Treg conocidos con el nombre
de Treg inducibles (iTreg).

Los Treg naturales emigra del timo con un fenotipo regulador, expresando CD4, el TCRɑß, el factor de
transcripción Foxp3 y la cadena ɑ del receptor para IL2 (CD25). La diferenciación de los timocitos en
células nTreg requiere la percepción de señales de alta intensidad por parte del TCR al interactuar con
péptidos-CMH II. En vez de morir, se transforman en nTreg.

Los TReg inhiben la respuesta de las células T CD4 o CD8 a través de la secreción de citoquinas y
contactos celulares de forma antígeno específica. Secretan IL10, que ejerce su acción sobre las células
presentadoras de Ag, impidiendo su maduración y activación. También secretan TNFß, que actúa sobre
los LT inhibiéndolos.
La IL6 producida por la respuesta innata contrarresta su efecto, impidiendo
que inhiban la respuesta en la infección.

Las células Treg son el principal mecanismo de control de la tolerancia

periférica.
•Previenen la autoinmunidad
•Controlan la inflamación crónica.
•Dificultan la respuesta contra tumores

LT Ontogenia - 6
 LT δ

 Son importantes en la inmunidad antimicrobiana y actúan en la fase temprana de los procesos

infecciosos.
 Muchos se generan durante la vida fetal. Como no se expresa la TdT, no pueden agregar los
nucleótidos N.
 Se ubican en los epitelios. Los linfocitos T son sólo el 1-5-% de las células T en circulación pero
son más del 50% de las mismas en los epitelios.
 El TCR tiene una menor diversidad real ya que utilizan sólo algunos segmentos VDJ disponibles.
 No están restringidos por MHC ni reconocen péptidos presentados por MHC.
 Reconocen moléculas pequeñas fosforiladas, alquilamidas o lípidos. Otros reconocen antígenos
proteicos que no necesiten ser presentados y muchos son activados por las proteínas microbianas
del shock térmico. También reconocen moléculas que son sometidas a condiciones de stress como
NicA y NicD.
 Actúan frente a patógenos intra y extracelulares y en la inmunidad antitumoral.
 Son moduladores de la espuesta inmune.
 Cuando migran del timo ya tienen un fenotipo propio de célula preactivada, por lo que su respuesta
es rápida.

En estas tres etapas de producción de LTδ, se usan distintos fragmentos V para la recombinación de la
cadena .

LINFOCTOS NKT

 Son células T que expresan un TCR αβ. Algunas tienen un TCR invariante: V (α24) - J (α18) + V
(β11)
 Expresan marcadores de células NK.
 Tres poblaciones: DN, CD4+ y CD8+. Las CD4+ son las que salen del timo. DN y CD8+ no se saben
aun como se generan.
 Son el 1 -3 % de las células T en ganglio y bazo.
 Reconocen lípidos propios y de patógenos
presentados por CD1d.
 Algunas producen IL -4 e INF -γ rápidamente luego
de su activación. Modulan la rta inmune. Otras
producen IL17 durante infecciones bacterianas
agudas que promueve la producción de péptidos
antimicrobianos y recluta neutrófilos.
 Otras KT pueden producir perforinas y granzimas y
son citotóxicas al igual que las NK.

LT Ontogenia - 7
RESUMENN

En el estadio DN se reordenan los genes. Si el LT reordena primero el gen de la cadena ß, va a ser un

LTɑß. En el estadio DP los que reconozcan señales altas o no reconozcan señales por su TCR mueren.
Los que reconocen señales débiles o intermedias se transforman en CD4 o CD8 dependiendo de si
reconocieron el Ag sobre mCMH clase II o clase I. En la médula timica estos LT son seleccionados
negativamente a través de la presentación de Ag propios de otros órganos. Los que reconocen Ag
propios mueren por apoptosis. Los que no, salen a la periferia y se ubican en los órganos linfoides
secundarios para poder ser activados.

LT Ontogenia - 8