MICROBIOLOGIA

TRABAJO PRACTICO N° 2:
LIMPIEZA, DESINFECCIÓN, ESTERILIZACIÓN

OBJETIVOS

• Conocer los conceptos de Limpieza, Desinfección, Esterilización y los métodos

utilizados para llevar a cabo dichas acciones.
• Comprender la utilización de los métodos utilizados en diferentes situaciones
en ellaboratorio, consultorio, quirófano, etc.
• Practicar diferentes métodos de limpieza de manos y verificar la eficacia de los mismos.

INTRODUCCION

Leer y visualizar detenidamente los archivos enviados sobre:

• Fundamentos de antisepsia, desinfección y esterilización.
• Antisépticos y desinfectantes
• Lavados de manos.
• Esterilización por autoclave: https://www.youtube.com/watch?v=0oWny754Bpo
• Centro de Esterilización Hospitalario:
https://www.youtube.com/watch?v=wvI7hCskHvE
• Lavado de Manos: https://www.youtube.com/watch?v=Ar2xQ0S2_CM
• Semmelweis y su aporte científico a la medicina: Un lavado de manos salva
vidas:https://www.youtube.com/watch?v=miN7sD7JxHI

Discutir durante el trabajo prácticos estos conceptos con el docente a cargo y compañeros
de lacomisión.

ACTIVIDADES A REALIZAR

1. Reconocimiento de Estufa de esterilización y Autoclave

1. En el laboratorio encontrará una estufa de esterilización (vapor seco). Identifique la

misma, y reconozca las variables que el equipo permite modificar. Determine las
condiciones para esterilizar material de vidrio.
 Figura: Estufa de Esterilización

2. A continuación identifique el autoclave, y describa sus partes y simule un

ciclo deesterilización:
Figuras y esquemas de autoclave tipo Chamberland
3. Agregar 2.5 lts. de agua destilada en el autoclave.

4. Disponer el material a esterilizar sobre una plataforma evitando amontonamiento. Los

frascos deben estar con la tapa floja y las cajas metálicas con la tapa entreabierta.

5. Cerrar y atornillar la tapa del autoclave.

6. Verificar que la llave de salida se encuentre abierta.

7. Encender la fuente térmica para hervir el agua dentro del autoclave.

8. Purgar hasta 5' después que se vea salir por la llave de escape solo vapor.

9. Cerrar la llave.

10. Controlar el aparato de registro que puede ser un manómetro calibrado en grs./cm2 o
lbs/sq.in (libras por pulgada cuadrada), o un termómetro en ºC o F. Cuando el aparato
registre
1.054 grs./cm2, 15 lbs/sq.in, 121ºC o 249.8F, se empezará a contar el tiempo.

11. Mantener el registro constante durante 15-20 minutos.

12. Apagar la fuente térmica y dejar enfriar sin abrir.

13. Cuando la temperatura o presión haya descendido, abrir la llave de escape de vapor.

14. Abrir el autoclave.

Los materiales salen húmedos por el contacto con el vapor. Aquellos que estén envueltos en
papel deberán secarse en la estufa, ya que el papel mojado es muy fácil de romper y el material
se contaminaría nuevamente.

2. Preparación de una Solución de Alcohol Etilico al 70%

El objetivo de esta actividad es la preparación de 100mL de una solución de alcohol etílico al

70%que será utilizada posteriormente.

1. Realizar el cálculo de cuantos mililitros de alcohol etílico, y cuanto de agua destilada

sonnecesarios para obtener 100 mL de solución de alcohol al 70% V/V.

2. Tomar el material volumétrico más adecuado para tomar el volumen de alcohol.

Discutalos posibles errores en la medición según el material elegido.

3. Completar hasta 100mL con agua destilada en un material volumétrico adecuado.

4. Pasar la solución a una pizeta o pulverizador.

3. Lavado de Manos

El objetivo de esta actividad es comprobar la presencia de microorganismos en manos de

estudiantes sin lavar, posterior al lavado y utilizando una solución de alcohol al 70%. Para
comprobar el desarrollo o no de microorganismo se utilizará medio de cultivo denominado LB o
caldo Luria Bertani sólido en placa de Petri (esto ya fue realizado por los Jefes de TrabajoPrácticos).
En resumen el medio LB posee nutrientes que permite el desarrollo de un amplio rango de
bacterias. En algunos casos se lo utiliza líquido, y en otros se agregar compuestos que lo
solidifican (con es el caso del polisacáridoagar):
Preparación de medio LB 1L líquido:
1. Pesar:
• 10g de triptona
• 5g de estracto de levadura
• 1g de cloruro de sodio
2. Disolver en 950 mL de agua destilada.
3. Ajustar el pH a 7.0 con una solución de hidróxido de sodio 1N.
4. Llevar el volumen final de 1L.
5. Autoclavar por vapor húmedo por 20 min a 1 atmósfera.
6. Dejar enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización.
7. Almacenar a 4°C si no se va a utilizar.
8. Mantener a temperatura ambiente o bien +4°C.

Preparación de medio LB 1L sólido:

1. Preparar LB como en el caso anterior.
2. Previo a autoclavar agregar 15 g/L de agar.
3. Antes que se solidifique a temperatura ambiente agregar 10mL a cada placa de Petri
esterilizadaen ambiente estéril (alrededor de llama de mechero o campana de flujo laminar) y
dejar solidificar colocando la placa sobre una superficie plana.

Procedimiento de Lavado de Manos: Cada grupo elegirá tres integrantes:

1. Uno no se lavará las manos (asegurar que no se lavó las manos antes de entrar
al
 laboratorio)

2. Otro se lavará como lo indica la guía adjunta.

3. Otro se lavará con la solución de alcohol etílico 70%.

4. Cada uno de los integrantes quitará la tapa de la placa de Petri con medio LG agar en
la cercanía de la llama de un mechero, y apoyará suavemente los dedos de una de las
manos.Una vez realizado esto, tapará la placa y la dejará en estufa de cultivo a 37°C
por 24 hs y evaluará los resultados. ¿Qué riesgo se corre al realizar este punto en un
ambiente no estéril?

Alguno de los resultados posibles:

Actividad:

Realizar un informe describiendo lo realizado respecto a lavado de mano y resultados de placas de

cultivo después de 24-48hs de incubación.