NÚCLEO

 10% del volumen total de la célula.

 Donde se encuentra confinado el ADN.
 Delimitado por la envoltura nuclear.
En el COMPARTIMIENTO NUCLEAR se localizan:

46 cromosomas
Varios tipos de ARN (ARNm, ARNr, ARNt,
ARNp) que se sx en el núcleo al ser
transcriptos sus genes. Los ARN salen del
núcleo a través de los poros de la envoltura
nuclear.
 Nucléolo: Donde se localizan los genes de los
ARNr y los ARNr recién sx. Es cromatina.
 Proteínas: Como las que regulan la actividad
de los genes, las que promueven el
procesamiento de los ARN, las que se
combinan con los ARNr en el nucléolo, los ADN polimerasas y polimerasas. Todas ellas ingresan
a través de los poros nucleares.
NUCLEOLO
o Donde se localizan los genes de los ARNr y los ARNr recién sx.
o Es cromatina.

2 partes: GRANULAR en la periferia (ensamblaje de subunidades de ribosomas) y FIBRILAR en el centro (Sx

de ARNr)
ENVOLTURA NUCLEAR

 Compuesta por dos membranas concéntricas que se continúan con la membrana del RE. El espacio
entre ellas se denomina “espacio perinuclear”.
 Se encuentran varios poros que comunican el interior del núcleo con el citosol, y está protegida por
filamentos intermedios.
 Está sostenida por la LÁMINA NUCLEAR que le da forma y resistencia.
 Tanto la ENVOLTURA NUCLEAR como la LÁMINA NUCLEAR desaparecen, se desarman, al comienzo
de la mitosis.
ENTRADA Y SALIDA DE PROTEÍNAS AL NÚCLEO
o ENTRADA:

- Mediante un mecanismo selectivo que permite el ingreso sólo de las que posean un péptido señal
específico (NSL o señal de localización nuclear) que abre el camino para que puedan pasar por el poro.
- La señal NSL es reconocida por la proteína transportadora importina, ésta última se una a la proteína
ran-GDP y el complejo “importina ran-GDP” ingresa al poro nuclear.
- Ya dentro del núcleo, ran-GDP es reemplazado por ran-GTP y la proteína queda libre.
RESUMEN  Se necesita energía en forma de ADP y la proteína transportadora importina, y una señal
NSL.
 o SALIDA:

- Las proteínas que salen del núcleo dependen de la RAN y de señales específicas para poder atravesar
los poros de la envoltura nuclear.
RESUMEN  Los péptidos señal se denominan NES y son reconocidos por la proteína trasportadora
llamadas exportinas. Usa energía GTP.
CROMOSOMAS
o Cada cromosoma está constituido por una molécula de ADN asociada con diversas proteínas.
o Las proteínas asociadas se clasifican, dos grandes grupos: las histonas y un conjunto heterogéneo
de proteínas no histónicas.
o El complejo formado por el ADN, las histonas y las proteínas no histónicas se llama CROMATINA.
o Los cromosomas están formados por cromatina.
o El cromosoma posee un centrómero, dos telómeros y muchos orígenes de replicación.
Es el mayor grado de condensación del
ADN
Centrómero: participa en el reparto a las
células hijas de las dos copias cromosómicas
que se generan a consecuencia de la
replicación del ADN.
Telómeros: pertenecen a los extremos de los
cromosomas, cuyo ADN se replica en modo
distinto al resto del ADN.
- GENOMA: En las moléculas de ADN se
encuentra la información genética de la célula.
- GENES: En algunos sectores, el ADN exhibe
secuencias de nucleótidos que se transcriben.
Células somáticas  Células DIPLOIDES = 46
cromosomas
Células gametos (espermatozoides - óvulos)
Células HAPLOIDES = 23 cromosomas.
CROMATINA
DEF: Complejo formado por el ADN, las histonas y las proteínas no histónicas.
La cromatina puede ser eucromática o heterocromática.

 Eucromatina: Durante la interfase - Menos

compactada y condensada - Localización central Y
Transcripcionalmente activa.

 Heterocromatina: Más condensada y compactada que

la eucromatina. Localización periférica. 2 tipos:

o H. Constitutiva: Altamente condensada en todos los

tipos celulares y no se transcribe. EJ: Centrómero.
 o H. Facultativa: Condensada o descondensada según el tipo de célula o el estadio de desarrollo. EJ:
Corpúsculos de Barr.

EMPAQUETAMIENTO DEL ADN

1º NIVEL: Fibra Fina
 Fibra fina de 10nm o collar
 Nucleosoma:
o Menor porción de cromatina
o Unidad del empaquetamiento del ADN, en el que se enrollan en
dos vueltas sobre un octámero de histonas. La H1 Conecta a los
nucleosomas.
Cromatosoma: nucleosoma+H1 ADN espaciador: separa a dos nucleosomas consecutivos. H1=histona

2º NIVEL: Selenoide

 Fibra gruesa de 30 nm
 Estos nuevos enrollamientos son inducidos por condensinas al
comienzo de la división celular.
 Es como si los nucleosomas se fueran enroscando sobre un
cilindro.
o 6 nucleosomas por vuelta.
o H1 sostiene esta interacción

3º NIVEL: Lazos o Bucles

 El solenoide se pliega formando bucles
sobre un cordón proteico (proteínas no
histónicas)
 Secuencias específicas del ADN (MAR y
SAR) del solenoide se unen al cordón
proteico formando los bucles.

4º NIVEL: CROMOSOMAS: Máximo nivel de

empaquetamiento del ADN.

A- Doble hélice del ADN

B- Nucleosomas
C- Solenoide
D- Bucles
E- Cromosoma pre-replicativo
F- Cromosoma post-replicativo.

CLASIFICACIÓN DE CROMOSOMAS
Según la posición del centrómero se clasifican en:
 Metacéntricos: Pues en el centrómero en una posición más o menos central.
o Existe poca o ninguna diferencia en el largo de los brazos de las cromátidas.

Submetacéntricos: El centrómero se encuentra alejado del punto

central.
o Las cromátidas poseen un brazo corto y uno largo.

Acrocéntricos: el centrómero se halla cerca de uno de los extremos

del cromosoma.
o Los brazos cortos de las cromátidas Son muy pequeños.

CARIOTIPO HUMANO
Es el conjunto de cromosomas ordenados según un criterio establecido

Las células somáticas tienen 46 cromosomas: 2n = 46 (DIPLOIDES)

o 22 pares de autosomas + 2 cromosomas sexuales (XX en la mujer - XY en el varón)
o cada par de cromosomas es un par de homólogos.
o Uno se hereda de la madre, y el otro del padre, en el momento de la fecundación.

Los gametos tienen 23 cromosomas: n = 23 (HAPLOIDES)

o 22 autosomas + 1 cromosoma sexual (X en la mujer - X o Y en el varón)

o El cariotipo corresponde a una célula DIPLOIDE 2n=46.

o En una neurona de este individuo SÍ hay cromosomas sexuales

CARIOTIPO HUMANO MASCULINO Y FEMENINO

ANEUPLOIDÍAS

Alteración del número de cromosomas que presenta un individuo.

Un ALELO es cada una de las dos o más versiones de un gen. Un individuo hereda dos alelos para cada gen,
uno del padre y el otro de la madre. Los alelos se encuentran en la misma posición dentro de los
cromosomas homólogos.

- Si los dos alelos son idénticos, el individuo es homocigoto para este

gen.

- Si los dos alelos son diferentes, el individuo es heterocigoto para ese

gen.

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NUCLEÓTIDOS y ESTRUCTURA DEL ADN Y ARN

1- NUCLEÓTIDOS  FUNCIONES
o Monómeros de los ácidos nucleicos (ADN y ARN)
o Transferencia de energía (ATP).
o Segundos mensajeros de ciertas señales químicas.
o Activadores de moléculas en procesos de biosíntesis de lípidos, proteínas e hidratos de carbono.
o Coenzimas (NAD+ FAD, etc.)
ESTRUCTURA de NUCLEÓTIDOS

NUCLEOTIDO = BASE NITROGENADA (BN)+ PENTOSA +

PO4H3.

NUCLEÓSIDO= BN+PENTOSA

La pentosa se une a la base nitrogenada por medio de

una unión covalente de tipo β-N-glucosídica entre el
HO del C1’ de la pentosa y un N de la base nitrogenada

PENTOSA  Ribosa (ARN) - Desoxirribosa (ADN)

PENTOSAS DE LOS NUCLEOTIDOS: RIBOSA (ARN) DESOXIRRIBOSA (ADN)

El ADN es desoxirribosa porque pierde el oxígeno

del HO (hidroxilo)

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DIFERENCIA en el Carbono prima Nº 2

BASE NITROGENADA DE LOS NUCLEOTIDOS

PÚRICAS PIRIMIDICAS

Más chicas Más grandes

Terminación OCINA Terminación IDINA

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NOMENCLATURA (pentosa + BN)

_______________________________________________________________________________________

NUCLEÓSIDO + FOSFATO  NUCLEOTIDO

UNION ENTRE NUCLEOTIDOS ENLACE FOSFODIESTER

El fosfato 5’ de un nucleótido se une al HO 3’ de otro nucleótido formando un puente fosfodiester.

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 2- ÁCIDOS NUCLÉICOS (ADN – ARN)

ADN
Modelo de Watson y Crick:

 Dos cadenas polinucleotídicas

(desoxirribonucleótidos de A – T y G – C)

 Los nucleótidos de cada cadena se unen

por uniones puente fosfodiéster.

 Las cadenas son antiparalelas: Una corre

en dirección 5’ (tiene libre la parte donde
está el fósforo) a 3’ (tiene libre un OH) y
la otra en la dirección opuesta. (Dirección
inversa)
 Las cadenas son complementarias A - T (2
puentes de H) y G – C (3 puentes de H).

 El número de nucleótidos de A es igual al

de T y el de G al de C.

 Conformación helicoidal (surco mayor y menor).

 BASE NITROGENADA ADN = C - G A – T

 ADN es Hemicatenario, antiparalelas complementarias entre sí
TIPOS DE ADN

DESNATURALIZACION y RENATURALIZACION DEL ADN

 El ADN puede naturalizarse (enfriarse) o desnaturalizarse (calentarse= >95ºC)

 El ADN es ESTABLE porque:
 El ADN está unido por puente de H +  1 sólo puente de H+ es DÉBIL, pero MUCHOS PUENTES DE H +
ES FUERTE.
 ARN

TIPOS

o ARNm = mensajero
o ARNr = ribosómico
o ARNt = transferencia

 Son MONOCATENARIOS (presentan 1 sola

cadena)
 Son polímeros de ribonucleótidos
 Tienen URACILO (BN) en lugar de Timina.
 Tienen RIBOSA (PENTOSA) en lugar de
desoxirribosa
 BASE NITROGENADA ARN = C - G A - U
 ARNm

o Mayor tamaño.
o Hasta 5.000 nucleótidos.
o Donde se encuentra el mensaje para la síntesis de determinada proteína.
o El ribosoma (se sintetiza con partes de ARNr, en el nucléolo del núcleo) lee el mensaje.
o Tiene la información genética y la lleva desde el núcleo al citoplasma.
o Poco después de su Sx, sale del núcleo a través de los poros nucleares asociándose a los ribosomas
donde actúa como matriz los AA en la cadena proteica.

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ARNt

o Menor tamaño.
o Hasta 50 nucleótidos.
o Transporta / transfiere a los AA dentro del
mensaje que llevaba el ARNm.

o En su extremo se fija el AA en cuestión.

o En el inferior se encuentra el anticodón (es
secuencia de 3 BN) cuya función es decir qué
AA transporta en su extremo 3´

o El ARN de transferencia:
- Posee una serie se brazos (D y T), cuya Fx es
unirse y transportar AA hasta los ribosomas.
- Posee 2 extremos: uno aminoacídico y el
otro anticodón.

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ARNr

El ARN ribosomal, se asocia a proteínas y forma ribosomas.

1) Las bases púricas son C y T y tienen menor tamaño que las pirimídicas. FALSO
Las bases púricas son A y G y tienen MAYOR tamaño que las pirimídicas C T (U en ARN)
2) Si una cadena de ADN tiene 20% de bases púricas entonces la cadena complementaria tendrá 80%
de bases pirimídicas.FALSO
Si una cadena de ADN tiene 20% de bases púricas entonces la cadena complementaria tendrá 20% de
bases pirimídicas porque, por ejemplo: Bases púricas (A G) y la cadena complementaria de bases
pirimídicas (T C) es igual (20%) para, justamente, complementarse.
3) Las bases pirimídicas del ADN son las mismas que las del ARN, pero las púricas son diferentes. FALSO
Las bases pirimídicas del ADN NO son las mismas que las del ARN, porque las bases pirimídicas del ADN es
la Timina y la del ARN es el Uracilo. Pero las bases púricas del ADN y ARN son las mismas (Guanina y
Adenina).
4) En una molécula de ARN hay la misma cantidad de bases púricas que pirimídicas. VERDADERO
5) Las dos cadenas del ADN son antiparalelas y esto significa que las bases nitrogenadas
complementarias se unen por medio de puentes de hidrógeno. FALSO
Las dos cadenas del ADN son antiparalelas y esto significa que una de las cadenas corre en dirección 5’ a 3’
y la otra en la dirección opuesta (de 3´a 5´)
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PREGUNTAS TIPO CHOICE
1) Dada la siguiente secuencia de ADN: 5 AAGGTTTCCGGGTGC 3' Su secuencia complementarla en la
molécula de ADN será:

a- 3' AAGGTTTCCGGGTGC 5
b- 5' TTCCAAAGGCCCACG 3
c- 3' UUCCAAAGGCCCACG 5'
 d- 3' TTCCAAAGGCCCACG 5'

2) SI una cadena de ADN tiene 12 nucleótidos púricos, entonces su cadena complementarla será:

a- Paralela y tendrá otros 12 nucleótidos púricos.

b- Paralela y tendrá 24 nucleótidos pirimídicos.
c- Antiparalela y tendrá 12 nucleótidos pirimídicos.
d- Antiparalela y tendrá 24 nucleótidos púricos.

3) En una molécula de ADN las bases nitrogenadas de una cadena se unen a las complementarlas por
medio de uniones:

a- Peptídicas.
b- Puente de hidrógeno.
c-Fosfodiéster.
d- N-glucosídicas
4) En un polinucleótido, las uniones entre los monómeros son:
a- Fosfodiéster. b- Peptídicas.
d- N-glucosídicas. c- Puentes de hidrógeno.
5) La figura representa a:
a- Un nucleósido.
b- Un dinucleótido.
c- Un ribonucleótido.
d- Un desoxirribonucleótido.

6) SI una molécula de ADN tiene 20% de Adenina, entonces tendrá:

a- 20% de Guanina.
b- 80% de Timina.
c- 80 % de Guanina.
d- 30% de Citosina

7) Indique cuál de las siguientes opciones se cumple siempre en el ADN:

a- A/G=1
b- T/C=1
c- A+T=C+G
d- A+G=T+C
8) En una molécula de ADN, el 30% de sus nucleótidos contiene adenina. ¿Qué porcentaje de los
nucleótidos de esa molécula contiene desoxirribosa?
a-20%
b- 30%
C-60%
d-100%
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 RESPUESTA CON EXPLICACIÓN
1) Respuesta Correcta D. Porque se respeta la base complementaria (T-A y C-G) y porque va de forma
antiparalela (una corre en dirección 5’ a 3’ y la otra en la dirección opuesta)

2) Respuesta Correcta C. Porque la cadena del ADN siempre es antiparalela. En este caso, debe tener 12
nucleótidos pirimídicos (C T U) porque complementan a las bases púricas (A G).

3) Respuesta Correcta B. Las bases nitrogenadas se unen entre sí por uniones puente de hidrógeno (A - T
(2 puentes de H) y G – C (3 puentes de H).

4) Respuesta Correcta A. En un polinucleótido, las uniones entre los monómeros son de tipo fosfodiéster.

5) Respuesta Correcta D. Un desoxirribonucleótido porque en su 3´prima sólo tiene H y no OH, es decir,

esta “desoxi”.

6) Respuesta Correcta D. Porque si tiene el 20% de A, tiene que tener el 20% de T  40%

sí tiene el 30% de C, tiene que tener el 30% de G  60%

Entonces, si A tiene 20% su base complementaria también, pero entre los dos son 40%. Sabiendo que el
100% son todas las bases y el 40% está ocupado por AT, entonces el 60% faltante lo tiene CG (30% c/u)

7) Respuesta Correcta D. Porque se complementan A con T, y, C con G. NUNCA se puede juntar A con G
porque A es grande y G también. Tampoco se pueden juntar C con T porque ambos son muy pequeños.

8) Respuesta Correcta D. Se está hablando del ADN y todo ADN tiene DESOXIRRIBOSA. Pero si el caso fuera
ARN, sería incorrecto porque el ARN no tiene desoxirribosa, sino RIBOSA.

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GENES

GENOMA GEN

- Conjunto de genes que caracteriza a una especie. - Secuencia lineal, organizada, de ácido nucleico
que contiene la información necesaria para la
- En las células el genoma es ADN (en algunos virus síntesis de una macromolécula con función génica
es ARN). específica.

- La especie humana tiene 25000 pares de genes. - En las células los genes son secuencias de ADN.

- El ADN humano está organizado en 46 - En algunos virus son secuencias de ARN.

CROMOSOMAS y cada cromosoma contiene varios
cientos de genes.
- Los cromosomas están formados por cromatina)
- NÚCLEO: NORMAL: lleno de cromatinas
- La molécula resultante de la expresión final del
gen puede ser una proteína o un ARN.
- Secuencia de ADN que por transcripción genera
algún tipo de ARN.

MITOSIS: lleno de cromosomas.

 ESTRUCTURA DE UN GEN

 SEGMENTO PROMOTOR  Señala donde comienza, cerca del extremo 5´donde empieza la sx del ARNm.
Cerca del segmento que va a codificar la proteína
 SEGMENTO REGULADOR  Determina cuando y cuántas veces debe transcribirse el gen. Están lejos del
codificador. Dirá cuando se comienza la transcripción del gen y cuántas veces será transcripto
 SEGMENTO CODIFICADOR  Codifica.
 SEGMENTO DE TERMINACIÓN  Se encuentra cerca del extremo 3´ y marca el final de la transcripción del
ARNm. Indica fin del gen.

Las partes de la secuencia de genes que contienen la información para producir las proteínas se llaman EXONES, ya
que se expresan, mientras que las partes de la secuencia del gen que no codifican se llaman INTRIONES (o pueden
salir del núcleo, vuelve a integrarse al material, no cumplen ninguna función), porque están en medio o interfieren
con los exones.

DOGMA D ELA BIOLOGÍA MOLECULAR

GENES MITOCONDRIALES (SERES HUMANOS)

El cromosoma circular del mt ADN tiene un tamaño de 16,5 kb, se localiza en el interior de la mitocondria
y contiene 37 genes. Codifica: 2 genes codifican los ARNr. 22 genes codifican ARNt. 13 ARNm.
NO HAY INTRONES NO TIENE HISTONAS.

CARIOTIPO HUMANO
 Las células somáticas humanas tienen 46 cromosomas: 2n=46 (DIPLOIDES):
o 22 pares de autosomas + 2 cromosomas sexuales (XX en la mujer; XY en el varón)  Cada par de
cromosomas es un par de homólogos.
o Uno se hereda de la madre y el otro del padre en el momento de la fecundación.

 Las gametas tienen 23 cromosomas: n=23 (HAPLOIDES):

o 22 autosomas + 1 cromosoma sexual (X en la mujer; X ó Y en el varón).

CROMOSOMAS HOMOLOGOS

 Uno se hereda por vía materna y el otro por vía paterna en el

momento de la fecundación.
 Tienen igual forma, tamaño, tinción.
 Tienen la misma secuencia de genes.
 Informan para los mismos caracteres, aunque no
necesariamente portan la misma información
 LOCUS: Posición que ocupa un gen en el cromosoma.
 ALELOS: genes ubicados en el mismo locus en cromosomas
homólogos, por lo tanto, informan para la misma
característica.
 GENOMICA

En los genomas de los eucariontes existen secuencias de nucleótidos en apariencia inservibles, que no
obstante contribuyen al tamaño absoluto del genoma.

ORGANIZACIÓN DEL GENOMA EUCARIOTA:

A- SECUENCIAS CODIFICANTES

o Secuencias de copia única: son la mayor parte de los genes que codifican para ARNm (codifican para
proteínas).
o Secuencias mínimamente repetidas: - Familias de genes: genes muy parecidos que codifican para
proteínas similares. Provienen de genes ancestrales que fueron mutando.
o Secuencias moderadamente repetidas: Permiten generar una gran cantidad de ARN en poco tiempo.
Genes que codifican para ARNr y ARNt.

B- SECUENCIAS NO CODIFICANTES

o Secuencias altamente repetidas: Carecen de función conocida. Son secuencias cortas de ADN repetidas
entre 1.000 y 1.000.000 de veces.
o Transposones: Secuencias que pueden cambiar de posición dentro del genoma (“genes saltarines”).
o Retro transposones: secuencias que se han dispersado en el genoma después de una transcripción
inversa a partir de ARN.

Secuencia promotora: se
acopla la ARN polimerasa.
Secuencia reguladora:
Regulación de la
transcripción. (factores de
transcripción específicos
FTE)
Secuencia terminadora:
marca el fin de la
transcripción.
Exón: secuencia
codificante. Intrón: secuencia no
codificante

REGULACIÓN DE EXPRESION GENÉTICA EN EUCARIOTAS

o Todas las células de un organismo pluricelular tienen los mismos genes.

o Todas las células humanas tienen dentro de su núcleo los 25.000 genes.
o Durante el desarrollo embrionario y la especialización celular los genes se expresan de forma
diferencial (concepto on-off génico).
o Existen diversos mecanismos que regulan la expresión génica.
 INGENIERÍA GENÉTICA

Actualmente es posible:

- Cortar regiones específicas de la molécula de ADN

- Producir copias de cada fragmento que se corte

- Determinar la secuencia exacta de los nucleótidos

- Es posible aislar y modificar un GEN

TECNOLOGÍA DE RECOMBINACIÓN DE ADN

 FRAGMENTACION DEL ADN: Se corta la molécula de ADN en sitios específicos por medio de enzimas
llamadas endonucleasas de restricción.
 SECUENCIACION DEL ADN: Se determina el orden o la secuencia de los nucleótidos en el ADN
 HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS: Mezclar dos ácidos nucleicos distintos y fabricar uno solo
respetando la complementariedad de la base.
 CLONACION MOLECULAR: A partir de una molécula de ADN se pueden hacer millones de copias
idénticas. La clonación molecular consiste en insertar un fragmento de ADN de interés en un vector
(molécula capaz de replicarse en una célula) o mediante una enzima ADN polimerasa.
 EDICIÓN DE GENES: TERAPIA GÉNICA

1- FRAGMENTACIÓN DEL ADN

o Se usan endonucleasas de restricción (Estas enzimas reconocen secuencias específicas) y allí cortan:
 Cortes asimétricos generan extremos cohesivos
 Cortes siméticos generan extremos romos

Enzimas de restricción (endonucleasas de restricción)

 Mapas de Restricción (determina en que zonas del
ADN analizado se encuentra esa secuencia)
____________________________________________

2- FRAGMENTACIÓN Y SEPARACIÓN

- La enzima EcoRI bacteriana corta el ADN del virus fago Lambda en cinco sitios produciendo 6 fragmentos
de ADN.

- Por electroforesis se separan los fragmentos según su tamaño.

- El ADN se tiñe con colorante fluorescente y se fotografía para identificar los fragmentos.

3- HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS

-Si se coloca ADN en una solución a 100ºC y pH 13, las bases

complementarias se separan porque se rompen los puentes de H, y
las dos cadenas quedan totalmente separados, éste proceso se
denomina DESNATURALIZACION DEL ADN.

- Cada cadena separada puede reunirse con otra, siempre y cuando

las bases sean complementarias, si se baja la temperatura hasta
65°C y se neutraliza el pH. Este proceso se denomina
RENATURALIZACION.

Se pueden unir dos cadenas que provengan: - del mismo ADN - de

distinto ADN -de ADN con ARN

4- CLONACION DEL ADN: Se obtienen copias de un segmento de ADN utilizando un vector o una enzima:
 o 4 A- Clonación usando un vector (plásmido) : Se corta el ADN a clonar con las mismas enzimas de
restricción que el plásmido.

• Se forman extremos complementarios y por lo tanto se liga el fragmento de ADN al plásmido.

• El plásmido lleva un gen de

resistencia a un antibiótico.

• Se cultivan bacterias en un
medio de cultivo que contiene al
plásmido recombinante.

• Algunas bacterias toman el

plásmido y otras no.

• Se seleccionan las que contienen

o 4 B- PCR: El ADN se puede amplificar mediante la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR):

• Se usa una ADN polimerasa bacteriana termorresistente (polimerasa Taq).

• Se calienta el ADN a 95 º para desnaturalizarlo.

• Se enfría a 55º para permitir la unión de los cebadores.

• Se calienta nuevamente a 72 º para que pueda actuar la Taq y completar la síntesis.

• Se puede repetir el proceso múltiples veces, duplicando la cantidad de ADN en cada ciclo.

5- EDICION DE GENES: TERAPIA GENICA

_______________________________________________________________________________________

TRANSCRIPCIÓN
 El comienzo de la transcripción tiene
lugar cuando, a través de su base.
Uno de esos ribonucleótidos
establece una unión transitoria con
la base complementaria del primer
nucleótido del gen. En este proceso
interviene el promotor del gen luego
de ser activado por factores.

El promotor se une a la ARN

polimerasa y hace que interactúe
con el ADN en el sitio en que debe
iniciarse la transcripción (en el
extremo 5´del segmento codificador
del gen) que es marcado por el propio promotor. Allí el ARN polimerasa forma una burbuja que determina
la separación localizada de las dos cadenas del ADN y deja expuesto el 1º desoxirribonucleico que va a ser
leído. Luego de que se forma un dinucleótido se inicia la sx de ARN en dirección 5´a 3´. El ARN se va
alargando gracias a la ARN polimerasa, aunque la cadena molde de ADN sigue unido al ARN.

La transcripción finaliza cuando la ARN polimerasa alcanza la secuencia de terminación en el extremo 3´del
gen y la enzima se libera.

La enzima topoisomerasa I desenrolla al ADN durante la transcripción y forma una “burbuja” o espacio
entre las cadenas del ADN para que se pueda realizar la transcripción al ARN.

ARN polimerasa:

 Enzima que cataliza la reacción de síntesis de ARN

 Transcribe el ADN.
 Se desplaza a lo largo del ADN y desenrolla la hélice.
 A medida que avanza añade nucleótidos uno a uno a la cadena de ARN que se está polimerizando.
 Utiliza como molde UNA de las dos hebras desenrolladas del ADN.
 Nucleótidos que se incorporan: ribonucleótidos trifosfato (ATP, UTP, CTP y GTP)
 La energía almacenada en sus enlaces fosfato-fosfato se utiliza para la reacción de polimerización.
 La enzima ARN polimerasa, requiere de factores de transcripción (TFII) para la formación del
complejo de transcripción activo.
 La cadena de ADN que actúa de molde para la síntesis de ARN debe ser leída por la ARN
polimerasa en sentido 3' a 5'.
 La polimerasa inicia la transcripción en la región del ADN donde se encuentra el PROMOTOR de la
transcripción.
 Reconoce las secuencias señalizadoras – Abre la hélice – Lee el molde de 3´a 5´.
 Reconoce y ubica los nucleótidos complementarios.

LOS GENES QUE CODIFICAN A LOS ARNm SON ACTIVADOS POR FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN.

La sx de un ARNm se produce cuando las secuencias reguladoras y el promotor de cierto gen, se activan
por factores de transcripción.

FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN (FT)

 o Proteínas que regulan la transcripción de los genes.
o La enzima ARN polimerasa requiere de factores de transcripción (TFII) para la formación del
complejo de transcripción activo.
o Se unen específicamente a secuencias cortas de
ADN localizadas en las regiones promotoras de
genes.
o Son capaces de promover o inhibir la actividad de
la enzima ARN polimerasa II.
o Interactúan con el complejo de iniciación de la
transcripción.

Estos FT pueden ser: Constitutivos o Facultativos

 FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN CONSTITUTIVOS

o Factores de transcripción basales (FTB), comunes para casi todos los genes.
o No solo ACTIVAN AL PROMOTOR y contribuyen al DESENRROLLAMIENTO DEL ADN alrededor de las
histonas (nucleosoma) en la parte inicial del segmento codificador.
 FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN FACULTATIVOS
o FT que son particulares para cada gen.

Factores ACTIVADORES de la transcripción FACTORES REPRESORES DE LA TRANSCRIPCIÓN

Factores de transcripción: Fx de colaborar con la actividad de iniciar la transcripción, regular, elongarlo y
finalizar la transcripción.

ARN: ácido nucleico, polímero de nucleótidos unidos por enlace fosfodiéster

Transcripción del ADN: síntesis de ARN proceso el cual la información

contenida en el ADN se transforma en ARN

ARNm (ARN mensajero)  codifican proteínas

ARNt (ARN de transferencia)  forman la estructura básica de los ribosomas y

catalizan la síntesis de proteínas.

ARNr (ARN ribosomal)  intervienen en la síntesis de proteínas como

adaptadores entre el ARNm y los aminoácidos durante la traducción.

Mismo lenguaje: secuencia de nucleótidos

(ADN) → secuencia de nucleótidos (ARN)

Misma información, distinta estructura

química (ADN ≠ ARN)

___________________________________

TRANSCRIPCIÓN

1º PASO DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Proceso: Transcribir la info almacenada en la secuencia de ADN para Sx una molécula de ARN a partir de
una cadena de ADN como molde.

 ARN polimerasas (ADN dependiente)

 Unen nucleótidos para formar una cadena de ARN

Resultado de la transcripción: Sx de una molécula de ARN (simple

cadena) complementaria a una de las cadenas del ADN.

Todos los tipos de ARN están codificados en el ADN

ADN → ARN en el proceso de Transcripción en el núcleo.

TIENE 3 ETAPAS  INICIACIÓN – ELONGACIÓN – TERMINACIÓN

1-) INICIACIÓN

 Inicio de la transcripción de un gen eucariota por parte de la ARN polimerasa II.

 Para comenzar la transcripción, la ARN polimerasa requiere varios FACTORES GENERALES DE
TRANSCRIPCIÓN
 Promotor contiene una secuencia de ADN localizada a unos 25 nucleótidos de distancia del sitio de
inicio de la transcripción: caja TATA
  ARN polimerasa reconoce y se une a la caja
TATA gracias a TBP (proteína de unión a TATA,
subunidad del factor general de transcripción
TFIID) y TFIIB.
 Luego se unen al promotor tanto la ARN
polimerasa como el resto de los factores
generales de transcripción.
 Síntesis del extremo 5' del ARN

2-) ELONGACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN

 ARN polimerasa adiciona nucleótidos a la hebra

de ARNm.
 La elongación de la transcripción en eucariotas
está acoplada al procesamiento del ARN.

3-) TERMINACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN

 Se sintetiza el extremo 3' de la molécula de ARN.

 Ocurre cuando la ARN polimerasa se encuentra secuencia de terminación en el gen.
 La hebra de ARNm está completa y se separa del ADN.
 Los pasos de la transcripción pueden tener lugar de forma simultánea con el procesamiento del ARN.
 Molécula resultante: ARN copia complementaria a una de las dos cadenas del ADN.

Secuencia promotora: se
acopla la ARN polimerasa.
Secuencia reguladora:
Regulación de la
transcripción. (factores de
transcripción específicos
FTE)
Secuencia terminadora:
marca el fin de la
transcripción.
Exón: secuencia
codificante. Intrón: secuencia no
codificante

TRANSCRIPCIÓN
 Significa que el ADN será un molde, el mensaje se escribe tal cual sale en el ADN.
 En el ARN hay Uracilos.
 ARN es una cande a lineal, ADN es una cadena helicoidal.
 Se comienza a sx desde el extremo 5´y progresa por su extremo 3´.
 Los nucleótidos se agregan uno por vez.
 Sólo se separa un tramo de ADN  Burbuja de transcripción.
 La que separa ese tramo es la ARN polimerasa.
 La que sirve como molde siempre será la cadena que va de 3' a 5'.
 Por lo tanto, la ARN Polimerasa: irá uniendo los ribonucleótidos en 5' a 3'.

REQUISITOS

Una molécula de ADN molde, con región promotora, que indica el inicio de la transcripción, con secuencia
de terminación, que marca el fin del proceso y un segmento que será expresado.

TRANSCRIPCIÓN DEL ARNm

o Intervienen factores de transcripción para activar las secuencias reguladoras y el promotor del gen.
o Los factores primero, se unen a la enzima ARN polimerasa.
o Los factores de transcripción específico (FTE) interactúan con el regulador del gen (secuencias
amplificadoras o inhibidoras por las que dichos factores serán activadores o represores).
o Los factores de transcripción basales (FTB) interactúan con el promotor, reconocen la secuencia TAT
para iniciar la sx.
o Se INICIA con la intervención del primer factor que se une al promotor y se pliega la cromatina, lo que
atrae a los restantes factores y a la ARN polimerasa. Se abre el ADN y se forma una burbuja de
transcripción y da comienzo a la sx de ARNm.
o ALARGAMIENTO del ARNm utiliza dos factores de elongación.

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TRANSCRIPCIÓN
 GENERALIDADES

 ENZIMA: ARN polimerasa ADN dependiente. Sintetiza ARN en dirección 5’ a 3’.

 PROMOTOR: secuencia del ADN a la cual se debe unir la ARN polimerasa para iniciar la transcripción.
 TRANSCRIPCIÓN ASIMÉTRICA: solo se transcribe una cadena del gen.
 CADENA MOLDE: es la cadena del gen que lee la ARN polimerasa desde 3’ a 5’ (la que se transcribe).
NO CODIFICANTE.
 CADENA ANTIMOLDE: es la cadena del gen que no es leída (no se transcribe) CODIFICANTE. (tiene la
misma secuencia que el ARN transcripto).
 TOPOISOMERASA I: elimina las tensiones.
 La ARN polimerasa une el fosfato de cada ribonucleótido entrante al OH 3’ libre del
ARN en crecimiento.
 Los ribonucleótidos se unen por UNION FOSFODIESTER.
 SUSTRATOS  Aportan la energía necesaria para este proceso anabólico - - - - - - -
>
 PIROFOSFATASA: Hidroliza los PPi.

EXPRESIÓN GENÉTICA EN EUCARIONTES EXPRESIÓN GENÉTICA EN PROCARIONTES

La transcripción y maduración del ARN ocurre en el
núcleo y la traducción en el citoplasma.
Después de la maduración y la exportación fuera
del núcleo, cada ARNm sólo dará una proteína
(MONOCISTRONICOS)
3 ARN polimerasa que necesitan de factores de
transcripción basales y su activación es regulada
por factores de transcripción específicos.
La secuencia de señalización es TATA.
Los procesos de transcripción y traducción ocurren
simultáneamente en el citoplasma.
El ARNm puede codificar para varias proteínas
(POLICISTRONICOS)
Una sola ARN polimerasa que no requiere factores
de transcripción.
La secuencia de señalización es TATAAT y TTGACA.

TRANSCRIPCION EN PROCARIONTES

o Tienen solo una ARN polimerasa (transcribe todos los tipos de ARN).
o La ARN polimerasa separa las dos cadenas del ADN.
o Complejo promotor cerrado pasa a complejo promotor abierto.
o La subunidad sigma reconoce el sitio promotor.
o Una vez incorporados los primeros 8 nucleótidos el factor sigma se disocia.
o LOS ARNm PROCARIONTES PUEDEN SER POLICISTRONICOS.
o El ARNm policistrónico es el que lleva información para varias proteínas (contiene varios cistrones).
o Los ARNm policistrónicos son exclusivos de procariontes.

TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS

ARN POLIMERASA I ARN POLIMERASA II ARN POLIMERASA III

Transcribe todos los genes

codificadores de proteínas.

Transcribe genes de los ARNr ___________________________ Transcribe los genes de los ARNt,
ARN 5S y otros ARN pequeños
Transcribe los genes de otros tipos de
ARN pequeños no codificantes
 o Las ARN polimerasas eucariotas se unen al promotor por medio de proteínas llamadas FACTORES
BASALES DE TRANSCRIPCION.
o LOS ARNm EUCARIOTAS SON MONOCISTRONICOS.
o En eucariotas cada ARNm maduro informa para una sola proteína.

CONTROL TRANSCRIPCIONAL EN EUCARIOTAS

1-) POR MEDIO DE FACTORES DE TRANSCRIPCION ESPECIFICOS

 PROMOTOS: Al promotor se unen los FTB (basales).

 REGULADOR: Aquí se unen los FTE (específicos).
Secuencias intensificadoras - Secuencias silenciadoras

Factores de transcripción:

o Basales (FTB): se unen a la ARN polimerasa y al sitio promotor.

o Específicos (FTE): se unen al regulador.
o Inductores (FTI): Se unen a secuencias intensificadoras, activan a la ARN polimerasa.
o Represores (FTR): Se unen a secuencias silenciadoras, inhiben a la ARN polimerasa.

2-) POR METILACION DE PROMOTORES

 La metilación (-CH3) sobre ciertos nucleótidos de C en el promotor impide la transcripción del gen.

3-) POR CONDENSACION DE LA CROMATINA

 Un gen se transcribe cuando la cromatina está descondensada (eucromatina) y no se transcribe cuando está
condensada (heterocromatina).

CONTROL DEL PROCESAMIENTO DEL ARNm DE EUCARIOTAS

o EMPALME (SPLICING) ALTERNATIVO: A partir de un gen se obtienen dos proteínas relacionadas.

o EJ: fibronectina del TC – fibronectina hepática.

MADURACION DE LOS ARN EUCARIOTAS

 ARN transcripto primario  ARN maduro

 Exclusivo en eucariotas (los ARN procariotas NO maduran).
 Son modificaciones post-transcripcionales en las moléculas de todos los tipos de ARN eucariotas.
 Todos los ARN eucariotas maduran en el núcleo antes de pasar al citoplasma.
 INCLUYE 3 PROCESOS: Capping – Poliadenilación (Poli A) – Splicing

1) CAPPING (en 5’)

 Cuando el ARNm transcripto primario alcanza 30 nucleótidos de

longitud se le agrega un “capuchón” en el extremo 5’.
 Capuchón nucleótido modificado (7-metilguanosina), cuyas fx
son:
o Protege al 5’ de las exonucleasas.
o Imprescindible para el comienzo del Splicing.
o Marca el sitio de origen de la traducción.

2) POLIADENILACION (en 3’)

  Agregado de 250 nucleótidos de Adenina en el extremo 3’ del ARNm.
 Frente a una señal específica de terminación (AAUAAA) una endonucleasa corta el ARNm
transcripto primario.
 Una poliA-polimerasa agrega la cola poli A.
 Funciones de la cola poli A:
o Protege al 3’ de las exonucleasas.
o Ayuda al ARNm a salir del núcleo

3) SPLICING (corte y empalme)

 INTRON: Secuencia no codificante del ARNm

 EXON: Secuencia codificante del ARNm
 SPLICING: corta los intrones, los elimina y empalma los exones.
EMPALME (SPLICING) ALTERNATIVO: A partir de un gen se obtienen dos proteínas relacionadas.

MADURACION DEL ARNt EUCARIOTA

 Cada ARNt transporta específicamente un AA hacia el ribosoma para que se incorpore a la proteína
que se está sintetizando.
 La especificidad por el AA se la da el ANTICODON (secuencia de 3 bases nitrogenadas)
 La maduración incluye:
o Modificaciones químicas en algunas bases nitrogenadas de sus nucleótidos.
o Agregado de CCA en el extremo 3’ donde se une el aminoácido.

MADURACION DEL ARNr EUCARIOTA

 Nucleoplasma: Se transcribe el ARNr 5S.

 Zona fibrilar (central) del nucleolo: Se transcribe el ARNr 45S y se fracciona (maduración)
 Zona granular (periférica) del nucleolo : Se ensamblan las fracciones de ARNr con las proteínas
ribosomales llegadas del citoplasma y se arman las subunidades ribosomales que salen por los
complejos del poro hacia el citoplasma.

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CODIGO GENETICO

 El ARNm maduro lleva la información para sintetizar una proteína.

 Esa información está “escrita” en el lenguaje de los nucleótidos.
 El CODIGO GENETICO permite descifrar esa información y traducirla al lenguaje de los AA.

o 4 BN en grupos de 3
o 43 = 64 CODONES presentes en el ARNm
o Codón de iniciación: AUG
o Codones de terminación o stop: UAA; UAG; UGA
o Son 61 codones codificantes.

 Cada CODON codificante del ARNm se apareará con un ANTICODON complementario de un ARNt
durante la síntesis proteica (traducción).

APAREAMIENTO CODON – ANTICODON

o La unión del codón (ARNm) con el anticodón (ARNt)

será complementaria y antiparalela.
o La secuencia del CODON es la que determina cual es
el aminoácido que se incorpora a la proteína.
o El código genético
representa a los 64
codones del ARNm.
 EL CÓDIGO GENÉTICO

UNIVERSAL Es el mismo código en todos los seres vivos

DEGENERADO Varios codones informan para el mismo
aminoácido (codones sinónimos)
VACILANTE u OSCILANTE La tercera base del codón del ARNm no siempre es
complementaria de la del ARNt.
NO SOLAPADO Cada nucleótido forma parte de un triplete pero no
del siguiente
LECTURA SIN SIGNOS DE PUNTUACIÓN A partir de un punto de inicio, la lectura se lleva a
cabo sin interrupciones o espacios vacíos

CODONES DISTINTOS CODIFICAN PARA EL MISMO AA PORQUE:

 Algunos ARNt pueden reconocer y unirse a más de un codón.

 Hay ARNt distintos (diferentes especies moleculares) que unen el mismo AA.