Laboratorio #

ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

Objetivos:

 Estudiar las propiedades catalíticas de la enzima catalasa.

 Determinar los factores que afectan la actividad de una enzima.

Introducción.

Enzima, cualquiera de las numerosas sustancias orgánicas especializadas

compuestas por polímeros de aminoácidos, que actúan como catalizadores en el
metabolismo de los seres vivos. Con su acción, regulan la velocidad de muchas
reacciones químicas implicadas en este proceso. El nombre de enzima significa 'en
fermento'. En la actualidad los tipos de enzimas identificados son más de 2.000.

Cada tipo de enzima cataliza un tipo específico de reacción química. Por ello, se
necesitan centenares de tipos de enzimas diferentes en el metabolismo de cualquier
clase de células. La mayor parte de las enzimas catalizan la transferencia de
electrones, átomos o grupos funcionales. La clasificación de las enzimas se realiza de
acuerdo con el tipo de reacción de transferencia, el grupo dador y el grupo aceptor, y
se reconocen 6 grupos principales: oxidorreductasas (transferencia de electrones),
transferasas (transferencia de grupos), hidrolasas (reacciones de hidrólisis o
transferencia de grupos funcionales al agua), liasas (adición de grupos a dobles
enlaces), isomerasas (transferencia de grupos en el interior de la molécula para
originar formar isoméricas) y ligasas (forman diversos enlaces acoplados a la ruptura
de ATP). Algunas enzimas necesitan para su actividad un componente químico
adicional llamado cofactor, que puede ser inorgánico (diversos cationes metálicos) o
moléculas orgánicas complejas llamadas coenzimas. El conjunto de la proteína activa
junto con su coenzima se denomina holoenzima.

Las enzimas se denominan añadiendo asa al nombre del sustrato con el cual
reaccionan. La enzima que controla la descomposición de la urea recibe el nombre de
ureasa; aquéllas que controlan la hidrólisis de proteínas se denominan proteasas.
Algunas enzimas como las proteasas tripsina y pepsina, conservan los nombres
utilizados antes de que se adoptara esta nomenclatura.

El hígado es un órgano que realiza múltiples funciones en el metabolismo de los

glúcidos, lípidos y proteínas. El produce muchas enzimas diferentes. Algunas de las
enzimas que produce el hígado transforman compuestos tóxicos como el alcohol en
compuestos menos tóxicos o en compuestos que pueden ser fácilmente eliminados del
cuerpo. Muchos de los productos de la actividad metabólica realizada por la célula son
nocivos, como por ejemplo el peróxido de hidrógeno (H 2O2), de allí que las células del
cuerpo y en especial las células del hígado posean enzimas capaces de descomponer
el H2O2 en agua y oxígeno. Las células utilizan la enzima catalasa la cual se
encuentra en un orgánulo especial llamado peroxisoma para descomponer el H2O2.
La catalasa es una enzima en extremo muy eficiente en donde una sola molécula de
esta enzima produce la descomposición aproximada de 5 x 10 4 moléculas de H2O2 por
segundo. Este poder catalítico de las enzimas hace de la célula una maquinaria
sumamente compleja en donde ocurren infinidades de reacciones químicas todas ellas
necesarias para mantener la actividad celular y por ende la vida.

La reacción que estaremos probando es la conversión del H 2O2 en agua y oxígeno

mediante la enzima catalasa: 2 H2O2 + catalasa <----------> [ES] <--------> 2 H2O + O2.

Vea y analice el video en su casa, antes de la experiencia práctica, sobre la Actividad

enzimática sesión 1 catalasa. Este video le mostrara dos procedimientos: efecto de la
temperatura en la actividad de la enzima catalasa y el efecto del pH sobre la actividad de la
enzima catalasa. Le ayudará a comprender mejor lo que hará en su clase de laboratorio.

Enlace para acceder a video:

Actividad enzimática sesión 1 Catalasa: https://youtu.be/j9KmOlwqvYM

Materiales que debe traer el grupo de estudiantes: hígado de res (1/4 libra), una
papa mediana, 1 botella chica de agua oxigenada, guantes, un exacto chico o navajas
de afeitar o bisturí, papel toalla, jabón liquido de mano.

Materiales, equipos y reactivos que están presentes en el laboratorio: termómetro,

probetas de 10 ml, tubos de ensayo medianos, vidrio reloj, varillas de vidrio (policial),
vasos químicos de 250 ml, plato caliente, NaOH 2%, HCl 2%, agua destilada.

Procedimiento.

1. Estudio de la actividad enzimática en el tejido. SIN TRITURAR

 Tome dos tubos de ensayo mediano y coloque en el fondo de un tubo, con la

ayuda de un policial, un trocito de hígado del tamaño de un grano de arroz
crudo. En el otro tubo coloque también un trocito de papa del mismo tamaño.
 Añada 2 ml de agua oxigenada a cada tubo.
 Observar lo que sucede en ambos tubos. ¿qué indica lo que acaba de observar?
 Haga sus conclusiones en base a sus resultados.

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2. Estudio de la actividad enzimática en extracto. TRITURADO

 Tome dos tubos de ensayo mediano y coloque en el fondo de un tubo, con la

ayuda de un policial, un trocito de hígado del tamaño de un grano de arroz
crudo. En el otro tubo coloque también un trocito de papa del mismo tamaño.
 Triture el hígado con la varilla de vidrio hasta que el tejido quede separado.
Haga lo mismo con el tubo que contiene la papa con otra varilla de vidrio. No
contaminar las muestras y trate de no romper el tubo de ensayo.
 Añada 2 ml de agua oxigenada a cada tubo.
 Observar la intensidad del burbujeo en ambos tubos. Indicar con cual muestra
hubo mayor intensidad de burbujeo. Compare estos resultados con los
resultados del ensayo anterior.
 Haga sus conclusiones.

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2. Determinación de los factores que afectan la actividad enzimática.

Efecto de la Temperatura:
 Se armarán tres sistemas:
 Sistema Nº1: agua en vaso químico a temperatura aproximada de 7º C
(abundante hielo en la bandeja y agua).
 Sistema Nº2: agua en vaso químico a temperatura de 37º C.
 Sistema Nº3: agua en vaso químico a temperatura de 80º C (agua
caliente y mantener esta temperatura estable).
 Añada 2 ml de agua oxigenada a 3 tubos de ensayo y coloque cada tubo en
cada sistema de diferentes temperaturas. Dejar por 5 minutos.
 Tome otros 3 tubos de ensayo y coloque en el fondo de un tubo, con la ayuda
de un policial, un trocito de hígado sin triturar del tamaño de un grano de arroz
crudo.
 Añadir a cada tubo con el hígado, el agua oxigenada que están a diferentes
temperaturas: Hágalo rápido para evitar que la temperatura del agua oxigenada
cambie. Observe si se forma burbujeo o no.
 Nota usted alguna diferencia en la actividad enzimática causada por las
diferentes temperaturas. En base a una mayor intensidad del burbujeo diga,
¿Cuál es la temperatura óptima de actividad enzimática? Concluya.

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Efecto del pH.

 Tome 3 tubos de ensayo y coloque en el fondo de un tubo, con la ayuda de un

policial, un trocito de hígado sin triturar del tamaño de un grano de arroz crudo.
 Añadir a cada tubo lo siguiente: 1ml de HCl 2%, 1 ml de agua destilada, 1 ml de
NaOH 2%
 Luego añada 2 ml de agua oxigenada a cada tubo de ensayo y observe si hay
reacción enzimática. ¿Cuál es el pH óptimo de actividad enzimática? Concluya.

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Dibuje o fotografíe todo lo observado para que ilustre sus resultados.

Preguntas de evaluación.

1. ¿Puede el peróxido de hidrógeno ser transformado por otros catalizadores que no

sean los presentes en los tejidos? Explique brevemente.

2. ¿Cree usted que todos los tejidos vivos contienen catalasa? Explique brevemente.

3. ¿Por qué las enzimas pueden ser reusadas para catalizar una reacción? Explique
brevemente.

4. ¿Mantienen las enzimas su actividad fuera de las células? Explique brevemente.