DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

Manejo y calibración de micropipetas

Castillo Samuel 1,Mendez Sebastian 2,Rodriguez Angelica 3,Ruiz Andrea 4

,Salazar Blauco5 ,Sandoval Miguel6

Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE, Extensión Santo Domingo de los Tsáchilas,
Facultad Ciencias de la Vida y Agricultura, Carrera de Ingeniería en Biotecnología,
Santo Domingo, Ecuador.

Resumen:

En el siguiente informe se describe la práctica de laboratorio donde se realizó una evaluación del
rendimiento y calibración de las micropipetas automatizadas de 20-200 µL y 100-1000 µL. Se utilizó
un método gravimétrico, donde se pesan los volúmenes conocidos de agua destilada cuantificados de
agua cuantificada con una micropipeta y compararlos con los valores teóricos que se espera obtener.
Para ello se tomaron mediciones por cada cartucho de micropipeta, registrando los valores en gramos.
Con base en los datos, se calcularon los errores absolutos y porcentuales, las desviaciones estándar y
los coeficientes de variación. Los resultados demostraron la exactitud y precisión de la micropipeta,
así como las habilidades de manipulación de los estudiantes.

Abstract

The following report describes the laboratory practice where an evaluation of the performance and
calibration of the 20-200 µL and 100-1000 µL automated micropipettes was carried out. A
gravimetric method was used, where the known volumes of quantified distilled water are weighed
with a micropipette and compared with the theoretical values expected to be obtained. To do this,
measurements were taken for each micropipette cartridge, recording the values in grams. Based on the
data, absolute and percentage errors, standard deviations, and coefficients of variation were
calculated. The results demonstrated the accuracy and precision of the micropipette, as well as the
students' manipulation skills.

Palabras clave: Calibración, micropipeta, método gravimétrico, precisión y exactitud.

I. Introducción

➢ Micropipetas

Las micropipetas son instrumentos volumétricos que se utilizan para medir un determinado
volumen líquido, cuando se necesitan valores de microlitros (µL), tomando en cuenta que se realizan
en campos como la biología, farmacia, genética y química que utilizan dosificaciones a pequeña
escala.
 Es necesario indicar que hay dos tipos de micropipetas: las micropipetas de desplazamiento
positivas empleados en líquidos específicos y los de desplazamiento de aire, este es el más utilizado
en laboratorios, de manera que el principio de pipeteo es sencillo. El cargado de las micropipetas se
realiza a través de un émbolo manual que aspira el líquido de calibración. La cantidad de aire entre el
pipeteo y el pistón determina el valor esperado, por ende, el mismo émbolo también provoca el flujo
de líquido por propulsión.[1]

Las micropipetas tienen volúmenes entendibles, varían según el modelo, los más utilizados
son: p20, p200 y p1000, aceptan un máximo de 20, 200 y 1000 microlitros (µL). Es necesario
destacar, que el manejo de micropipetas permite destinar diversos líquidos sin tomarnos la molestia de
tener que lavar el instrumento. Se usan puntas desechables de plástico esterilizadas.[2]

➢ Métodos de calibración

La calibración implica la confrontación del volumen real con el volumen teórico. Hay dos
enfoques de calibración para micropipetas: el método gravimétrico y el fotométrico, siendo el primero
el más prevalente. Las pautas para el proceso de calibración están establecidas en la normativa ISO
9000.[3]

Materiales,Insumos y reactivos

Materiales y equipos.

Tabla 1. Materiales y equipos

Detalle Característica
M Vaso de precipitado Vidrio
M Picetas Plástico
M Puntas de micropipeta 200 µL
M Puntas de micropipeta 1000 µL
E Micropipetas 200 µL
E Micropipeta 1000 µL
E Balanza analítica -
Fuente: Grupo de laboratorio Nro. 2

Insumos, reactivos y muestras.

Tabla 2. Insumos, reactivos y muestras se describen a continuación:

Detalle Característica
I Agua destilada -
Fuente: Grupo de laboratorio Nro. 2

Método

Se empleó un método gravimétrico, que consiste en pesar volúmenes conocidos de agua

destilada cuantificados con una micropipeta con la finalidad de evaluar la exactitud y determinar si la
calibración del equipo es correcta.
Procedimiento

Calibración de micropipetas

● Se designó cada micropipeta con distinta capacidad (200 μL-1000 μL) para ser utilizada por 2
estudiantes en el transcurso de la práctica.
● Llenamos un vaso de precipitación con la ayuda de una piceta con agua destilada.
● Se realizó el pipeteo de agua destilada con la capacidad máxima de la micropipeta (1000 μL).
● El pipeteo se lo repitió 10 veces por cada estudiante, cada micropipeta empleada fue manejada
por dos estudiantes.
● De manera simultánea pesamos cada medición realizada con la micropipeta en una balanza
analítica, encerando previamente el equipo y colocando un recipiente en su interior.
● Este procedimiento fue realizado con las dos micropipetas con capacidad de 200 μL restantes,
registrando los valores obtenidos en la práctica para la correspondiente realización del informe.

Cálculos

Se contempló hacer una comparación entre las desviaciones estándar que se obtuvieron de
las mediciones de peso que se obtuvieron al medir cierta cantidad de líquido (agua destilada) con las
micropipetas, obteniéndose los siguientes datos:

Para la pipeta de 20 µL:

Tabla 3. Peso en gramos de los volúmenes obtenidos por la pipeta de 20 µL por persona.

Persona
Rep
. Rodríguez Sandoval
1 0,018 0,020
2 0,020 0,018
3 0,020 0,019
4 0,018 0,016
5 0,021 0,020
6 0,019 0,018
7 0,018 0,020
8 0,017 0,019
9 0,018 0,019
10 0,020 0,020
Fuente: Grupo de laboratorio Nro. 2

Para la pipeta de 200 µL:

Tabla 4. Peso en gramos de los volúmenes obtenidos por la pipeta de 200 µL por persona.

Persona
Rep. Salazar Ruíz
1 0,196 0,194
2 0,195 0,192
 3 0,197 0,194
4 0,195 0,196
5 0,193 0,193
6 0,191 0,193
7 0,198 0,194
8 0,199 0,194
9 0,194 0,197
10 0,191 0,198
Fuente: Grupo de laboratorio Nro. 2

Para la pipeta de 1000 µL:

Tabla 5. Peso en gramos de los volúmenes obtenidos por la pipeta de 1000 µL por persona.

Persona
Rep
. Méndez Castillo
1 0,991 0,993
2 1,000 0,997
3 0,997 1,000
4 0,999 0,999
5 0,997 0,998
6 0,996 0,998
7 0,996 0,996
8 0,997 0,999
9 0,997 0,996
10 0,991 1,000
Fuente: Grupo de laboratorio Nro. 2

Por lo cual, para los datos obtenidos por Rodríguez:

2
∑(𝑥𝑖−𝑥)
𝑠= 𝑛−1

−5
1,49× 10
𝑠= 10−1

−7
𝑠 = 8, 2777× 10
Para los datos obtenidos por Sandoval:

2
∑(𝑥𝑖−𝑥)
𝑠= 𝑛−1

−5
1.49 × 10
𝑠= 10−1
 −7
𝑠 = 8, 2777× 10
Para los datos obtenidos por Salazar:

2
∑(𝑥𝑖−𝑥)
𝑠= 𝑛−1

−5
6,69 × 10
𝑠= 10−1

−6
𝑠 = 3, 7166× 10
Para los datos obtenidos por Ruíz:

2
∑(𝑥𝑖−𝑥)
𝑠= 𝑛−1

−5
3,25 × 10
𝑠= 10−1

−6
𝑠 = 1, 8055× 10
Para los datos obtenidos por Méndez:

2
∑(𝑥𝑖−𝑥)
𝑠= 𝑛−1

−5
7,89 × 10
𝑠= 10−1

−6
𝑠 = 4, 3833× 10
Para los datos obtenidos por Castillo:

2
∑(𝑥𝑖−𝑥)
𝑠= 𝑛−1

−5
4,24 × 10
𝑠= 10−1

−6
𝑠 = 2, 3555× 10

II. Resultados

Tras el análisis exhaustivo en cuánto al resultado obtenido tras medir las cantidades realizadas
por cada micropipeta se obtuvo que los valores de las desviaciones estándar fueron bajos en especial
en el manejo de los volúmenes obtenidos por la micropipeta de 20 µL manejada por los estudiantes
Rodriguez y Sandoval.
 III. Discusión

Con el análisis del uso y el manejo de las micropipetas es importante tomar en cuenta que
gracias a estas se logra asegurar la precisión en la toma y transferencia de pequeños volúmenes de
ciertos líquidos a emplearse dentro de un laboratorio (Fuentes, Fernández & Fuentes, 2020). Dentro
de esta práctica se realizó el método gravimétrico basándonos en la medición del agua destilada, sin
embargo, existen ciertos factores que puedan llegar afectar la exactitud de la medición.

Uno de los posibles factores para causar un error dentro del pipeteo puede ser la
evaporación del agua durante el proceso lo cual podría alterar levemente el volumen recolectado del
líquido, de igual manera otro factor que puede alterar las mediciones es la formación de burbujas al
realizar la absorción del líquido debido a la realización de un pipeteo demasiado apresurado realizado
por el operador al no realizarlo de forma lenta y suave con la finalidad de maximizar la precisión lo
cual incrementa falsamente la cantidad que se requiere (Fuentes, Fernández & Fuentes, 2020).

Otro de los factores importantes en la realización y medición de un pipeteo dentro de la

práctica podría ser la calibración y resolución de la balanza analítica debido a que esta también
presenta un impacto directo en la determinación de la cantidad de agua. Debido a esto se emplean
balanzas de alta resolución con calibración rutinaria con lo cual se logra minimizar la incertidumbre
asociada a si un equipo de pipeteo se encuentran dando las medidas adecuadas (Sica, Constantino,
Heijo, Fabrei, & Santo, 2009).

Finalmente al analizar los datos obtenidos de los pipeteos realizados por los estudiantes se
logra observar una leve variación entre cada individuo. Donde las lecturas individuales de cada uno
dieron una ligera variación tomando en cuenta un promedio de las mismas, esto se pudo deber a
factores como su método de pipeteo o técnica y el manejo de las mismas tomando en cuenta la rapidez
de la toma de muestra, el ángulo en el que se tomó la muestra, entre otros dando resultados distintos
para cada uno. Sin embargo, los resultados obtenidos mostraron un uso adecuado y un manejo
correcto de la instrumentación.

IV. Conclusión

El uso correcto de las micropipetas es fundamental para obtener resultados fiables en el

laboratorio. Estos instrumentos son esenciales para el manejo preciso de pequeños volúmenes de
líquido. Cuando se usa correctamente, ayuda a prevenir la contaminación y la pérdida de muestras.

Relación de calibración, considerando que la tolerancia al error de la micropipeta de 200 µL,

código YL6A141578, es de ±0.2 µL. En el pipeteo realizado por ambos alumnos utilizando una
micropipeta de 200 microlitros podemos observar que la desviación estándar de los pipeteos de
Salazar es de 0,0003 µL y los pipeteos de Ruiz es de 0,0002 µL, la media de Salazar es ligeramente
superior a la media de Ruiz. Sin embargo, la diferencia es pequeña e insignificante. Por tanto,
podemos concluir que a ambos estudiantes se les cayó la misma cantidad de pipetas.

El margen de error para micropipetas con código de marca 1 de 1000 es ±0,5 µL. Los datos
muestran que hay poca diferencia en el rendimiento del pipeteo de cada estudiante. La desviación
estándar del pipeteo Méndez es de 0,001 µL y la desviación estándar del pipeteo Castillo es de 0,0007
µL. Estas desviaciones estándar están por debajo de la tolerancia de error de la micropipeta. Se puede
concluir que ambos estudiantes pipetean por igual.
 La tolerancia de error de la micropipeta de 20 es de ± 0,2 µL. El factor de calibración entre la
desviación estándar de los pipeteos de Rodríguez es de 0,0002 µL y la de los pipeteos de Sandoval es
de 0,0003 µL, por lo que el factor de calibración entre sus pipetas es menor que la tolerancia al error
de la micropipeta y la variabilidad de sus pipetas es pequeña. Se puede concluir que ambos
estudiantes pipetean de manera precisa y consistente.

V. Referencias bibliográficas
1. E. Batista, A. Sabrosa, M. Ferreira, I.Castanheira, A.M.H. Van der Veen –"Uncertainty
calculation in the calibration of volumetric laboratory glassware", Congreso de
Metrologia,Brasil, 2000;
2. Artedinamico. (s.f.). MICROPIPETAS (DEFINICION, USOS y TIPOS). Equipos Y
Laboratorio De Colombia.
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/micropipetas-(definicion-usos-
y-tipos)
3. Clara, & Clara. (2022, May 13). Mantenimiento y calibración de tus micropipetas -
ChemicalCenter. ChemicalCenter - Soluciones a la industria farmacéutica, alimenticia,
química, minera y de investigación.
https://chemicalcenter.com.ar/mantenimiento-y-ycalibracion-de-tus-micropipetas/
4. Fuentes López, A., Fernández Segovia, I. & Fuentes López, C. (2020). Consideraciones en el
uso y mantenimiento de micropipetas. Universitat Politècnica de València.
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/145914/Fuentes%3BFern%C3%A1ndez%3BFue
ntes%20-%20Consideraciones%20en%20el%20uso%20y%20mantenimiento%20de%20micro
pipetas.pdf?sequence=1&isAllowed=y
5. Sica, A., Constantino, P., Heijo, G., Fabrei, J. A., & Santo, C. (2009). Evaluación del error
debido a la evaporación en el método gravimétrico de calibración de micropipetas. INNOTEC,
(4 ene-dic), 15-18. https://ojs.latu.org.uy/index.php/INNOTEC/article/view/55/46
 VI. Anexos

Imagen 1. Pipeteo con 200 microlitros (µL) Imagen 2. Pipeteo con 1000 microlitros (µL)