MANEJO DE MICROPIPETAS

INTRODUCCION.
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir
pequeos volmenes de lquidos y permitir su manejo en las distintas tcnicas
cientficas.
Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos lquidos sin
tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plstico,
que habitualmente son estriles. Existen varios tipos de puntas para los diferentes
volmenes de pipeteo.
Identifique las Caracteristicas:
1. Botn pulsador
2. Tornillo del botn pulsador
3. Rueda dentada de graduacin del volumen.
4. Cono de la pipeta.
5. Expulsor de punta.
6. Puntas o tips descartables
7. rack para tips

1. Graduacin del volumen

Para graduar el volumen de la micropipeta identifique la rueda, control y/o tornillo de
graduacin .
Seleccione la micropipeta y las puntas que va a utilizar teniendo en cuenta el
volumen de solucin a pipetear:
Tipo de Micropipeta
P10
P20
P100
P200
P1000

Volumen
0,5 l - 10 l
0,5 l - 20 l
10 l -100 l
20 l -200 l
100 l -1000 l

Tipo de punta
Amarillas o blancas
Amarillas o blancas
Amarillas
Amarillas
Azules o blancas

Seleccione el volumen por medio de la rueda y/o tornillo de graduacin, de

forma firme pero suavemente de vuelta al tornillo mientras observa el cambio
de la numeracin del display. Teniendo cuidado de exceder los lmites de la
micropipeta.
Ponga la punta correspondiente, presione la punta firmemente usando un
movimiento de torsin ligero y tres golpes sobre el rack.

2. Operacin del Equipo:

Aspiracin
dispensacin

y Figura

a. Presione el botn
superior hasta el primer
tope positivo,

b. Sostenga la pipeta
verticalmente, sumerja
la punta en el lquido.
La profundidad a la que
la punta se sumerge en
la muestra depende del
modelo; en general
menos de 6 mm

c. Suelte el botn
despacio y fcilmente
para aspirar, .Espere
unos
segundos
y
entonces retire la punta
del lquido.

d. Ubique la punta de la
pipeta en la pared
interior del vaso en un
ngulo de 10 a 40
grados. Presione el
botn
suavemente
hasta el primer tope..
Espere unos segundo.

e. Presione el botn
hasta el segundo tope
para expeler cualquier
remanente de lquido.
Mantenga
el
botn
presionado hasta el
final, remueva la pipeta
por arrastre sobre la
superficie del vaso.

f. Libere el botn

g. Expulse la punta
presionando el botn de
eyeccin

Es necesario el cambio de la punta si el lquido es diferente al ya muestreado o si el

volumen establecido es cambiado.
Cuando se pipetean lquidos que tienen una viscosidad y densidad diferentes a la
del agua, por ejemplo solventes orgnicos, una pelcula de lquido se forma sobre
las paredes internas de la punta. Esta pelcula puede crear error. Desde que la
pelcula remanentes sea constante en sucesivas pipeteadas con la misma punta,
este error puede ser evitado mediante la formacin de la pelcula antes de transferir
la primera muestra; esto es hacer una aspiracin de la muestra y dispensarla en el
mismo vaso, cuando la pelcula es formada ya todas las muestras siguientes
tendrn mejor exactitud y repetibilidad.
Esta operacin de pre-enjuague deber ser repetida cuando el volumen a ser
aspirado cambia o cuando se usa una nueva punta.
3. Recomendaciones:
No pipetear volmenes que sobrepasen la capacidad de la micropipeta.
Durante el uso y manejo las micropipetas deben permanecer en forma
vertical.
Ubicar las pipetas en soportes adecuados o en el embalaje original sin
puntas.
Mantener limpias las micropipetas.
Si sus micropipetas son autoclavables y son sometidas a este proceso, estas
debern ser verificadas antes de su uso.
Evite autoclavar las micropipetas si esta caracterstica no se encuentra dentro
de las especificaciones.
Una vez terminado el uso de la micropipeta debe limpiarse el rea de
acoplamiento con una servilleta para evitar contaminacin.

Posiciones de la micropipeta a la hora de medir un volumen

especfico.
A: Botn pulsador en el primer tope,
B: la punta de la micropipeta es sumergida entre 1 mm y 3 mm en la muestra para
luego liberar el botn pulsador suavemente hasta su posicin original,
C: Forma correcta de dispensar el lquido medido en el recipiente correspondiente,
D: Posicin de la micropipeta al apretar el botn pulsador hasta el segundo tope,
E: Vuelta a la posicin inicial,
F: Expulsin de la punta, la cual debe ser descartada en un recipiente apropiado.

CALCULO DE LA EXACTITUD (E%) Y DEL COEFICIENTE DE VARIACIN

(CV%)
Clculo del volumen medio
Los valores de las pesadas del control gravimtrico son slo la masa del volumen
dosificado. Para obtener el volumen real se debe efectuar un clculo corrector. El
clculo corrector se realiza por multiplicacin del valor medio de los valores de las
pesadas (x) con el factor Z (mL/g que es lo mismo que l/mg), que toma en
consideracin la densidad del agua, la temperatura de control y la presin
atmosfrica.
Z es igual a 1,0032 l/mg, referido a 21,5 C, 1013 mbar (hPa) y a la utilizacin de
agua destilada o z es igual a 1,0029 l/mg, referido a 20 5 C y 1013 mbar (hPa).
El factor Z es igual a 1/densidad.
Valores del control a 21,5 C (Z = 1,0032)
Volumen controlado Vo (l): 200,0000
Valor nominal (mg) = Volumen controlado/Z
Valor nominal (mg): 199,3620
Ejm de 5 medidas: x1 =200,2000
x5= 199,7000

x2=199,6000

x3= 199,4900

x4= 199,7000

Exactitud (E%)

Desviacin estndar
S=Z.

(Xi X)2
n-1

Coeficiente de variacin

Para el ejemplo calculado se obtiene el siguiente resultado:

Volumen controlado (L): 200,0000
Volumen medio (L): 200,3772
E [%] 0,189
CV [%] 0,136
E [%] nominal* 0,500
CV [%] nominal* 0,200
* lmites de tolerancia de las instrucciones de manejo
Si los valores calculados de exactitud (E [%]) y coeficiente de variacin (CV
[%]) son menores que los valores de tolerancia o iguales a stos, entonces el
aparato est en orden.

Objetivo:
Usar correctamente las micropipetas y calcular su exactitud
Material
Micropipetas de 20, 200 y 1000 ul
Tips Azules (1000 ul)
Tips Amarillos (200 ul)
Tips Blancos (20 ul)
Gradillas con 5 Tubos de vidrio 5ml
Agua Destilada
Buffer Laemmli
HCl 1 N

PARTE EXPERIMENTAL
1. EXACTITUD (E%) Y EL COEFICIENTE DE VARIACIN (CV%)
Para cada micropipeta revisar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de
variacin (CV%) en todo el rango usando al menos dos volmenes diferentes; por
ejemplo:
Procedimiento:
1. Seleccionar la micropipeta y las puntas adecuadas.
2. Colocar un trozo de papel parafilm (2x2 cm) en la balanza y tarar a cero.
3. Tomar el volumen de agua destilada con la micropipeta y dispnselo sobre el
parafilm. Anote el peso del agua aadido. La densidad del agua es 1 g/mL a 25 C,
por lo tanto un volumen de 1 mL corresponde aproximadamente a una masa de 1 g,
300 L a 0.3 g, 200 L a 0.2 g, 60 L a 0.06 g, 10 L a 0.01 g y 3 L a 0.003 g.
4. Repita el procedimiento cinco veces para cada volumen.
Para la micropipeta P1000 revisar los volmenes de 300 L y 1000 L.
Volumen (ul) Peso (mg) Volumen (ul) Peso (mg)
1000

300

1000

300

1000

300

1000

300

1000

300

Dibuje la micropipeta utilizada, anote sus caractersticas y Hacer los clculos para
encontrar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de variacin (CV%). Cul
es el estado de su Micropipeta?

Para P200 revisar los volmenes de 60 y 200 L.

Volumen (ul) Peso (mg)

Volumen (ul) Peso (mg)

60

200

60

200

60

200

60

200

60

200

Dibuje la micropipeta utilizada, anote sus caractersticas y Hacer los clculos para
encontrar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de variacin (CV%). Cul
es el estado de su Micropipeta?

Para P20 revisar 3 y 10 L.

Volumen (ul) Peso (mg)

Volumen (ul) Peso (mg)

10

10

10

10

10

Dibuje la micropipeta utilizada, anote sus caractersticas y Hacer los clculos para
encontrar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de variacin (CV%). Cul
es el estado de su Micropipeta?

2. ERRORES EN LA MEDICIN.
Otro de los factores que influyen en el manejo es la forma correcta de pipetear.
Procedimiento:
1)
2)
3)
4)
5)

Prepare una gradilla con 5 tubos Eppendorf conteniendo 1 ml de Agua

Anadir a cada uno de los tubos 5 ul de buffer Laemmli 4X
Mezclar los tubos, por inversin
Anotar la absorbancia o intensidadi de color usando simbolos.
Dibuje el experimento y comente los resultados..

Repetir el experimento, esta vez utilizando HCl 1N

Procedimiento:
1)
2)
3)
4)
5)

Prepare una gradilla con 5 tubos Eppendorf conteniendo 1 ml de Agua

Anadir a cada uno de los tubos 10 ul de HCl 1N
Mezclar los tubos, por inversin
Anotar el PH de cada uno de los tubos.
Dibuje el experimento y comente los resultados..