INSTRUMENTACIÓN Y METROLOGÍA – PRÁCTICAS DE LABORATORIO

PRÁCTICA 2. MANEJO Y VERIFACIÓN DE MICROPIPETAS

OBJETIVOS
 Identificar los diferentes tipos de micropipetas usadas en el laboratorio y las diferentes
partes de las componen.
 Verificar el desempeño de una micropipeta empleando el método gravimétrico

INTRODUCCIÓN

De acuerdo con la Norma ISO/ICONTEC 17025, todos los equipos utilizados para los ensayos,
incluidos los equipos para mediciones auxiliares que tengan efecto significativo en la
exactitud o en la validez del resultado del ensayo, deben ser calibrados antes de ser puestos
en servicio. La medición del volumen es un paso importante en cualquier procedimiento
analítico que se realiza en el laboratorio, por esto es necesario asegurar la confiabilidad de
estas mediciones utilizando instrumentos calibrados y verificados. La norma ISO 8655
describe la terminología, los requerimientos generales y recomendaciones de uso para los
aparatos volumétricos operados por pistón (pipetas, buretas y dispensadores); y de manera
particular define el método gravimétrico para la determinación del error de medición (ISO
8655, parte 6). Este método consiste en medir la masa del agua suministrada por una pipeta
de pistón y calcular la densidad del agua medida bajo las condiciones ambientales
particulares.

CONCEPTOS TEÓRICOS

Pipeta de pistón: Pipeta que funciona transmitiendo

la fuerza que un analista, de forma manual, ejerce
sobre un émbolo que se encuentra unido a un
pistón mediante un eje que lo desplaza a lo largo de
un cilindro de longitud fija, forzando un volumen
predefinido de líquido fuera de la pipeta (Figura
2.1).

Pipeta de volumen fijo: Pipetas de pistón que

dispensan un volumen predeterminado de líquido,
que es conocido como volumen nominal.

Figura 2.1. Partes de una pipeta de pistón

Pipeta de volumen variable: Pipetas de pistón que permiten ajustar el volumen a ser
dispensado dentro de un rango determinado en las especificaciones de la pipeta. El volumen
nominal es el límite superior del rango de volumen especificado.

*Las unidades volumétricas mL o ml, según el sistema Internacional de Unidades son aceptables.

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Las pipetas de pistón de volumen fijo o variable pueden clasificarse así, (Figura 2.2):

Pipetas de desplazamiento por aire: Existe un volumen de aire entre la cabeza del pistón y el
líquido en el cilindro, y al desplazar el émbolo se produce un vacío parcial o sobrepresión que
permite la aspiración o expulsión del líquido del cilindro.

Pipetas de desplazamiento positivo o directo: El pistón se encuentra en contacto directo con

el líquido.

Figura 2.2. Tipos de pipetas

Volumen nominal: Volumen especificado por el fabricante y usado para la identificación y la

indicación del rango de medición.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

 Micropipetas de 1000 y 100 µl
 Balanza analítica
 Termómetro
 Beaker
 Agua destilada
 Aceite mineral

PROCEDIMIENTO

Para medir volúmenes de sustancias acuosas, la técnica correcta incluye los siguientes pasos
(Figura 2.3):
1. Presionar el botón de dosificación hasta el primer
tope para generar el vacío entre el pistón y el
cilindro.
2. Sumerja la punta aproximadamente 5 mm bajo la
superficie del líquido y lleve el botón a la posición
inicial. Saque la punta, retirando el exceso de
líquido.
3. Descargue el volumen medido llevando el botón
de dosificación hasta el segundo tope.
4. Lleve nuevamente el botón a la posición inicial. Figura 2.3. Medición soluciones acuosas.

*Las unidades volumétricas mL o ml, según el sistema Internacional de Unidades son aceptables.

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Para la medición de sustancias altamente viscosas o volátiles se emplea la técnica de pipeteo

reverso, así (Figura 2.4):

1. Presionar el botón de dosificación hasta el segundo tope para generar el vacío entre el
pistón y el cilindro.
2. Sumerja la punta aproximadamente 5 mm bajo
la superficie del líquido y lleve el botón a la
posición inicial. Saque la punta, retirando el
exceso de líquido.
3. Descargue el volumen medido llevando el
botón de dosificación hasta el primer tope.
4. Descarte el exceso de líquido que queda en la
punta y lleve nuevamente el botón a la
posición inicial. Figura 2.4. Medición soluciones
Viscosas.

Para la verificación gravimétrica de las micropipetas deben asegurarse condiciones

ambientales estables de acuerdo con la recomendación de la norma ISO 8655, así:

Temperatura: Este procedimiento debe realizarse en un lugar con una temperatura ambiente
entre 15°C y 30 °C. Es importante estabilizar la temperatura del agua y las pipetas a la
temperatura del ambiente mínimo dos horas antes del procedimiento.

Humedad relativa: Debe mantenerse entre el 50% y 75%; además debe evaluarse la tasa de
evaporación para volúmenes ≤50 µL.

Presión barométrica: Debe tenerse en cuenta para definir el factor Z necesario para convertir
la masa en volumen.

La balanza usada para esta medición debe estar calibrada y verificada, además la sensibilidad
de este equipo debe ser consistente con las mediciones realizadas.

Tabla 2.1. Sensibilidad para verificaciones gravimétricas, GILSON.

Volumen Nominal (µL) Cifras significativas (mg) Sensibilidad balanza
< 100 0,001 10-6g

100 a 1000 0,01 10-5g

> 1000 0,1 10-4g

El procedimiento de verificación incluye los siguientes pasos:

1. Determine la temperatura del agua y regístrela
2. Ajuste el volumen nominal de la micro pipeta
3. Dispense agua destilada en el recipiente de pesado de manera que cubra al menos 3 mm
del recipiente.

*Las unidades volumétricas mL o ml, según el sistema Internacional de Unidades son aceptables.

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4. Ensamble la punta correspondiente a la micropipeta y volumen a medir, enjuague la punta

5 veces para alcanzar equilibrio en el volumen de aire muerto.
5. Comience el ciclo de mediciones que debe tomar menos de 1 minuto, así: Cambie la
punta, enjuague una vez. Lleve el recipiente de pesado a la balanza y tare para llevar la
balanza a cero. Mida el volumen establecido y dispense sobre el recipiente de pesado.
Permita la estabilización de la balanza y registre la masa.
6. Repita este ciclo hasta obtener 10 mediciones.

RESULTADOS

Luego de obtener los resultados de las mediciones de masa, es necesario convertir estos
datos en volumen para calcular el error de medida. Para esto se debe determinar el factor Z
de acuerdo con las condiciones de temperatura y presión barométrica al momento de la
medición (Anexo 1).

Empleando la ecuación 1.1 obtener los volúmenes de cada medición.

𝑽𝒊 = 𝒁 (𝒎𝒊 + 𝒆̅) Ecuación 1.1

Vi = Volumen individual (µL)

mi = masa individual (mg)
𝑒̅ = perdida por evaporación (0,03 mg)
Z = factor Z (µL/mg)

Calcular el promedio de los 10 volúmenes medidos y determinar el error sistemático (Sesgo)

y el error aleatorio (DS y CV%).

Comparar con el error máximo permitido para la micropipeta evaluada y concluir respecto al
desempeño del instrumento.

*Las unidades volumétricas mL o ml, según el sistema Internacional de Unidades son aceptables.

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Tabla 2.2. Factor de conversión Z (µl/mg). (Presión atmosférica en Medellín 1022 hPa)
Temperatura Presión atmosférica (hPa- mBar)
°C 800 853 907 960 1013 1067
15 1,0018 1,0018 1,0019 1,0019 1,0020 1,0020
16 1,0019 1,0020 1,0020 1,0021 1,0021 1,0022
17 1,0021 1,0021 1,0022 1,0022 1,0023 1,0023
18 1,0022 1,0023 1,0024 1,0024 1,0025 1,0025
19 1,0024 1,0025 1,0025 1,0026 1,0027 1,0027
20 1,0026 1,0027 1,0027 1,0028 1,0029 1,0029
21 1,0028 1,0029 1,0030 1,0030 1,0031 1,0031
22 1,0031 1,0031 1,0032 1,0032 1,0033 1,0033
23 1,0033 1,0033 1,0034 1,0034 1,0035 1,0035
24 1,0035 1,0036 1,0036 1,0037 1,0038 1,0039
25 1,0038 1,0038 1,0039 1,0039 1,0040 1,0041
26 1,0040 1,0041 1,0042 1,0042 1,0043 1,0043
27 1,0043 1,0044 1,0044 1,0045 1,0045 1,0046
28 1,0046 1,0046 1,0047 1,0048 1,0048 1,0049
29 1,0049 1,0049 1,0050 1,0050 1,0051 1,0052
30 1,0052 1,0052 1,0053 1,0053 1,0054 1,0055

BIBLIOGRAFÍA

1. Icontec. Norma tecnica colombiana NTC-ISO-IEC 17025: requisitos generales de

competencia de laboratorios de ensayo y calibración: Icontec; 2003.
2. Asociación Española de Normalización y C. UNE-EN ISO 8655-6: aparatos volumétricos
accionados mediante pistón. Parte 6, Métodos gravimétricos para la determinación del
error de medición: (ISO 8655-6:2002): AENOR; 2003.
3. NTC-2194. Metrología. Vocabulario metrológico. Equivalente GTC-ISO-IEC 99:20. Bogotá:
ICONTEC; 2009.
4. Salud OPdl. MANUAL DE MANTENIMIENTO PARA EQUIPO DE LABORATORIO Washington
D. C2005 [citada 19 de marzo de 2015]. Disponible en:
http://www.salud.gob.mx/cnts/pdfs/LAB_manual-mantenimiento.pdf.
5. Asociación Española de Normalización y C. UNE-EN ISO 8655-2: aparatos volumétricos
accionados mediante pistón. Parte 2, Pipetas tipo pistón: (ISO 8655-2:2002): AENOR;
2003.
6. Asociación Española de Normalización y C. UNE-EN ISO 8655-5: aparatos volumétricos
accionados mediante pistón. Parte 5, Dispensadores: (ISO 8655-5:2002): AENOR; 2003.
7. Gilson. Verification Procedure for Accuracy and Precision. Procedure LT802292/F 2007
[citada 15 de marzo de 2015]. Disponible en:
http://www.gilson.com/Resources/Verification%20Procedure%20for%20Accuracy%20a
nd%20PrecWoSon.pdf.

*Las unidades volumétricas mL o ml, según el sistema Internacional de Unidades son aceptables.

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