Histología y Embriología

Técnicas Histológicas
 Técnica Histológica
1. Obtención del material
2. Fijacion
3. Deshidratacion
4. Aclaramiento
5- inclusión
6. Corte
7.Desparafinamiento
8. Rehidratacion
9. Tincion
10. montaje
 Técnicas Histológicas
Obtención de la muestra
• Biopsias ( material de un ser vivo)
• Necropsias ( material de un cadaver)

Células sueltas
• Frotis
• Raspaje
• improntas
 Tecnicas Histologicas
• Fijación y Fijadores
Para obtener preparados duraderos es necesario
someter a los tejidos a la acción de los fijadores

Los fijadores son sustancias que detienen los

procesos de autolisis y conservan las células y
tejidos
 Técnicas Histológicas
Una buena fijación
1. Inmovilizar a la célula
2. Conservar a las partes constitutivas de los tejidos
3. Proteger del ataque bacteriano
4. Insolubilizar los constituyentes celulares
5. Evitar la distorsión y retracción de los tejidos
 Técnicas histológicas
Los mejores fijadores son los que además de actuar
rápidamente, producen el menor numero de
reacciones o modificaciones en los tejidos

Fijador ideal : el que conserve a la célula en un

estado idéntico al estado vivo

El fijador ideal no existe

 Técnicas histológicas
Agentes fijadores
• Físicos ( frio, nitrógeno liquido)
• Químicos…….simple
…….compuestos

Quimicos Simples: acetona, acido acético, alcohol

etílico, formol aldehído.
Quimicos Compuestos: Bouin, Carnoy, Zenker formol
 Técnicas histológicas
Formol
• Sustancia mas usada como fijador
• Se lo usa al 10%
• Tiene buena penetración en los tejidos pero fija lento
• Fija en 24 -48 Hs
• No contrae estructuras
• Preserva las proteínas
• No modifica las grasas
• Altera a los hidratos de carbono
• Liquido incoloro, emite vapores irritantes que altera
bronquios, ojos y es hepatotoxico
 Proceso de
fijación.
La mustra
obtenida se
incluye en el
fijador
(formol) por
aproximada 24
hs , según el
tamaño de la
pieza
 Técnica histológica
• Deshidratación
Los tejidos tiene mucha agua tanto intra como extra
celular que se debe eliminar y reemplazar con parafina
Se usa alcohol para deshidratar ( en pasajes en
volúmenes ascendentes)
 Técnicas histológicas
• Aclaramiento
Etapa donde se retira el alcohol de la pieza.
Usamos: Xilol. Tolueno , benceno o fenol

• Inclusión
Se realiza en parafina , es un hidrocarburo, deriva de la
destilación del petróleo
A temperatura ambiente…. Solido
A mas de 65 º …… liquido
Genera vapores tóxicos, desagradables e inflamables
Baños de 3hs aprox.
 Tecnicas histologicas
• Inclusión definitiva
La pieza embebida en parafina se coloca en un
molde.
se le agrega parafina pura caliente y se deja enfriar,
formando el taco.

La pieza incluida en parafina, fría, ahora pasa al

micrótomo para el corte.

Luego del corte se pega al portaobjeto con

albumina de Meyer
Inclusión definitiva ( la pieza embebida en parafina se incluye en
parafina liquida, se deja enfriar para que solidifique y se forma
el taco)
 Técnicas histológicas
• Desparafinar
Se pasa el portaobjeto por …..xilol
• Rehidratar
Se pasa el portaobjeto por alcohol etílico, ahora en forma
decreciente.
Luego se colorea el portaobjeto
Proceso de la coloración
Proceso de montaje
 Técnicas histológicas
• La coloración facilita la observación de estructuras
a nivel microscópico

• El proceso consiste en teñir y observar. Podemos

ver pigmentos, núcleo, citoplasma o acumulo
intracelulares

• Métodos de coloración: Físicos, químicos o

físico/quimicos
 Técnicas histológicas
• Coloración
Química: genera una reacción química entre el
colorante y el sustrato a colorear
Física: el colorante entra por difusión en el tejido

Según origen: natural……animal o vegetal

(carmín, hematoxilina, azafran,orceina)
artificial (eosina)
 Técnicas histológicas
Según propiedades físico /químicas

Colorantes Ácidos :
• colorean estructuras básicas, que son
acidofilas.
• colorean citoplasma y fibras extracelulares
• Son sales que tiene una base incolora y el
acido con color
Ej.: Eosina, Acido pícrico, fucsina acida.
 Técnicas histológicas
Colorantes Básicos:
• Colorean estructuras acidas, que son basofilas.
• Reaccionan con gropos fosfatos de los ácidos
nucleicos.
• Tiñen al núcleo, matriz cartilaginosa
• Son sales donde la base tiene color y el acido es
sin color

Ej.: azul de metileno

 Técnicas histológicas
Los colorantes mas usados son la hematoxilina y
eosina
Hematoxilina
• Colorante natural ( se obtiene de un arbol
llamado campeche)
• Necesita de mordiente ( aluminio, hierro ,
cromo)
• Es el colorante nuclear mas usado
• Tiñe color azul violeta
 Técnicas histológicas
Eosina
• Colorante artificial
• Colorea directamente, no necesita mordiente
(sustancia fijadora)
• Tiñe estructuras citoplasmáticas, proteínas y
fibras extracelulares
• Tiñe color rosa
 Técnicas histológicas
Otros colorantes

• Tricromicos: tiñen núcleo, músculo y tejido conectivo

(fibras colágenos, elásticas y reticulares)

Tricromico de masson ( fibras colágenas de verde

azulado o azul intenso)
Tricromico de mallory ( fibras de celeste),
Tricromico de gomory ( fibras colagenas de verde)

• Impregnaciones agenticas: se usan en sistema

nervioso
 Técnicas histológicas
• PAS: acido periódico de Schiff
colorea los hidratos de carbono (rojo)
• Para tejido adiposo:
Sudan Black (negro)
Sudan IV, rojo escarlata (rojo)
• Fibras elásticas: orceina (purpura)
• Hierro: reacción de pears
• Calcio: reacción de Von Kossa
• Glóbulos rojos y otras celulas : Giemsa
• Mastocitos: azul de toluidina (rojo)
• Bacterias: Tinción de Ziehl Nielsen
• Bacterias. Gram
 Técnicas histológicas
Métodos de coloración
• Vital: este método es cuando se inyecta colorante
en el animal vivo

• Supravital: este método se utiliza cuando se separa

material para la técnica histológica, que luego va a
ser coloreado.
 Tejido epitelial . Coloración hematoxilina/eosina

Nucleo: azul violeta

Citoplasma: rosado
 Hematoxilina/eosina
Nucleo: azul violeta
Citoplasma: rosado
Tejido muscular corte transversal, teñido con hematoxilina/eosina
 Tejido adiposo con hematoxilina/eosina

Con esta coloración el contenido del interior del adipocito no se tiñe, se debería usar otra coloración como
sudan.
 Glándulas de secreción mucosa tenida con hematoxilina/eosina

Note que el contenido de las glándulas es rico en mucopolisacaridos y con esta coloración el contenido
glandular no se tiño . Se debería usar la técnica de PAS , para teñir el contenido de las glándulas
 Glándulas de secreción mucosa teñidas con PAS

El citoplasma de las glándulas se tiñe de rojo, por el contenido de mucoplisacaridos

 Musculo teñido con Hematoxilina/eosina

Nucleo : azul violeta

Citoplasma rosado
Tejido nervioso teñido con método de impregnacion argentina
Tejido nervioso con Hematoxilina /eosina
 Fibras de conectivo teñidas con Hematoxilina/eosina

Note las fibras de colágeno de color rosad

Fibras del conectivo teñidas con tricromico de masson y orceina

Note las fibras elásticas de color rojo

Fibras del tejido conectivo teñidas con tricromico Mallory
células musculares y el tejido conectivo que las rodea teñido con
tricromico
 Epitelio que reviste el interior del intestino, tincion hematoxilina y eosina. Hay
estructutas que no se tiñen. Son celulas caliciformes cargadas de hidratos de carbono
Epitelio que reviste el interior del intestino teñido con PAS
(células caliciformes Pas +)