TÉCNICA HISTOLÓGICA

¿Qué es estudia la Histología?

• Histología: histos (tejido) y logos (estudio),
“Estudio de los tejidos”
Técnica histológica

• Procedimientos experimentales
necesarios para obtener
secciones teñidas y listas para
observar al microscopio
partiendo de tejidos vivos
• La finalidad de las técnicas
histológicas es preparar el
tejido para su observación con
el microscopio (óptico o
electrónico)
 Proceso Histológico

https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-proceso.php
Fijación
• Fijar un tejido es preservar sus características morfológicas y moleculares lo
más parecidas posibles a las que poseía en su estado vivo
• Los fijadores deben evitar la autolisis, proteger de bacterias, insolubilizar
elementos solubles que se quieren estudiar, evitar retracciones tisulares,
penetrar y preparar el tejido para poder teñirlo.
Caracterís5cas de los fijadores

• Velocidad de penetración. Está relacionado a la velocidad de

difusión, condiciona el tamaño de la pieza a fijar y el tiempo en
el fijador
• Velocidad de fijación. Depende de las propiedades químicas
del fijador y condiciona el tiempo que debe permanecer el tejido
en contacto con el fijador.
• Endurecimiento.
• Ósmosis y pH. Para evitar cambios de volumen en la células
• Efecto mordiente.
• Artefactos.
Inclusión

• Se nececita endurecer la
muestra para poder
obtener cortes finos
• Puede ser por
congelamiento o por
inclusión en parafina o en
resinas (ME)
• La inclusión requiere que
la muestra sea
deshidratada
• https://www.youtube.com/
watch?v=irlymU-anio
Obtención de cortes

• Las piezas obtenidas se cortan con un micrótomo para

obtener láminas suficientemente delgadas para
permitir el paso de la luz.
• https://www.youtube.com/watch?time_continue=15&v=nLZyTwOZZTk
Tinciones

• Se utilizan para poder observar características morfológicas de los

tejidos al microscopio
• Tinciones generales. Aquellas que usan sustancias coloreadas que
se unen a componentes tisulares por afinidad electro-química.
• Histoquímica. Son aquellas técnicas de tinción que implican la
modificación química de algunas moléculas para observarlas con
colorantes
• Lectinas. Se utilizan para reconocer glúcidos
• Inmunocitoquímica o inmunohistoquímica. basadas en la
especificidad de la unión de los anticuerpos a los antígenos
• Hibridación.
Clasificación de los colorantes

• Básicos: son sales en las que la base, normalmente una

amina, aporta el color. Tienen afinidad con sustancias
ácidas como el ADN o componentes de la matriz
extracelular como los glicosaminoglicanos.( Ej. tionina,
safranina, azul de toluidina, el azul de metileno o la
hematoxilina).
• Ácidos: son sales con el anión coloreado. Tienen apetencia
por sustancias básicas, sobre todo estructuras proteicas
localizadas en el citoplasma celular y también por el
colágeno de la matriz extracelular. (Ej de colorantes ácidos
son la fucsina ácida, verde rápido o la Eosina).
Clasificación de los colorantes

• Colorantes mordientes: son aquellos que se usan en

combinación con sales metálicas, que actúan como
mordiente. Estas sales se pueden emplear junto con el
colorante, antes o después. Normalmente se emplean para
teñir los núcleos. Por ejemplo, la hematoxilina férrica de
Heidenhain
• Neutros: poseen una porción ácida y otra básica, ambas
con capacidad para aportar color. Por tanto un mismo
colorante puede teñir tanto las partes básicas como las
ácidas de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de
metileno.
• Indiferentes o hidrofóbicos: se disuelven en os tejidos. Ej
Sudán se disuelve en lípidos y los tiñe
Tinción conHematoxilina y Eosina
 ALGUNOS EJEMPLOS
Tición PAS:Histoquímica

Tricrómico de Mallory

Impregnación Argén5ca
Inmunohistoquímica
Montaje
• Luego de la coloración, se deshidrata el corte y se monta
definitivamente.
• La deshidratación se realiza con alcoholes de graduación
creciente.
• Para el montaje se limpia el portaobjetos alrededor del
corte y se deposita sobre el una gota de FLOTEX y se
cubre con un cubreobjeto.
• Se deja secar una hora.
Observación e interpretación de un corte histológico

• Se debe hacer una

reconstrucción mental
tridimensional de las
células, tejidos y
órganos.
• Al inicio se observa
con el aumento
menor y
posteriormente
cuando se identifica
el tejido se observa
con aumento mayor
Observación de Estructuras tubulares

èSe pueden identificar

con más facilidad cuando
están cortados en sentido
transversal.
èEn cortes longitudinales
se puede distorsionar la
imagen de tubo
Artefactos