Universidad de Sonora

División de Ciencias Biológicas y de la Salud

Departamento de Agricultura y Ganadería
Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia

Materia
Laboratorio de patología clínica

Práctica #4
Bioquímica clínica (bitácora)

Alumno:
Kariana Janeth Nóperi Córdova

Maestro:
Dra. Paola del Carmen Gastelum

Fecha de entrega:
15 de octubre de 2023
l. Introducción

La glucosa es un tipo de azúcar que funciona como fuente de energía y que,

con apoyo de la insulina, la glucosa se transporta desde el torrente sanguíneo a las
células del cuerpo. Cantidades anormales de glucosa en la sangre podrán indicar
problemas como hiperglucemia, hipoglucemia, problemas con el páncreas o
glándulas suprarrenales, enfermedades del hígado.

La albúmina es un tipo de proteína producida por parte del hígado. La

albúmina ingresa al torrente sanguíneo y sirve para mantener el líquido que se filtra
de los vasos sanguíneos a otros tejidos, además, se encarga de transportar
hormonas, vitaminas y algunas enzimas. Niveles anormales de albúmina pueden
ser indicativos de enfermedades del hígado o riñones, deshidratación, desnutrición,
enfermedades digestivas o tiroideas, etc.

El colesterol es una sustancia que se encuentra en la sangre y es utilizado

para la formación de hormonas, vitamina D y de sustancias que sirven para digerir
alimentos. Un análisis de colesterol permite medir la cantidad de este encontrada
en sangre y sirve para determinar el riesgo de acumulación de depósitos de grasa
en arterias. Valores anormales pueden indicar ateroesclerosis, enfermedad de las
arterias coronarias, entre otras.

La fosfatasa alcalina (FA) es una enzima que se encuentra en varias partes

del cuerpo y se produce de diferentes formas. Mayoritariamente, la FA se encuentra
en hígado, huesos y sistema digestivo. La prueba de FA mide entonces, los niveles
de FA encontrados en sangre. Niveles anormales de FA podrán indicar afecciones
de salud como enfermedades hepáticas, trastornos óseos o enfermedades renales.
ll. Objetivo

El alumno identificará los distintos tipos de reactivos (glucosa, albúmina,

colesterol y fosfatasa alcalina) para su correcta utilización y determinación
cuantitativa en suero o plasma según corresponda.

lll. Fundamento

lll.l Glucosa
Glucosa oxidasa
D-Glucosa + H2O + O2 H2O2 + D-Gluconato

H2O2 + 4-AAP + Fenol Quinoneimina + H2O

La glucosa es oxidada por la glucosa oxidasa a gluconato y peróxido de

hidrogeno. Fenol + 4-APP + peróxido de hidrógeno, en presencia de peroxidasa,
producirá una quinoneimina que se mide a 500 nm. La absorbancia a 500 nm es
proporcional a la concentración de glucosa en la muestra.

lll.ll Albúmina

El método se basa en la unión de la albúmina hacía colorantes o indicadores,

siendo el más utilizado el verde de bromocresol. El reactivo se compone de verde
de bromocresol, buffer succinato ph 3.8 y preservantes y surfactantes; mientras que
la solución se compone de albúmina bobina y azida de sodio.

La muestra que se utilice puede ser tanto de suero como de plasma ya que
la albúmina es estable en cualquiera de las dos. esto, durante una semana a
temperatura ambiente y durante un mes a 4°C.

Para la realización de los cálculos, se utiliza la siguiente formula:

Factor = Concentración del calibrador / absorbancia del calibrador

Albúmina = Factor X absorbancia de muestra

lll.lll Colesterol
Col esterasa
Esteres decolesterol colesterol + ácidos grasos
Col oxidasa
Colesterol + H2O colesterol-3-one + H2O2
POD
2 H2O + 4-AAP + fenol quinoneimina (rojo seco)+4H2O

La intensidad del color rojo formado será directamente proporcional al

colesterol total en la muestra cuando esta se lee a 500 nm.

lll.lV Fosfatasa alcalina

Fosfatasa alcalina
p-NPP + h2O p-nifrofenol + H3PO4

El p-nitrofenol fosfato es hidrolizado a p-nifrofenol y fosfato inorgánico. La

razón de hidrólisis del p-NPP se medirá a 405 nm y será directamente
proporcional a la actividad de la fosfatasa alcalina.

lV. Metodología

lV.l Glucosa

Materiales

✓ Pipetas para 1 ml y 10 ul
✓ Tubos de ensayo
✓ Cronómetro
✓ Espectrotofotómetro
✓ Bloque térmico
✓ Sueros control
✓ Reactivo de glucosa

Procedimiento

✓ Se etiquetan los tubos para blanco, control estándar, paciente, etc.

✓ Se pipetean 1 ml del reactivo de trabajo y se precalienta a 37°C durante 5
minutos.
✓ Se añaden 10 uL de la muestra a los tubos respectivos-
✓ Se incuba durante 10 minutos.
✓ Se ajusta el espectrofotómetro a cero con el blanco y se procede a leer y a
anotar las absorbancias de todos los tubos a 500 nm.
✓ Se calculan los resultados.

IV.ll Albúmina
Materiales
✓ Espectrofotómetro
✓ Cronómetro
✓ Pipetas
✓ Calibrador
✓ Sueros control

Procedimiento

✓ Se lleva el reactivo a temperatura de reacción (18°-25°C) antes de realizar el

ensayo.
✓ Se realiza una calibración con calibrador sérico.
✓ Se realizan los cálculos utilizando la formula indicada.

lV.lll Colesterol

Materiales

✓ Reactivo de colesterol
✓ Pipetas automatizadas
✓ Tubos de ensayo
✓ Cronómetro
✓ Bloqueo térmico
✓ Espectrofotómetro

Procedimiento

✓ Se etiquetarán los tubos para identificación

✓ Pipetear 1 ml de reactivo en cada tubo
✓ Precalentar a 37°C por un mínimo de 5 minutos
✓ Se incuban todos los tubos durante 5 minutos
✓ Se ajusta el espectrofotómetro a 0
✓ Se leen y anotan las absorbancias

lV.lV Fosfatasa Alcalina

Materiales

✓ Reactivos de fosfatasa alcalina

✓ Pipetas automatizadas
✓ Cronómetro
✓ Tubos de ensayo
✓ Espectrofotómetro
✓ Bloque térmico
✓ Sueros control

Procedimiento

✓ Se prepara el reactivo de acuerdo con las instrucciones indicadas

dependiendo del reactivo seleccionado.
✓ Se pipetea 1 ml de reactivo de trabajo en cada tubo.
✓ Se precalienta 5 minutos a 37°C.
✓ Se añaden 25 uL de suero a los tubos respectivos y se mezclan.
✓ Se incuban todos los tubos a 37°C durante un minuto.
✓ Pasando el minuto, se lee y anota la absorbancia y se vuelve a realizar la
lectura pasados 60-120 segundos.
✓ Se calcula la diferencia de absorbancia/minuto y se multiplica la diferencia
por el factor 2187 para obtener el resultado en U/L.
V. Referencias

1. American diabetes association (s.f.) La glucosa en la sangre puede marcar una

gran diferencia. Extraído de https://diabetes.org/espanol/la-glucosa-puede-
marcar-una-gran-diferencia
2. Biblioteca Nacional de Medicina MedlinePlus (s.f.) Pruebas médicas. Extraído
de https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio.
3. Cordero, et. al. (s.f.) Conceptos generales sobre la albúmina humana y su
utilización clínica. Acta médica costarricense Vol 28; No. 1 32-38.
4. Organización Mayo Clinic (s.f.) Prueba de colesterol. Extraído de
https://www.mayoclinic.org/es/tests-procedures/cholesterol-test.