Experimento 3

Determinacin de albumina en muestras de suero: mtodo de verde de bromocresol

I.

Resumen: La albmina es una protena que se encuentra en gran proporcin en el

plasma sanguneo, siendo la principal protena de la sangre, y una de las ms
abundantes en el ser humano. Es sintetizada en el hgado. El objetivo del estudio fue
determinar niveles de albmina en muestras de suero y relacionar estos valores con
posibles patologas. Este procedimiento fue basado en las propiedades de albmina
srica de unirse con colorantes, en este caso con el verde de bromocresol a pH cido.
Las concentraciones de albmina determinadas se encontraron dentro del rango normal,
observndose un aumento en las concentraciones de protenas en muestras hemolizadas.

II.

III.

Objetivos:

Determinar la concentracin de
albumina en muestras de suero
empleando el mtodo verde de
bromocresol.

Calcular la concentracin de
globulinas y la relacin A/G con los
resultados obtenidos.
Introduccin:

La albumina es ms abundante de la protenas

plasmticas, su funcin principal es el
mantenimiento de la presin osmtica entre
los espacios vasculares y extravasculares. La
albumina tiene capacidad de transportar una
gran variedad de sustancias (cidos grasos,
fosfolpidos,
iones
metlicos,
cidos
aminados, hormas, bilirrubina...) Un aumento
medible de la tasa de albumina se encuentra en
casos de deshidratacin, una baja en la tasa de
albumina puede ser encontrada en caso de
defecto de sntesis, mal nutricin, eliminacin
excesiva (proteinuria) o en enfermedades
hepticas, siendo el defecto de sntesis
primario
o
gentico
por
ejemplo
analbuminemia
En 1964 se propuso un mtodo con Verde de
Bromocresol (BCG). Este procedimiento
mostr mayor sensibilidad y menor

susceptibilidad a sustancias de interferencia.

El mtodo original ha sido optimizado para
mejorar la correlacin con mtodos
electroforticos.
El mtodo est basado en la unin especfica
del verde de bromocresol (VBC), un colorante
aninico, y la protena albumina La intensidad
del color es proporcional a la concentracin de
Albumina presente. La albmina de las
muestras de suero se puede determinar por el
cambio de coloracin del verde de
bromocresol cuando se une selectivamente a
esta a pH 4.3. El cambio de coloracin se
refleja en que se provoca un cambio en la
absorbancia del verde de bromocresol que
tiene un mximo de absorcin a 440 nm y pasa
a presentar su mximo a 630 nm. El verde de
bromocresol es amarillo, mientras que el
complejo colorante tiene un intenso color azul.
(Laboratory Medical Scientific supply.Inc,
2009)

VALORES DE REFERENCIA (g/dL)

Protenas totales

6.4 - 8.3

Albumina

3.5 - 5.2

globulinas

2.7 - 3.8

A/G

1.2 - 2.2

IV.
Materiales, reactivos y equipo:
4.1 materiales:
micropipeta LABMATE 100 L y 1000 L,
puntillas para micropipeta, tubos de ensayo,
vaso qumico 100 m, 50 mL.
4.2 Reactivos:
Agua destilada, acido actico, acetato de
sodio, verde de bromocresol, hidrxido de
sodio.
Agua destilada: Lquido transparente,
incoloro, inodoro. Punto de ebullicin:
100C. No toxico, soluble en etanol.
Acido actico: Lquido incoloro de olor
acre. La sustancia es corrosiva para los
ojos, la piel y el tracto respiratorio.
Corrosivo por ingestin.
Acetato de sodio: Polvo cristalino
higroscpico, blanco. La sustancia irrita
levemente los ojos y la piel.
Verde de bromocresol: solido color
crema blanquecina, oxidante fuerte,
podra causar irritacin de la piel, ojos y
tracto respiratorio.
Hidrxido de sodio: slido blanco
soluble en agua, higroscpico. Absorbe
humedad y dixido de carbono del aire y
es corrosivo de metales y tejidos.
4.3 Equipo:
Espectrofotmetro SHIMADZU U-UV mini,
gradillas.
V.

Metodologa:

- Previo a realizar la determinacin de

albumina en muestras de suero, se tomo una
muestra de sangre (libre de hemolisis), se
centrifugo y se separo el suero.

- Posteriormente se procedi a la preparacin

de los reactivos, para esto se realizaron los
clculos correspondiente, seguido de pesaje y
dilucin.
- Etiquetamos los tubos como blanco, patrn,
y muestras.
- Seguido adicionamos a todos los tubos 1.0
ml. de reactivo verde de bromocresol en cada
tubo, posterior a esto transferimos 0.01 ml.
(10l) de agua destilada al tubo blanco, 0.01
ml. (10l) de suero patrn al tubo patrn y
0.01 ml. (10) de suero muestra en cada tubo
restante y homogenizamos bien.
- Incubamos los tubos por 5 minutos a
temperatura ambiente, seguido pusimos en
cero el espectrofotmetro con blanco a 630 nm
y procedimos a la lectura de la absorbancia de
los tubos.
- Se realizaron los clculos correspondientes
para conocer la concentracin de protenas en
cada muestra, albumina y globulinas y la
relacin albumina/globulina.
VI.

Resultados:

Cuadro 1: Resumen de los clculos para las

concentraciones
de
protenas
totales,
albumina,
globulinas
y
relacin
albumina/globulina en muestras de suero de
estudiantes de tecnologa mdica
III ao.
UNACHI. FCNYE, agosto, 2015.
MUESTRA
1

PROTEINAS
ALBUMINA GLOBULINA
TOTALES
8.28
5.26
3.02

A/G
1.74

7.72

5.35

2.37

2.26

7.6

6.39

1.21

5.2

VII.

Discusin:

Este procedimiento fue basado en las

propiedades de albmina srica de unirse con
colorantes, en este caso con el BCG. La

absorbancia de BCG a 630 nm incrementa al

unirse con la albmina y es proporcional a la
concentracin de albmina presente en el
suero.
El contenido srico de protenas solubles,
aquellas que circulan en fluidos extra e
intracelulares, se emplea en clnica como un
marcador de ayuda diagnstica, siendo las
principales pruebas analticas las que estn
relacionadas con la medicin de las protenas
totales y de la albmina.
Las protenas plasmticas y la albmina se
hallan mayoritariamente y en forma conjunta,
implicadas en el mantenimiento de la normal
distribucin del agua entre los tejidos y la
sangre
siendo
responsables
de
la
regularizacin de la presin onctica del
plasma adems del transporte de muchas
sustancias,
incluyendo
macromolculas.
(Robles, 2013)
En el cuadro 1 se muestran los resultados de
las concentraciones de protenas totales
determinada por el mtodo de biuret,
concentraciones de albmina determinada por
el mtodo de BCG y las concentraciones de
globinas determinadas mediante diferencia
entre las concentraciones de protenas totales
menos albmina as como la relacin
albumina/globinas.
En las muestras estudiadas se observa que las
concentraciones
de
protenas
totales
registradas se encuentran dentro del rango
normal, al igual que las concentraciones de
albmina con excepcin de la muestra 3 que
presenta un valor mayor de albumina y un
valor disminuido en la concentracin de
globinas, estando fuera de los intervalos de
referencia, este aumento se puede atribuir a
que se trataba de una muestra hemolizada
dndose un falso aumento por la presencia de
hemoglobina libre debido a esto se debe evitar
excesos de hemolisis ya que 100 mg/dl de
hemoglobina corresponden a cerca de 100

mg/dl de albmina. Otro factor interferente

pudo haber sido el uso prolongado de
torniquete ya que aumenta las concentraciones
de protenas en la sangre. Niveles
errneamente altos pueden ser causados por la
evaporacin en las muestras de suero.
Un factor a considerar en la determinacin de
protenas es la inadecuada mezcla de las
muestras congeladas ya puede ser causa de
error del 10-200% de los valores verdaderos.
(Arriaga Romero, 2010)
Como se muestra en el cuadro 1, al dividir el
valor de globulina entre el valor de albmina
se obtuvo la relacin existente entre ambos
tipos de protenas, denominada relacin A/G,
la que es utilizada clnicamente para estimar el
tipo y grado de desorden observado en
relacin al metabolismo de las protenas. Los
valores determinados para la relacin A/G se
encuentran igualmente dentro del intervalo
para valores normales a excepcin de la
muestra 3 que presenta un valor elevado. La
proporcin A/G es el mejor indicador
disponible para apreciar la relacin entre los
componentes de las protenas sricas, que para
un individuo cualquier es constante. En varios
estados patolgicos hay una relacin constante
entre el aumento de las globulinas y la
reduccin de las concentraciones de albmina
por ejemplo: Cirrosis, nefrosis, infecciones
agudas, neumona, fiebre reumtica. (Garca
& Serrano, 2003)
Se puede decir que los valores determinados
de protenas y albmina en esta experiencia de
laboratorio se encuentran dentro del rango
normal ya que se trataba de muestras de
individuos sanos, en caso de muestras con
significacin clnica o sospecha de alguna
patologa un aumento en concentracin de
albumina indicara una hiperalbuminemia y en
el caso contrario una hipoalbuminemia.
La hiperproteinemia o hiperalbuminemia por
lo general ocurre en el mieloma mltiple,

causado por altos niveles de inmunoglobulinas

monoclonales,
deshidratacin,
excesiva
prdida de agua, como en vmitos severos,
diarrea, enfermedad de Addison y diabetes
acidsica. La hemoconcentracin, descenso en
el volumen de agua plasmtica, se refleja
como una hiperproteinemia relativa, al verse
aumentadas en el mismo grado las
concentraciones de todas las protenas
plasmticas individuales.
La hipoproteinemia o hipoalbuminemia se
presenta en casos de malnutricin, edema,
sndrome nefrtico, mala absorcin y cirrosis
heptica severa. Al estar la albmina presente
a tan alta concentracin el simple descenso de
esta protena puede ser causa de
hipoproteinemia. (Robles, 2013)
VIII. Conclusiones:
Se determin cuantitativamente las
concentraciones de albmina en
muestras de estudiantes de tecnologa
mdica.
La
utilizacin
de
compuestos
cromgenos como el verde de
bromocresol y su unin especfica a la
albumina permiti cuantificar esta
protena
por
mtodos
fotocolorimtricos.
La relacin albmina/globulina es til
para indicar anomalas en ciertas
estructuras como el hgado o los
riones.
Es imprescindible la toma de muestras
libre de hemolisis, para evitar falsos
aumentos en las concentraciones de
protenas.
IX.
Bibliografa:
1. Arriaga Romero, J. M. (2010).
Recuperado el 2 de septiembre de

2015,
de
http://es.scribd.com/doc/8740308/QcAlbumina-globulina#scribd
2. Garca, J., & Serrano-Gallardo, L. (31
de marzo de 2003). Recuperado el 2 de
septiembre
de
2015,
de
https://www.nlm.nih.gov%2Fmedlinep
luspanishFarticle-3480.htm
3. Laboratory
Medical
Scientific
supply.Inc, (2009). Recuperado el 30
de
agosto
de
2015,
de
www.mymsupply.com/albumina
4. Robles, M. (14 de julio de 2013).
Recuperado el 2 de septiembre de
2015,
de
http://es.slideshare.net/aureuzz/determi
nacin-cuantitativa-colorimetrica-dealbumina-en-suero