OBJETIVO:

Determinar el % de proteína en materias primas y producto terminado para

formular dietas equilibradas que contengan los nutrientes necesarios para
mantener la Calidad, Salud y Bienestar del animal en cada una de las etapas
de su ciclo de vida.

DESCRIPCION BREVE DEL METODO:

El método A.O.A.C. 2001.11 KJELDAHL; se basa en la determinación del

nitrógeno en una amplia gama de muestras (alimentos y bebidas, piensos,
forrajes, fertilizantes) para el cálculo del contenido en proteína.

También se utiliza el método Kjeldahl para la determinación de nitrógeno en

aguas residuales y suelos. Es un método oficial descrito en múltiples
normativas: AOAC, USEPA, ISO, Farmacopeas y distintas Directivas
Comunitarias.

Este método puede ser dividido, básicamente en 3 etapas: digestión o

mineralización, destilación y valoración.

RESPONSABLE:

Técnico Analítico del Laboratorio de Química Húmeda y Supervisor del

Laboratorio de Control de Calidad.

ESPONSABLE DE VERIFICACION:

Supervisor del Laboratorio de Control de Calidad.

REGISTRO:

Registro para Análisis de % de Proteína CC-R-017

FRECUENCIA:

Cada vez que se requiera.

EQUIPO DE PROTECCION PERSONAL (EPP):

 Gabacha para laboratorio con manga larga

 Lentes de seguridad
 Guantes de nitrilo

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  Guantes para Calor
 Cofia en caso de requerirlo
 Zapatos de seguridad
 Vestimenta no rasgada o con agujeros

MATERIALES:

 Masa Patron 5gr

 Espátula para pesar muestra
 Bandeja para trasladar materiales
 Tubos de Mineralización
 Matraz de 250ml
 Puntas de 10ml // Pipeta Vol.
 Agitadores magnéticos
 Piseta para agua destilada
 Pinza para tubos mineralizados

INSUMOS:

 Papelería y útiles
 Jabon ANTRAX Neutro, libre de Fosfatos
 Papel encerado para pesar
 Material de referencia
 Papel Parafilm
 Papel Filtro N°42
 Papel Toalla

REACTIVOS:

 3gr de catalizador una mezcla de K2SO4: CuSO4: Se (10:1:0,1 en

peso).
 10 mL de Acido Sulfúrico (H2SO4) concentrado
 5 mL de Agua Oxigenada o Peróxido de Hidrógeno, Peróxido de
Dihidrógeno, Dióxido de Dihidrógeno o Dioxidano. Fórmula H2O2. 
 ácido bórico
 Hidróxido de Sodio (NaoH) para Valoración del Titulador
 ácido clorhídrico (HCl) 0.3N o sulfúrico (H2SO4) 0.3Npara su valoración

EQUIPO:

 Balanza Analítica
 Pipeta recargable programada para 10ml
 Dispensador para 10ml de Ácido Bórico
 Digestor para muestras
 Destilador
 Titulador Automático
 Agitador

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PROCEDIMIENTO:

Etapa de digestión: es un tratamiento con ácido sulfúrico concentrado, en

presencia de un catalizador y ebullición el cual convierte el nitrógeno orgánico
en ión amonio, según la ecuación:

1. Se introducen de 1 a 5 g de muestra un tubo de mineralización y se

ponen 3 g de catalizador que suele estar constituido por una mezcla de
sales de cobre, óxido de titanio o/y óxido de selenio. De forma habitual
se utiliza como catalizador una mezcla de K2SO4: CuSO4: Se (10:1:0,1
en peso).

2. Después se adicionan 10 mL de H2SO4 concentrado y 5 mL de H2O2.

3. Posteriormente se digiere a 420 ºC durante un tiempo que dependerá de

la cantidad y tipo de muestra.

4. Se sabe que la digestión ha terminado porque la disolución adquiere un

color verde esmeralda característico.
5. En esta etapa, el nitrógeno proteico es transformado en sulfato de
amonio por acción del ácido sulfúrico en caliente.

Etapa de destilación: se alcaliniza la muestra digerida y el nitrógeno se

desprende en forma de amoniaco según ecuación:

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El amoniaco destilado se recoge sobre un exceso desconocido de ácido bórico
según ecuación:

1. Después de enfriar se adicionan al tubo de digestión 50 mL de agua

destilada,

Se pone en el soporte del destilador y se adiciona una cantidad suficiente de

hidróxido sódico 10 N, (50 mL aprox.) para alcalinizar fuertemente el medio y
así desplazar el amoniaco de las sales amónicas.

El amoniaco liberado es arrastrado por el vapor de agua inyectado en el

contenido del tubo durante la destilación, y se recoge sobre una disolución de
ácido bórico (al 4 % p/v).

Etapa de valoración: La cuantificación del nitrógeno amoniacal se realiza por

medio de una volumetría ácido-base del ión borato formato, empleando ácido
clorhídrico o sulfúrico y como indicador una disolución alcohólica de una
mezcla de rojo de metilo y azul de metileno, según la ecuación:

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Los equivalentes de ácido consumidos corresponden a los equivalentes de
amoniaco destilados.

Cálculos:

De la valoración se puede calcular el número de equivalentes de nitrógeno

recogidos, y con este dato se obtiene el porcentaje de nitrógeno en la muestra.

Para calcular el porcentaje de proteína basta con multiplicar % de nitrógeno

obtenido por el factor 6.25.

Ejemplo:

El contenido en proteína de una muestra de pescado se determinó pesando

1.210 g.

Tras la digestión la disolución resultante se alcalinizó con un exceso de

Hidróxido de Sodio (NaOH),

Se destiló con vapor de agua y el Amoniaco (NH3) liberado se recogió sobre 50

mL de Ácido Bórico (H3BO3)

Posteriormente fue valorado con Acido Sulfúrico (H2SO4) 0.3N, gastándose

17.7 mL del mismo.

Calcular el % de proteína en la muestra de pescado.

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Para pasar al contenido de proteína, multiplicar por 6.25: