UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

UNIVERSIDAD DEL PERÚ, DECANA DE AMÉRICA

Informe de laboratorio -
Métodos para la
determinación de
glucosa en sangre

Curso: Bioquímica

Profesor(a): Doris Virginia Huerta Canales

Aaron Joel Camargo Mendoza

01/07/2021
1. Introducción
El trabajo experimental realizado el día jueves 01 de julio (8-11 am), consistió en la
interpretación de manuales pertenecientes a dos compañías proveedoras de kits de
diagnóstico, estas son Valtek y Wiener. Previamente se tuvo que realizar una revisión de
conceptos sobre la glucosa, sus funciones, enzimas que la catalizan y enfermedades que
puede ocasionar en caso se encuentre en cantidades excesivas o deficientes. Al término de
la sesión se dio paso a las preguntas dirigidas a la docente por parte de los estudiantes y
viceversa.

1.1. Objetivos
Los siguientes objetivos están planteados en el protocolo de la práctica con el fin de lograr
determinadas competencias, entre las que están:
Interpretar el significado clínico de la prueba de laboratorio.
● Explicar el fundamento de los métodos propuestos.
● Aplicar los procedimientos para su realización
● Conocer los valores de referencia de la prueba.
● Calcular sus valores de concentración.

2. Trabajos dentro de la sesión

2.1. Conceptos previos

● In vitro (dentro del vidrio): una detección precoz de ciertas anomalías mediante
pruebas no invasivas. Se refiere a una técnica para realizar un determinado
experimento en un tubo de ensayo, o generalmente en un ambiente controlado fuera
de un organismo vivo.

● D- glucosa: quiere decir que pertenece al grupo de los aldohexosas, tiene seis
carbonos y un grupo aldehído.

● Hexoquinasa: enzima que cataliza la primera reacción de la vía glucolítica, parte del
reactivo enzimático.

● Glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa: Su función consiste en mantener la homeostasis

de los eritrocitos frente a los insultos oxidativos, a través de la producción de
NADPH.

● Diabetes (hiperglucemia): altos niveles de azúcar o glucosa en la sangre, más de lo

normal. Es de dos tipos, la diabetes mellitus tipo 1 y la diabetes mellitus tipo 2.

● Hipoglicemia: niveles bajos de azúcar o glucosa en la sangre, menos de lo normal..

● Glicolisis: proceso en que las células descomponen parcialmente la glucosa.

● Hiperlipemia: afección caracterizada por niveles elevados de partículas de grasa

(lípidos) en la sangre.

● Niveles normales de glucosa: los niveles de glucosa en sangre estando en ayunas

se sitúan entre 100 y 125 mg/dl y después de comer entre los 140 y los 199 mg/dl.
 ● Glucosa oxidasa (GOD): cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico.

● Peróxido de hidrógeno (H2O2): se detecta mediante un aceptor cromogénico de

oxígeno.

● Beta-glucanos: normalizan los elevados niveles de colesterol LDL, ayudan en la

cicatrización de heridas y a prevenir infecciones.

● Ácido glucónico (pentahidroxicaproico): es el producto de oxidación de la D-glucosa

en el C1.

● Ampirona : es utilizado como reactivo en reacciones bioquímicas que producen

peróxidos o fenoles.

2.2. Procedimiento

Valtek laboratorio
-Significancia: su finalidad radica en determinar la presencia de enfermedades como la
diabetes mellitus de tipo 1 y 2, hipoglicemia o problemas renales, entre otras. Estos
trastornos están relacionados a cantidades de glucosa o azúcares fuera de lo normal en el
organismo.

-Fundamentos: basado en las reacciones de la glucosa, se utiliza un reactivo enzimático

que consta de : hexoquinasa (HK) y glucosa 6 fosfato deshidrogenasa (G6PDH).

En la primera reacción, por acción de la hexoquinasa, enzima que cataliza la primera

reacción de la vía glucolítica, obtenemos la glucosa 6 fosfato (oxidación de la D- glucosa), el
ATP es hidrolizado a ADP (liberación de energía). En la segunda reacción, por acción de la
G6PDH, el producto obtenido de la primera reacción, la glucosa 6 fosfato se oxida dando
como producto una 6 fosfogluconato, y el NAD gana hidrógenos (se reduce).

Conforme aumenta el NADH reducido aumenta la cantidad de glucosa de la muestra

(plasma o sangre), entonces el NADH reducido es un indicador para conocer la cantidad de
glucosa. Obtenemos el NADH reducido a partir de la actividad enzimática del reactivo
enzimático (HK + G6PDH).
-Reactivos: la temperatura indicada para su conservación es de 2 a 8 grados centígrados
hasta la fecha de caducidad indicada en el kit. Se debe tomar en cuenta que posteriormente
se tendrá que realizar una preparación que consiste en mezclar los reactivos con la
cantidad de agua destilada indicada, se obtiene como producto un reactivo reconstituido.
Para la preservación de este reactivo reconstituido se lo debe tener entre 2 a 8 grados
centígrados durante 30 días. Se indica descartar el reactivo en caso su absorbancia a 340
nm (longitud óptima) sea mayor 0.300 D.O contra blanco de agua. Los componentes de
este reactivo reconstituido son: buffer fosfato pH 7.5, glucosa hexoquinasa, G6PDH, ATP,
NAD, estabilizante y preservantes, solución estándar D- glucosa, todas ellas con sus
respectivas cantidades indicadas.

-Muestras: son aquellos fluidos corporales como la sangre o el plasma, también tenemos el
líquido cerebro espinal. Se utiliza como anticoagulante al fluoruro de sodio,debido a que
este inhibe la glucólisis, este proceso puede dar resultados alterados y no exactos por lo
que se busca evitar.

-Equipo requerido: se hace uso del espectrofotómetro que sirva para medir cuanta luz
absorbe una sustancia química. Este instrumento debe tener la capacidad de leer
absorbancias a 340 nanómetros dado que esta cantidad es la longitud de onda óptima para
el reactivo enzimático. También se hace uso de pipetas, timer o cronómetro y baño
termorregulado.

-Tecnica: llevar el reactivo a temperatura ambiente (20 a 25°C) durante 5 minutos o 37°C
durante 3 minutos. En una tabla nos indican las cantidades de la muestra desconocida, el
estándar, y el reactivo en blanco, estándar y desconocido. Las absorbancias deben ser
leídas con el espectrofotómetro calibrado para evitar resultados inexactos, para ello se
utiliza el blanco de reactivo.

-Cálculos: una vez realizado el procedimiento espectrofotométrico a 340 nm, podemos

determinar el factor de calibración, para ello tomamos en cuenta aspectos teóricos de la
espectrofotometría, para ello aplicamos la concentración estándar dividido por la
absorbancia estándar.

AbsSt = 0.87
Standard = 150
Factor = 150 / 0.87 = 172.4

Una vez determinado el factor de calibración, pasamos a determinar la concentración de

glucosa en porcentaje.

Absorbancia desconocido = 0.67

Glucosa (mg%) = 172.4 * 0.67 = 115.51
Valores de referencia:
60 a 110 mg%

Al tener un resultado de 115.51 mg% de glucosa podemos decir que hay un ligero exceso
respecto a los valores de referencia, se traduce es un estado hiperglicemico.

Wiener laboratorio
-Significancia: su finalidad radica en determinar la presencia de enfermedades como la
diabetes mellitus, su detección temprana es importante para su prevención, para ello se
debe evitar la cetoacidosis, este proceso se da por una deficiencia de insulina que no es
suficiente para convertir la glucosa en energía, por ello el organismo busca otras formas
para obtener energía, esta es mediante la descomposición de grasa, ello genera ácidos en
el torrente sanguíneo, a esto se le conoce como la cetoacidosis diabética.

-Fundamentos: la glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido

glucónico. Posteriormente el peróxido de hidrógeno (H2O2) producido se detecta mediante
un aceptor cromogénico de oxígeno(compuesto o sustancia que contiene un grupo formador
de color (4-AF + fenol), aca actua la enzima peroxidasa, obteniendose una quinona
coloreada con cuatro moléculas de agua.

Conforme aumenta la cantidad de glucosa, aumenta la cantidad de oxígeno consumido, por

lo que es proporcional.
.
-Reactivos: tenemos dos tipos de reactivos, los provistos y no provistos. Entre los reactivos
provistos tenemos al A, B, C y el estándar, todos con sus respectivos componentes y
medidas. En los no provistos tenemos al A, B, C, estándar y reactivo de trabajo. Otras
indicaciones son en relación a su preservación a determinada temperatura y en el tiempo
indicado, además de ello el kit brinda formas de detectar un deterioro, como por ejemplo el
caso de la aparición de un ligero color rosa en el reactivo de trabajo y la realización de
lecturas de absorbancia, como en el caso del reactivo en blanco, que en caso de ser
superiores a 0.160 D.O, debe ser desechado.

-Muestras: Como muestras se tiene el suero y el plasma, para ello se deben tomar en
cuenta los cuatro parámetros indicados; la recolección de, los aditivos, las sustancias
interferentes conocidas y la estabilidad e instrucciones de almacenamiento.

-Equipo requerido: se necesita de un espectrofotómetro, material volumétrico adecuado,

frasco de vidrio color caramelo, tubos espectrofotométricos, baño de agua y timer o
cronómetro. Se nos indica las respectivas medidas de temperatura, tiempo y cantidad,
además de ello también se especifica la longitud de onda óptima donde se logra la mayor
actividad enzimática esta es de 505 nm.

-Técnica: se da la preparación de los tubos estándar, blanco y desconocido, con sus

respectivas medidas. Posteriormente se da una incubación con un tiempo de 10 minutos a
37°C. Después se lleva al espectrofotómetro para medir las absorbancias a 505 nm,
previamente se debe haber calibrado el equipo.
-Cálculos: se realiza la medición de las absorbancias a 505 nm con el espectrofotómetro
calibrado, previamente se tuvo que realizar la incubación por 10 minutos en baño de agua
por 37°C.

D = 0.19
S = 0.22

Operaciones
f = 1 / 0.22 = 4.54
glucosa g/l = 0.19 *4.54 = 0.86

Valores de referencia en suero o plasma

0,70 a 1,10 g/l

Por lo que podemos decir que la concentración de glucosa se encuentra dentro del rango de
valores normales en suero o plasma.

3. Conclusiones

Respecto a las dos metodologías utilizadas, la principal diferencia entre estas se encuentra
en los fundamentos, en el caso de Valtek, la formación de la glucosa 6-fosfato y
6-fosfogluconato se da gracias a las enzimas hexoquinasa y la glucosa-6 fosfato
deshidrogenasa, además se da la formación del NADH reducido que funciona como
indicador de la concentración de glucosa, la relación es proporcional entre ambas. En el
caso de Wiener, podemos ver que la reacción es distinta y la enzima que actúa es la GOD
con la POD, consiste de una reacción específica (se oxida la glucosa y se genera H2O2), y
una reacción indicadora (oxidación del cromógeno). Con respecto a los valores de
referencia, estos sirven para indicarnos si hay una hipoglucemia o una hiperglucemia, tanto
Valtek como Wiener manejan sus propios valores, para Wiener son 0,70 a 1,10 g/l; mientras
que para Valtek, 60-110 mg %. Ambos métodos nos han servido para cuantificar una
muestra de glucosa, permitiendo diagnosticar enfermedades como la diabetes mellitus. Su
importancia también radica en el diagnóstico precoz, que consiste en evitar la cetoacidosis,
también aporta en el control de dichos trastornos mediante el uso correcto de
medicamentos una vez detectada la diabetes mellitus o algún otro trastorno relacionado.

Referencia bibliográficas
1. Nuñez M.A. 2021. Guía de Prácticas del Curso de Bioquímica - Nutrición. Perú.
2. Niveles de glucosa en sangre [Internet]. Sanitas. [citado 3 de julio de 2021].
Disponible en:
https://www.sanitas.es/sanitas/seguros/es/particulares/biblioteca-de-salud/diabetes/ni
veles-glucosa-sangre.html
3. glicemia_enzimatica_aa_liquida_sp.pdf [Internet]. [citado 3 de julio de 2021].
Disponible en:
 https://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/gli
cemia_enzimatica_aa_liquida_sp.pdf
4. VTK-glucosa.pdf [Internet]. [citado 3 de julio de 2021]. Disponible en:
https://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/VTK-glucosa.pdf