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UNIVERSIDAD NACIONAL DE

CHIMBORAZO
Facultad de Ciencias de la Salud
Carrera de Laboratorio Clnico e
Histopatolgico

GRUPO N 3 FIJACIN

* Integrantes:
Carrasco Gabriel
Granda Daniela
Morocho Erika
Orozco Karla
Paredes Darwin
Pilamunga Cynthia
Sagna Andres
Urrea Karen

* Ctedra: Citologa

* Docente:

Periodo Acadmico
Abril Agosto 2017

Riobamba Ecuador
Fecha de entrega: FIJACIN
4 de Mayo del 2017
Conceptos Generales.

"La fijacin es esencialmente un mtodo para la preservacin de la morfologa y composicin


qumica de la clula. Durante la fijacin, las sustancias albuminoides del tejido pasan del estado
sol, como se encuentran en vida, al de gel, cuyo contenido de agua es menor. De esta manera, se
detienen los procesos pos-mortem y las estructuras se conservan con un mnimo de artificios,
preparndolas para tratamientos ulteriores (Thompson 1966, Garca del Moral 1993, Eltoum et
al. 2001)".

Las muestras obtenidas, deben sumergirse rpidamente en el reactivo


fijador previamente seleccionado, a fin de que los tejidos no sufran alteraciones
estructurales producidas por los siguientes fenmenos:

1. Accin de enzimas locales que provoca procesos autolticos en el tejido.


2. Proliferacin de bacterias y hongos provenientes del medio ambiente o de la
misma muestra, los cuales desarrollan en condiciones anaerbicas.
3. Evaporacin por desecacin de los componentes tisulares con eliminacin de
gases por descomposicin orgnica.
4. Contraccin o dilatacin osmtica, que produce distorsin tisular como
consecuencia de la evaporacin.

El reactivo fijador se debe seleccionar antes de comenzar con la toma de la muestra.


La seleccin depende del objeto de estudio y del grado de organizacin
macromolecular que compone cada tejido. En los componentes tisulares
organizados, tales como cromosomas, fibras elsticas, regiones organizadoras del
nuclolo, depsitos de glucgeno, entre otros, existe un gran nmero de fuerzas
intermoleculares que actan entre s mantenindolos unidos y estables y, por tanto,
son menos vulnerables a la accin del reactivo fijador. Es decir que, si bien la
actividad fijadora del reactivo es suficiente para detener los procesos posmortem,
ste no produce alteraciones estereoqumicas importantes en aquellos componentes.
(Tomasi, 2011)

Es muy importante que la fijacin sea muy rpido. Si se demora este paso, los ncleos
de las clulas pierden su estructura, lo que hara muy difcil el reconocimiento de los
tipos celulares y sus cambios patolgicos.

Debern usarse portaobjetos nuevos, bien desengrasados. Colocar un clip en el extremo


donde se numera. (convencionalmente la parte corta del clip es la que se deja hacia
arriba, del lado donde se extiende el material) Lo ideal es marcar el portaobjeto con

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lpiz de diamante o en su defecto de Whydia (los que usan los cortadores de cermicas),
que se consigue en ferreteras y es muy econmico. Los portaobjetos deben numerarse y
tener colocado el clip antes de la toma de material.

Los clips aseguran que los diferentes portaobjetos guardados en el mismo frasco de
alcohol no tomen contacto entre s.

Objetivo de la fijacin.
Su principal objetivo es conservar el detalle morfolgico de la clulas en el estado lo
ms parecido posible a la clula en el tejido vivo. Esto se consigue con fijadores que
deshidratan las clulas, inactivan los enzimas autolticos, coagulan las protenas y
penetran en la membrana celular.

Es un paso indispensable si no queremos una extensin deteriorada u oxidada que no


tome bien los colorantes y que no permita una correcta lectura cuando se estudia al
microscopio. La fijacin debe realizarse de inmediato a la toma y la extensin del
material citolgico cuando la preparacin est todava hmeda.

No existe el fijador perfecto, todos causan contraccin celular y cada uno acta con una
velocidad diferente.

Reglas generales en el empleo del liquido fijador:

Debe penetrar las clulas rpidamente para que la detallada morfologa celular
sea mantenida.

El encogimiento celular debe ser mnimo y uniforme de forma que no ocurran


distorsiones morfolgicas.

Debe permitir la permeabilidad de las tinciones a travs de las barreras celulares


y ser apropiado para los mtodos de tincin usados.

Debe permitir la adhesin celular a la lmina de vidrio para el anlisis de


microscopio.

Debe ser bactericida, no txico y permanente.

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El volumen del fijador respecto al de la pieza, es un punto muy importante para
la fijacin, lo ideal es 1-20 como mnimo.
En la fijacin con lquido que pierden eficacia al utilizarlos hay que ser mucho
ms cuidadoso.
Para lograr una fijacin correcta el liquido tendr que estar en contacto con todas
las paredes del tejido, es por eso que no es conveniente meter en un mismo
frasco varias piezas porque podran pagarse unas a otras y evitar la penetracin
del fijador.
Cada fijador tiene un tiempo de fijacin que va a depender de su capacidad de
penetracin y del tipo de tejido. Si este tiempo de fijacin se prolonga se
produce en endurecimientos en distintas estructuras del tejido. Solo se permitir
la permanencia de un tejido: en un fijador, si adems al tener esta propiedad es
un liquido conservante porque sino se corre el peligro de que bacterias aerobias
descompongan el tejido.
Durante la fijacin se producen accidentes que modifican el estado de la pieza,
los ms importantes son la Hinchazn y la retraccin de los tejidos as como la
alteracin en el color. Si por ejemplo: el acido actico produce hinchazn debido
a que deshace los enlaces formando molculas de agua que son absorbidas por la
pieza. Otros como el acido crmico, alcohol y acetona, realizan el efecto
contrario porque el fijador absorbe el agua del tejido por eso es importante que
la presin osmtica del liquido fijador sea equivalente a la del tejido y que la de
su pH se aproxime al pH fisiolgico salvo que nos interese que su composicin
sea acida. Este ltimo caso nos interesa para descalcificar.
Cada fijador tiene caractersticas negativas y positivas por tanto ninguno es el
mejor y para cada tipo de tejido ser conveniente usas uno u otro. Los fijadores
puros no suelen usarse porque sern buenos fijadores de algunas estructuras pero
estropearan otras. Por ello lo que ms se usan sern las mezclas de varios
fijadores que permiten un campo de trabajo ms amplio.
Un buen fijador, conserva la tensin superficial de las clulas, preserva fielmente
los componentes celulares penetra al interior de las clulas e incrementa la
capacidad de tincin, de tal especialmente los detalles cromatnicos. Su accin
debe ser inmediata y causar mnima alteracin fsica y qumica.
La fijacin debe ser inmediata con el fin de inactivar enzimas autolticas, evitar
la oxidacin, alteraciones morfolgicas y cambios en la tincin celular.
La fijacin como tal, ocurre en los primeros 2 3 minutos, el resto del tiempo
aumenta la adhesin del material al portaobjeto.
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Las clulas en el proceso de fijacin obtienen la capacidad para teirse una vez
que se ha realizado la desnaturalizacin y deshidratacin de la porcin gel del
citoplasma. Por medio de la ruptura de enlaces hidrgeno, salinos y de otros
tipos, se forma una malla que tiende a englobar los componentes de la clula. En
el citoplasma fluido hay una mezcla de solucin verdadera y coloidal de sales,
protenas, carbohidratos, lpidos, cidos orgnicos y enzimas.
La concentracin de alcohol debe estar entre 80% - 100%; concentraciones
inferiores producen lisis celular en los extendidos crvico-vaginales.
Concentraciones menores del 80% se utilizan solamente en muestras de fluidos
orgnicos con aumento de protenas
La rehidratacin en solucin acuosa con glicerina puede ser usado en el caso de
frotis mal fijados por otros mtodos. Las clulas escamosas aparecen
restauradas, pero las de tipo secretoria frecuentemente sufren dao irreparable.
Una fijacin prolongada de varios das o semanas, no altera el preparado.
Procurar que el Spray sea de gotas suaves y parejas. El vehculo del spray puede
congelar y daar las clulas. Es importante respetar la distancia: muy cerca se
corre el riesgo de desalojar las clulas del portaobjeto, lejos no tenemos la
seguridad de la fijacin.
No hay evidencias de que los fijadores en spray sean dainos, pero tampoco lo
contrario, de modo que se debe proteger a la paciente y al profesional usando
campanas o capuchas.
Secado al aire: produce lisis celular, no hay diferenciacin en la coloracin
citoplasmtica, y los ncleos toman color plido.

Defectos de fijacin

La fijacin se puede afectar por las razones siguientes:

1. La fijacin prolongada: deteriora la capacidad celular para la posterior captacin


de los colorantes.

2. Situar el nebulizador a menos de 15 cm del portaobjeto: provoca que el gas


impacte las clulas y adquiera un aspecto reticular con reas sin clulas y con
zonas donde los elementos celulares se sitan en grupos muy gruesos.

3. Tanto si se utilizan nebulizadores o lquidos fijadores, fijar de inmediato es


imprescindible, ya que su retraso produce cambios celulares por desecacin,

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estos cambios son: degeneracin celular, aumento del tamao y aspecto borroso
de los ncleos que impide su correcta evaluacin.

Los defectos de extensin del material (canal, crvix) son los siguientes:

1. Extensiones muy finas o estiradas.

2. Extensiones muy gruesas.

3. Extensiones en forma circular, remolino o zig zag.

4. Extensiones donde se ha pasado ms de una vez por el mismo sitio. (Rodiles,


2008)

Los defectos de fijacin de un significativo nmero de citologas convencionales y el


enmascaramiento de la celularidad por el exceso de sangre, moco, clulas inflamatorias
u otros artefactos son, en gran parte, la fuente de las muestras no satisfactorias. En este
sentido, estudios preliminares del programa de deteccin precoz de cncer de crvix de
Escocia demostraron una significativa disminucin del 70% (de un 8% a un 2.4%) en la
cantidad de muestras no satisfactorias para su evaluacin cuando se compar la
citologa lquida con la convencional. (Santamara, 2009)

Para preservar muestras citolgicas:

Alcohol al 95%- ter.

Alcohol 95% en atomizador o citospray.

Metanol al 100%

Propanol 80%

Isopropanol 80%

Pre-fijador para muestras de lquidos corporales:

alcohol 50%.

Para las PAAF se pueden utilizar:

Alcohol 95%

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Formalina buferada al 10%

Secado al aire.

MTODOS DE FIJACIN

1. Fijacin hmeda: Sumergir inmediatamente las muestras citolgicas en alcohol


etlico, o equivalentes, por un tiempo mnimo de 15 minutos, otros autores
consideran 30 minutos el adecuado previo al proceso de coloracin. Es el
mtodo ms utilizado y recomendado, por su estabilidad y por no causar
alteraciones fsicas ni qumicas en las clulas. Si se quiere re-usar el fijador, ste
debe ser filtrado.
2. Fijacin hmeda y posterior secado al aire: se colocan las placas en el fijador
(alcohol etlico al 95% - 96%) y despus de 15 minutos se sacan y se dejan secar
al aire para transportarlas al laboratorio donde se deben colocar nuevamente en
el alcohol fijador para el proceso de coloracin.
3. Atomizador (Cito-spray): contiene polmeros o plsticos solubles en agua, se
debe utilizar dejando una distancia aproximada de 15 25 cm. entre la lmina y
el atomizador, esparciendo en forma uniforme el fijador, evitando dejar una
pelcula gruesa sobre la misma. Posteriormente, dejar secar al medio ambiente
unos 10 minutos. Este tipo de fijador debe eliminarse totalmente con agua o
alcohol al 95% antes de efectuar la coloracin, ya que reduce la capacidad de
tincin de los ncleos
4. Secado al aire: consiste en dejar secar al aire los extendidos; como consecuencia
se produce la remocin de agua y oxidacin de las clulas; una vez coloreados
los extendidos, se observa un aumento del ndice eosinfilo y lisis celular. La
rehidratacin se realiza sumergindolo en solucin acuosa con glicerina por 3
minutos seguida por dos lavados con alcohol etlico al 95% y siguiendo la
coloracin de rutina. No es recomendable utilizar este mtodo.

TIPOS DE FIJADORES

La fijacin inmediata de los frotis facilita su correcta interpretacin. Las dos formas ms
comnmente usadas son:

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Lquidos fijadores (alcohol de 95) y en el mercado Carbowax (polietilenglicol)

Spray

Los siguientes son fijadores adecuados para los frotis del cuello uterino que han de
ser teidos con el mtodo de Papanicolaou

Etanol al 95% (para un fijado ptima)

Isopropanol al 80%

Alcohol desnaturalizado al 95% (90 partes de etanol al 95%, cinco partes de


metanol puro y cinco partes de isopropanol puro)

Alcohol de grado reagente (metanol puro, isopropanol al 80% y acetona al 90%)

El fijado debe ser inmediato. El frotis no debe dejarse secar antes de ser fijado
(eurocytology, s.f.)

Fijadores alcohlicos:

Son la mayora de los fijadores usados en citologa, actan deshidratando las clulas y
coagulando las protenas, su mayor ventaja es que son fijadores rpidos y su desventaja
es que son voltiles e inflamables.

Los ms usados son:

Etanol 95 %

Es el fijador de eleccin cuando la tincin posterior es la de Papanicolau. Produce


resultados muy satisfactorios.

La extensin se pone en un bao de etanol al 95 % durante 15 - 20 minutos aunque


puede conservarse indefinidamente siempre que el bao este tapado en el frigorfico.

Se le puede aadir cido actico al 25 % con lo que se lisan los hemates, por ello en
las preparaciones en que se sospecha existencia es una buena solucin para evitar la
dificultad que representara una existencia masiva de hemates recubriendo a los
elementos celulares motivo de estudio. Esta mezcla no debe realizarse en casos en que

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se desee realizar una valoracin citolgica hormonal ya que se produce una falsa
eosinoflia que puede llevar a confusin al realizar el recuento para el ndice de
eosinoflia.

Metanol al 100 %.

Propanol e isopropanol al 90 %.

Mezcla de alcohol - ter a partes iguales:

Da unos excelentes resultados sobre todo tipo de materiales pero en la actualidad est en
desuso por las peligrosas caractersticas fsico- qumicas del ter que es muy inflamable
y voltil.

El alcohol etlico (Etanol)

Tambin llamado alcohol etlico (C2H5OH) es un fijador coagulante, no aditivo y de


bajo potencial de ionizacin (0.45 volt.), suele emplearse solo. Penetra lentamente el
tejido produciendo contraccin de la muestra y endurecindola. Es miscible en agua en
todas sus proporciones y compatible con todos aquellos fijadores que no tienen
actividad oxidante fuerte. No produce efectos de sobrecoloracin. Provoca la
precipitacin de las protenas por extraccin de la capa de agua que las solvata pero sin
desnaturalizarlas.
La accin ms potente corresponde a las soluciones ms concentradas (96 100). Para
fijar fragmentos de 5 mm de espesor es suficiente con 6 horas de accin. Si el tamao de
la muestra es mayor se corre el riesgo de que las capas superficiales se endurezcan
demasiado y ste no pueda penetrar an ms como para alcanzar las capas ms
profundas. Las soluciones etanlicas menos concentradas tienen un efecto macerador de
la muestra (70), por tanto, no se utilizan como fijador. Precipita por coagulacin la
totalidad del citoplasma, las mitocondrias se distorsionan, los glbulos lipdicos
difunden o disuelven y provoca ligera contraccin nucleolar.

Lquido claro, transparente o incoloro, voltil, inflamable y de olor agradable. En el


comercio se puede encontrar puro en cuyo caso tiene fuertes gravmenes tributarios
para evitar su utilizacin clandestina para evitar la fabricacin de bebidas alcohlicas, o
bien lo tenemos desnaturalizado diluido al 90 o 70 %. Como fijador nico utilizaremos

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alcohol a unas concentraciones entre el 70 y 90% y se obtiene cogiendo de 70-90 ml de
alcohol puro y se lleva hasta 100 con agua destilada.

La fijacin ms potente va a corresponder a las soluciones ms concentradas, pero a


altas concentraciones la capa externa del tejido se endurece en exceso, lo que impide la
penetracin del fijador a la parte interna de la pieza.

El tiempo de fijacin correspondiente a una pieza de 5mm de espesor es dos a cuatro


horas renovando unas 3 veces el lquido.

Es un fijador que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas enzimas titulares, fija


los pigmentos y se emplea en las extensiones citolgicas. Como altera escasamente la
estructura antignica de los tejidos es un buen agente fijador para inmunohistoqumica.

Ventajas:

Fijan y deshidratan al mismo tiempo


Posee una gran velocidad de penetracin
Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a la
anterior propiedad aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin es un notable
agente bactericida y por tanto un buen conservante.

Desventajas:

Fijan y deshidratan al mismo tiempo: es incompatible con muchos fijadores:


KCr2 o el OsO3 lo que limita su participacin en muchas mezclas fijadoras.
No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los cidos nucleicos y
adems disuelve parcialmente los lpidos.
Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua que extrae
de los tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente
Prepara ms la tincin porque carece de efecto mordiente
Puede dar origen a fenmenos de desplazamiento de sustancias.

Nota : la muestra tiene que permanecer en alcohol etlico por lo menos 20 minutos para
que el alcohol etlico alcanze las capas ms profundas o alcance la muestra en su
totalidad para una excelente fijacin.

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Metanol:

Conocido como alcohol metlico (CH3OH) es un fijador no aditivo que, generalmente,


se utiliza solo y cuyo potencial de oxidacin es inferior al del etanol. Esto hace que
tenga mayor poder reductor y, por tanto, se lo recomiende para la fijacin de cidos
nucleicos y en la impregnacin argntica de regiones organizadoras del nucleolo. Es un
excelente fijador para citologa exfoliativa general. Al igual que el etanol es miscible en
agua y forma puentes hidrgeno con las molculas de agua del tejido, las que extrae con
rapidez coagulando protenas. Es muy adecuado para la realizacin de mtodos enzimo
e inmunohistoqumicos e hibridacin in situ.

Citospray:

Algunos utilizan fijador citolgico en spray en lugar de alcohol de 96. Este


procedimiento es muy bueno cuando la toma la realiza el mdico y el portaobjeto es
luego trasladado al Laboratorio. Sin embargo, se debe sealar que: 1) El fijador
citolgico no puede ser remplazado por spray fijador del cabello (prctica muy
difundida en el ambiente), porque puede producir artefactos que dificultan la
observacin 2) El fijador citolgico es un fijador de superficie, que requiere luego una
verdadera fijacin con alcohol, de no menos de 30 minutos.

Despus de 30 minutos de fijacin como mnimo, se har una tincin con Azul de
Metileno o Giemsa (se recomienda Giemsa porque se puede controlar mejor el tiempo).
Azul de Metileno: se colocar el portaobjeto en posicin horizontal y se cubrir con el
colorante durante 30 segundos.

Luego se lavar con agua corriente y se dejar secar al aire.


Giemsa: se colocar el portaobjeto en posicin horizontal y se cubrir con el colorante
diludo; el tiempo ser el habitual segn la tcnica usada en hematologa, y depender
de la dilucin del colorante (por ejemplo: dil1/5, de 5 a 7 minutos)

La observacin se har cubriendo previamente el preparado con aceite de inmersin en


una fina capa que permitir la visin en menor aumento. Luego se aadir una gota de
aceite para observar en inmersin. (Fundacin bioqumica Argentina, 2007)

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Es un fijador en forma de aerosol. Es un producto comercial que contiene una mezcla de
alcohol isoproplico y una materia plstica, el polietilglicol, protectora de la desecacin.

Con este spray se pulveriza toda la superficie del porta de forma rpida y sencilla, se
debe aplicar a 25 - 30 cm. de distancia de la muestra. Se aplica al material citolgico
inmediatamente despus de su extensin en el portal.

Es muy usado por su simplicidad y buenos resultados, se recomienda sobre todo cuando
las extensiones deben ser enviadas a otros laboratorios para su tincin (extensiones
ginecolgicas, cepillados orofaringeos, esofgicos, bronquiales...). Por el contrario debe
evitarse su uso en extendidos de materiales lquidos realizados en el propio laboratorio y
en los hemticos para no provocar agrupamientos de los hemates.

Antes de teir debe extraerse el citospray mediante pases sucesivos de 5 - 10 minutos


cada uno por etanol al 96 %.

Alternativamente y dado que el lquido del aerosol es soluble en agua, al extensin


puede ser teida inmediatamente despus de rociarla, con lo que se acorta el tiempo
total del proceso.

El secado al aire sin fijar se emplea cuando se van a realizar ciertas tinciones como por
ejemplo la de May Crundwald Giemnsa, con esta tincin no se ve bien la cromatina
nuclear y se usa en citologas hematolgicas.

OTROS FIJADORES

Fijadores por deshidratacin tisular

Alcohol etlico y acetona

Son sustancias altamente higroscpicas es decir absorben agua actan eliminando tanto
el agua libre como el agua ligada a las protenas de forma que estas ltimas precipitan y
disminuyen su solubilidad. Este cambio proteico es conocido con el nombre de
desnaturalizacin y provoca importantes alteraciones en la organizacin y estructura
celular y tisular, por tanto, estos agentes fijadores inducen grandes cambios en la
morfologa orgnica sobre todo si se emplean como agentes fijadores aislados. Alguno
de ellos como por ejemplo la acetona, altera poco la estructura antignica tisular y ello
se debe a que estos fenomenitos inducidos son reversibles en parte tras la rehidratacin.

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GRUPO N 3 FIJADORES
El fundamente molecular de la accin deshidratante de los alcoholes y la acetona, est
en la competicin que establecen con las protenas por las molculas de agua cuando se
encuentra en soluciones concentrada, los principales agentes fijadores por
deshidratacin son alcoholes metlico y etlico, acetona y cloroformo.

Acetona

Es un lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzor. Deshidrata


rpidamente y considerable el tejido por lo que es poco utilizable. El tiempo de
fijacin nunca exceder de dos horas y en piezas delgadas son recomendables 20
minutos. Su uso como fijador est prcticamente limitado a los mtodos
hitoqumicos e inmunohistoqumicos porque conserva muy bien la estructura
antignica y la actividad enzimtica, a veces tambin se utiliza en microscopia
electrnica para la fijacin del material que se va a incluir en resinas acrlicas. Se
emplea generalmente sin diluir a 4C, entre sus inconvenientes ms notables
provocan una gran contraccin tisular y por tanto grandes artefactos que suelen
hacer intil su empleo en el microscopio ptico convencional otro de sus
inconvenientes es que debido a su rapidez de accin y a su capacidad de
endurecimiento es imprescindible controlar el tiempo de fijacin.

Fijadores que actan por cambios en el estado coloidal de las


protenas

Las protenas son molculas anfteras (pueden comportarse como cidos o bases, segn
el pH) cuyo punto isoelctrico se encuentra en torno a un pH de 5.8. En este punto la
estabilidad de las molculas es mnima y su disociacin mxima. sta escasa estabilidad
molecular se debe a que las protenas en este punto se desprenden del agua lquida o
endgena. Por este motivo las protenas precipitan en presencia de determinadas cidos
que disminuyen el pH de la disolucin hasta alcanzar el punto isoelctrico.

Todos los fijadores de este grupo son de carcter cido y se emplean formando parte de
mezclas fijadores. Poseen adems una gran velocidad d penetracin en los tejidos y
algn poder de descalificacin. Entre los principales fijadores tenemos:

cido actico

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Lquido transparente y fuerte olor avinagrado. Sus vapores son muy inflamables en
estado puro se denomina: cido actico glacial. Cuando la temperatura ambiente
disminuye o aumenta, disminuye por debajo de los 10C tiende a solidificarse en forma
de agujas cristalizadas muy custicas. Se utiliza diluido en concentraciones entre el 1 y
5 % formando parte de mezclas fijadores o de soluciones decalcificantes. Entre las
ventajas que tiene es el fijador ideal para ncleo protenas y acido nucleicos y otra es
precipitar protenas sin sustraer el agua de los tejidos porque no es giroscpico y
produce cierto edema intersticial que compensa la excesiva refraccin pausado por otros
agentes fijadores. Entre los inconvenientes es mal fijador de citoplasma y membranas
celular y destruye mitocondrias.

cido tricloroactico

Son cristales incoloros custicos, solubles en agua en solucin al 5 % fija los nervios de
8 a 20 horas. Nunca se lavan el tejido despus de usar ste cido porque el edema que
produce es excesivo y de lugar a muchos artefactos. Al 2.5 % se usa mezclado con otras
sustancias.

cido sulfosaliclico

Se usa al 5% es buen fijador porque permite casi todas las coloraciones endurece
ptimamente los tejidos, pero no los contrae despus hay que lavar el tejido con agua,
pero la fijacin debe hacerse en la oscuridad de 6 a 24 horas.

cido crmico

Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras, se utiliza


bastante en microscopia electrnica entre las ventajas que tiene:

Excelente fijador estructural y acta como mordiente en tinciones que emplean


colorantes bsicos, entre los colorantes que tiene es que incompatible con fijadores
habituales como el formol y alcohol; escasa velocidad de penetracin en trozos
pequeos tarde varios das en penetrar en la pieza e impregna de coloracin verdosa los
tejidos por lo que hay que lavarlos abundantemente en agua destilada tras el uso de ese
acido, los tejidos quedan excesivamente blandos.

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GRUPO N 3 FIJADORES
Fijadores por formacin de sales con los tejidos

En estos casos el fijador es un catin metlico fundamentalmente cromo o mercurio o


un derivado orgnico como el cido pcrico que son susceptibles de formar con los
tejidos sales denominados proteinatos metlicos o picratos por lo general todos los
agentes d este grupo poseen gran velocidad de penetracin y fijacin porque la
formacin de la sel, se produce instantneamente.

Se origina un efecto barrera al actuar los proteinatos formados superficie como dos
mecanismos obstaculizando penetracin fijadora, adems se produce sobre el tejido
precipitacin metlica lo que provoca un notable endurecimiento que obliga a emplearlo
en mezclas fijadoras que amortigen este efecto. Entre los principales fijadores
tenemos:

Cloruro de mercurio o sublimado

Es un polvo cristalino blanco y venenoso y hay que usarlo bajo campana se usa en
soluciones del 5-6%. El efecto fijador se consigue por la combinacin de los iones de
Mercurio con los grupos cidos de las protenas especialmente con los de carcter
carboxlico, hidroxlico, sulfidrilo y con los residuos fosfricos de las nucleoprotenas.

Ventajas:

Es un excelente fijador de los caracteres morfolgicos celulares por lo que es el


de eleccin para patologas hematopoyticas y renales, donde el diagnostico se
apoya normalmente en la observacin de finos detalles nucleares y
citoplasmticos.
Es un excelente mordiente por lo que produce intensa y brillante coloracin
nuclear y citoplasmtica.

Desventajas:

No es un buen bactericida por lo que no es un buen lquido conservante tiene


escasa capacidad de penetracin por lo que requiere fraccionamiento cuidadoso
del tejido. Otro de los inconvenientes es que si se prolonga demasiado tiempo de

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GRUPO N 3 FIJADORES
actuacin contrae y endurece los tejidos hasta dificultar el corte en el
micrtomo, por eso nunca deben sobrepasarse las 4 horas de fijacin. Tras haber
cumplido esta y comn paso previo a la inclusin, los tejidos pueden
conservarse indefinidamente en alcohol etlico al 70%. Otro de los
inconvenientes es que de origen a precipitados metlicos de color pardo sobre
los tejidos lo cual dificulta su observacin al microscopio estos precipitados
pueden eliminarse mediante tratamiento del tejido previo a la coloracin con
soluciones alcohlicas yodales semejantes al LUGOL yodadas.

Dicromato Potsico

Es un polvo amarillento que reacciona con las protenas para formar cromatos, se utiliza
en disolucin acuosa al 1-2%, fija las protenas por lo que las mitocondrias quedan
perfectamente conversadas y da un aspecto homogneo al ncleo despus de la fijacin
del dicromato deben lavarse abundantemente con agua.

Ventajas:

Es que tiene un fuerte efecto mordiente excelente fijador para lapidar complejos
para mielina, mitocondrias y aparato de Golgi que los contienen en abundancia.
Su utilizacin es indispensable para tcnicas de impregnacin argntica de las
clulas del sistema nervioso central.

Desventajas:

El primero de ellos es incompatible con alcohol y formol, posee baja velocidad


de penetracin y endurece escasamente los tejidos lo que puede dificultar el
corte en el micrtomo. Otro: provoca artefactos titulares como la aparicin de
vacuolas citoplasmticas, retracciones y cambios en la morfologa nuclear. Otro:
disuelve la cromatina por lo que es necesario en estos casos asociarlo con cido
actico dentro de mezclas fijadoras.
Los tejidos han de ser lavados despus de fijados en una solucin salina o
tamponada para evitar el depsito de pigmento verde que puede producirse en el
curso de la inclusin o coloracin posterior.

cido Pcrico

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GRUPO N 3 FIJADORES
En el comercio se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color amarillo muy
txicas de carcter explosivo. Acta coagulando las protenas a travs de la formacin
de picratos que las confieren gran apetencia por colorantes cidos. Se utiliza en solucin
saturada al 2%, es un excelente fijador estructural que conserva adecuadamente la
composicin proteica de los tejidos. Controlando adecuadamente el tiempo de fijacin
produce una ptima contraccin de los tejidos que favorece su procesamiento
histolgico. Aunque tiene penetracin algo lenta posee buena velocidad de fijacin no
disuelve el glicgeno ni los lpidos es el fijador de eleccin para estas sustancias.

Ventajas:

Posee una leve accin decalcificante por lo cual puede emplearse como fijador
para las muestras de tejido seo.
Se maneja fcilmente en soluciones debido a la gran estabilidad que tiene.

Desventajas:

En estado puro el cido pcrico es explosivo si se somete a color hay que


mantenerlo alejado de fuentes de color, tampoco deben dejarse evaporar sus
disoluciones para evitar la formacin de precipitados. Si se prolonga el efecto de
fijacin que es de 4-18 horas dependiendo de tamao pieza aparecen
inconvenientes por una excesiva retraccin tisular. Sobre todo, si la pieza ha sido
inadecuadamente lavada en agua y luego deshidratada.
Tie los tejidos de color amarillo y si no se elimina completamente antes de la
inclusin en parafina provoca un continuo deterioro de la estructura tisular que
pueda hacer imposible su estudio histopatolgico algunas semanas despus del
procesamiento.
La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 70-
80% o en una solucin saturada de LiCO4 en alcohol de 70 es incompatible en
la inclusin en celoidina.

Acetato de uranilo

Es una sal soluble en agua, cristalizado de color amarillo, se descompone con la luz, no
endurece los tejidos, se usa en soluciones al 2-3% normalmente mezclado con OsO3 y
despus de la fijacin hay que lavar el tejido abundantemente con agua.

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GRUPO N 3 FIJADORES
Fijadores que actan por reticularizacin de las protenas

El proceso que denominamos reticularizacin de las protenas sobreviene cuando la


desnaturalizacin de stas molculas de se produce no por precipitacin, sino porque el
agente que provoca el fenmeno induce la rotura masiva de los puentes de Hidrgeno
determinantes de la estructura helicoidal de las molculas proteicas, con la formacin
posterior de una malla reticular polipeptdica por asociacin qumica entre los grupos
activos desenmascarados por el lquido fijador.

Entre los principales fijadores tenemos:

Formaldehdo o formol

Es gaseoso en estado puro, se vuelve lquido a 21C, es txico y con un olor


caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y en ste estado en concentraciones entre
35-40% y estabilizado con metanol se denomina formalina pura o formol con la accin
del fro la formalina pura tiende a precipitar y esta situacin suele ser reversible
aadiendo unas gotas de NaOH y concentrando la mezcla. Como agente fijador el
formaldehdo se emplea a una concentracin del 4% pero como se parte de una solucin
de formalina sta concentracin se obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina
en 9 de agua en formacin salina o tampn.

Ventajas:

Es el fijador ms barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos
de rutina en Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la
estructura tisular.
Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un
medio ptimo para conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular.
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del
sublimado.

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GRUPO N 3 FIJADORES
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la
coloracin tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas
quirrgicas.
Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea
como agente de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de
cualquier impregnacin argntica.
El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes
modificando la temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador
completa a partir de las 36 horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3
horas. Por este motivo la formalina es un fijador de eleccin cuando se emplean
hornos de microondas en tcnicas de histotecnologa.
Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente
en Anatoma patolgica.

Desventajas:

Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y mucosa


nasal.
Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en
cido frmico y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la
cromatina nuclear por eso con el paso del tiempo los ncleos celulares adoptan
un aspecto fantasma para evitar este inconveniente el formol debe guardarse en
frascos opacos o emplearse en forma de solucin neutra o tamponado.
Se incorpora progresivamente al tejido con lo cual se consumen durante el
proceso de fijacin por lo que debe encontrarse en exceso.
Es debido a que se incorpora al tejido y que tiene baja presin osmtica provoca
la incorporacin de agua a los espacios intratisulares por lo que el peso y el
volumen del tejido una vez fijado se aumenta de manera notable. Este efecto se
puede prevenir utilizando formol salino o tamponado.
Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que
contienen hierro y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les dan una
coloracin verdosa.
Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido
frmico confiere a las piezas un tinte grisceo y en tejidos que tienen mucha
sangre da origen a un pigmento formlico que es negro o pardo oscuro que
precipita en aglomeraciones irregulares sobre estructuras preexistentes. Este
pigmento se puede eliminar sumergiendo los cortes en alcohol absoluto saturado

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GRUPO N 3 FIJADORES
con cido pcrico compuesto por 10, 12 gramos de pcrico en alcohol etlico al
95-100% durante 5 minutos. O bien podemos sumergirlo en alcohol amoniacal
que es el de 1 a 5 partes de hidrxido amnico en 95 a 99 de alcohol etlico al
70%. En este caso se tratan los cortes durante 15 minutos, seguidos de dos baos
de agua destilada y despus otro de alcohol al 70% de 5 minutos de duracin
cada uno.

Adems, existen soluciones fijadoras simples que contienen formol:

Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de
disoluciones de formaldehdo en agua destilada y se prepara disolviendo 9 gramos de
cloruro sdico en 1000 mililitros de formalina al 10%.

Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10% una


pequea cantidad de carbonato clcico insoluble que queda depositado en el fondo del
recipiente neutraliza esta sal el exceso de cido frmico que se produce y aunque puede
utilizarse todava para la formacin de tejidos en la prctica ha sido desplazada por las
soluciones tamponadas.

Formol tamponado: Es la solucin ms empleada hoy en da para prevenir el choque


osmtico que provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de
pigmento formlico que ocurre a un pH inferior a 6. Se preparada la siguiente manera,
como amortiguador se emplea el tampn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la
siguiente frmula:

Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas


tcnicas de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico
glacial a 9 partes de formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.

Formol clcico o solucin de Baker: Se emplea como fijador de eleccin en algunas


tcnicas de histoenzimologa y se prepara aadiendo cloruro clcico al 1% a una
solucin de formalina neutra o tamponada al 10%.

Fijadores que contienen formol

Lquido de Bouin (1897)

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GRUPO N 3 FIJADORES
Solucin muy usada como alternativo a la formalina cuando queremos fijar ciertos
Tejidos como piel rganos endocrinos, testculos y tejido embrionario en general. Sin
embargo, no est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los cuales provoca una
severa distorsin.

-Solucin acuosa de

cido pcrico 1.2 %50ml

-Formol 37-40% 250ml

-Acido actico glacial

50ml

Fijador de Bouin-Hollander

es una variante del lquido de Bouin especialmente indicado para la fijacin de los
cilindros de biopsia de mdula sea cuando no es posible controlar el tiempo de fijacin
de la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso conservar las 48 horas sin
que se produzca excesivo endurecimiento.

Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil)

Es una alternativa de lquido de Bouin cuando la pieza que se debe fijar es relativamente
voluminosa porque posee una velocidad de penetracin mucho ms elevada. Se utiliza
tambin cuando se precisa una fijacin especfica de sustancias hidrosolubles como el
glucgeno ya que evita su disolucin.

Fijador de Mller

Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la adicin de


sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los fijadores
de Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre.

Fijador de Orth

Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de tejido nervios. Se


prepara de la siguiente manera:

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GRUPO N 3 FIJADORES
Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.

Lquido de Karnovsky (1946)

Tambin conocido como Glutaraldehido-paraformaldehido, se utiliza especialmente


para la fijacin de muestras destinadas al estudio con microscopio electrnico.

Lquido de Gendre (1937)

Constituye una variante de la mezcla de Bouin y se la emplea con muy buenos


resultados para la fijacin de Glucgeno. Tras fijar, las muestras se deben lavar con
varios baos de etanol al 70.

Lquido de Lewitsky (1958)

Esta mezcla permite la preservacin de depsitos grasos de tejidos animales y, en


especial, de vegetales. En nuestro laboratorio se lo utiliza con el mismo propsito en
tejidos embrionarios con muy buenos resultados de fijacin.

Lquido Anatech Ltd. o Formol-zinc (1988)

Esta mezcla no tamponada es un excelente fijador para inmunohistoqumica. La


solucin tamponada se prepara agregando 1.6 gr de cloruro de zinc a 1000 ml de
Formol-PBS pH 7,2.

Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly)

Ambas mezclas son en esencia casi idnticas. La denominacin B5 corresponde en


realidad a una modificacin de la de Zenker.

La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor


utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de
hecho, la fijacin en una mezcla que contenga sublimado es hoy da prcticamente
imprescindible para el diagnstico morfolgico en las patologas del sistema linfoide y
hematopoytico. Es debido a la gran importancia que se da a la observacin de finos
detalles nucleares como es la presencia o no de hendiduras o repliegues nucleares y del
nuclolo para catalogar un tumor maligno de ganglios linfticos, o de mdula sea
(leucemias) como de alto o bajo grado de malignidad y por tanto recomendar la

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GRUPO N 3 FIJADORES
teraputica ms oportuna. Adems, estas soluciones B5 Zenker formol son los fijadores
de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y para fibrina.

Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor


conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular.

Solucin de trabajo de B5

Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo reduce el sublimado a cloruro


mercurioso y mercurio metlico que se depositan en forma de un precipitado blanco
grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de endurecimiento que posee el
sublimado, el tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems, el espesor
mximo de las muestras no debe superar los 4 mm debido al escaso poder de
penetracin de la mezcla fijadora. Debido a la aparicin de precipitados mercricos
sobre los tejidos las secciones histolgicas antes de ser coloreados. Han de ser
sometidas a un tratamiento especfico mediante soluciones que eliminan estos depsitos.
Tras la fijacin los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol etlico al 70-
80%.

Fijadores que no contienen formol

Lquido de Zenker:

Trata de combinar los efectos favorables del sublimado y del dicromato potsico. En la
prctica habitual ha sido sustituido por B5. Su empleo ha quedado prcticamente
restringido al proceso de refinacin-decalcificacin a que son sometidas las biopsias de
mdula sea cuando se realiza una fijacin inicial con B5.

Liquido de Carnoy

Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para los hidratos de


carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin fijadora
es extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo,
produce una excesiva retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos, as como
una pobre conservacin estructural del ADN.

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GRUPO N 3 FIJADORES
El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse
directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al
prolongar demasiado la deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el
etanol por metanol en la composicin de lquido fijador, que adems provoca menor
retraccin tisular, y para conservar la pieza se deposita en alcohol etlico absoluto.
(SPUNIC, s.f.)( TOMASI Vctor , s.f.)

-Etanol 95% 60 ml

-Cloroformo 30 ml

-Acido actico

glacial 10 ml

(en este fijador la muestra no debe permanecer ms de 15 min)

Solucin de formalina buferada neutral:

Formalina 37-40%100ml

Agua 900ml

Fosfato de sodio

monobsico . 4 g

Fosfato de sodio

bibsico 6.5 g.

cVapor de formalina:

este fijador hemolisa los glbulo rojos y encoge las clulas

Fijador cido Pcrico

-Acido pcrico 1.3 g

-Alcohol etlico 70% 1000ml

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GRUPO N 3 FIJADORES
ANEXOS

Anexo1: Fijacin alcohol

Fuente: https://image.slidesharecdn.com/citologa-vaginal-nanitasworkshp-
1225205602104371-8/95/citologa-cervicovaginal-interpretacin-18-728.jpg?
cb=1225180463

Anexo 2: Fijacin citospray

Fuente: https://es.slideshare.net/EstivalisRivera/tcnicas-histolgicas-44290061

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GRUPO N 3 FIJADORES
Tipos de fijadores

Anexo 3: fijador citolgico

Fuente: http://www.bioplastsa.com/productos-ginecologia-fijador-citologia.html

Anexo 4: Etanol al 95% para un fijado ptima

Fuente: http://www.bioplastsa.com/productos-ginecologia-fijador-citologia.html

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GRUPO N 3 FIJADORES
Anexo 5: Isopropanol al 80%

Fuente: https://www.jdcsupplies.com/isopropyl-alcohol-99-16-oz-bottle/

Anexo 6: Alcohol desnaturalizado al 95%

Fuente: http://www.librerianyr.cl/product.php?id_product=10187

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Fijadores especiales

Anexo 7: Solucin de Bouin: 37-40% 250ml

Fuente: http://scienceservices.de/en/bouin-s-solution-1000ml-a.html

Bibliografa

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bioqumica Argentina: http://proeco-erige.blogspot.com/2007/05/procedimiento-para-la-
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de Fijacin de muestras biolgicas:
http://educacionhistotecnologiafijacion.blogspot.com/

CTR Scientific. (22 de Diciembre de 2011). HOJA DE DATOS DE SEGURIDAD


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Rodiles, H. (2008). Efectos de Fijacin. La Habana: Ciencias Mdicas.

Santamara, J. S. (30 de Noviembre de 2009). X Congreso Virtual Hispanoamericano


de Anatoma Patolgica. Obtenido de Citologa en medio lquido. Conceptos generales
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OMASI Vctor . (s.f.). BLOGS. Obtenido de Fijadores Qumicos:


http://educacionhistotecnologiafijaciondos.blogspot.com/

SPUNIC. (s.f.). EL RINCN. Obtenido de Fijadores (Procesado de Tejidos):


http://html.rincondelvago.com/fijadores_procesado-de-tejidos.html

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