Principios de

instrumentación

Debani Alejandra Vazquez

Miguel de la Fuente Renteria
Fase inicial de crecimiento Empezaron a integrarse los
de la instrumentación microprocesadores en muchos
analizadores analiticos

50’s 70’s

80’s
60’s

Los analizadores de un solo canal se Un tipo nuevo de sistema

expandieron para dar analizadores de
multicanal que se adaptaban a una
automatizado, el analizador
variedad de condiciones de laboratorio. de acceso directo
Una aplicación exitosa de análisis
multicanal de el sistema Technicon SMA

ESPECTROFOTOMETRÍA
Muchas de las determinaciones
realizadas en el laboratorio clinico están
basadas en las medidas de la energía
radiante absorbida o transmitida bajo
condiciones controladas
Los instrumentos espectrofotometricos
miden la luz de diversas maneras
Espectrofotómetro Mide la absorción de luz monocromática
producida por una red monocromadora.
Espectrómetro de emisión atómica de llama
Mide la luz emitida por átomos sencillos quemados en una llama
Fotómetro de absorción atómica
Mide la luz absorbida por átomos disociados por calor
Fluorimetro Mide la luz de una determinada longitud de onda que
emite una molécula desp de ser excitada por una radiación
electromagnética de una energía dada
Espectroscopia Se puede clasificar en cuatro principales categorías:
absorción o emisión de moléculas, y absorción o emisión de átomos
 Luz visible

Uv 390nm------------700nm
Rayos X Infrarrojos
Rayos gamma Microondas

Fotómetro proporciona los valores de acuerdo a la luz que se utilice en la

metodología o la cuantificación

La luz se elige de acuerdo a estos colores

Fotómetro
Rendija de entrada Monocromador Rendija de salida
Lámpara de excitación

El equipo se debe de calibrar primero

100% T/ 0 Ab
 LEY DE
LEY DE BEER LAMBERT
A mayor concentración, mayor absorbancia y La Ab es directamente proporcional a la
menor transmitancia concentración y a la long del tubo
La Ab es directamente proporcional a la si el tubo es más grande absorbe más luz
concentración
Tubo de 1

LEY DE BEER-LAMBERT
La Ab es directamente proporcional a la longitud
del tubo y a la concentración de la muestra

T: 100% T: <100% Entre más

Ab: 0 Ab: > 0 pigmento <T y >Ab
Colorante anaranjado de metilo

Luz Tramitancia Ab

400 86.1 % 0.048

420 84.8% 0.058

440 84.0% 0.068

460 83.4% 0.075

480 85.2% 0.071 Factor de calibración

500 87.9% 0.056

520 94.6% 0.036

 NEFELOMETRÍA y TURBIDIMETRÍA
La nefelometría y la turbidimetría son métodos disponibles para medir la concentración de una solución
que contiene partículas demasiado grandes para la espectroscopia de absorción
Cuando un haz de luz colimado incide sobre una suspensión de partículas, porciones de la luz se
absorben, reflejan, dispersan y transmiten.

15º - 90º
 Soluciones con bajas
concentraciones de
partículas dispersantes
A. La nefelometría es la medida de la
dispersión de la luz por una solución de
partículas
B. Mide la luz que se dispersa a un ángulo de
15º a 90º con respecto al haz incidente de
la cubeta
C. La intensidad de la luz dispersa será >
cuando < sea el tamaño de las partículas
D. Una aplicación frecuente es la medida
de reacciones antígeno-anticuerpo
E. Mide la formación de productos de
inmunoprecipitación insolubles resultantes
de la combinación de un antígeno
específico con un determinado anticuerpo
Soluciones con
grandes
concentraciones de
partículas dispersantes
A. Es la medida de la reducción en la transmisión
de la luz causada por la formación de partículas.
Se detecta la luz transmitida hacia delante. Mide
la luz que no se dispersa
B. La cantidad de luz absorbida por una suspensión
de partículas depende de la concentración de la
muestra y el tamaño de la partícula.
C. Varios analizadores microbiológicos: miden la
turbidez de la muestra para detectar el
crecimiento bacteriano en cultivos en suspensión
D. Medir la sensibilidad a antibióticos de estos
cultivos
E. En los analizadores de coagulación, detectan
la formación de coágulos en las cubetas
F. Cuantificar la concentración proteica de fluidos
biológicos, como la orina y el LCR
Citometría de flujo
Citometría de flujo mide las
propiedades de celulas en suspension
moviéndose en un medio fluido.

Citometro de flujo: las células son

interpretadas al pasar por un láser de argón,
está formado por un sistema de transporte
celular, fuente de luz laser, camara de flujo,
filtros monocromáticos, lentes, espejos, tubos
fotomultiplicadores y una computadora
Las muestras se preparan en un medio.
las alícuotas de suspensión celular se introducen

en la cámara de flujo mediante presión.

se rodean de un líquido que las

alinea enfoque hidrodinámico.
cada célula es interceptada por un rayo láser.

Dispersión directa de luz proporcional al tamaño de

la célula, lateral granulosidad celular, informacion

del núcleo, organelos, forma, tipo de célula

Citómetros modernos de alta velocidad pueden trabajar con 70000 eventos por
segundo, fluorocromos contribuye al inmunofenotipaje de leucemias, linfomas,
monitorización del estado inmunologico, la citometría de flujo puede ayudar a
analizar el ciclo celular, recuento de glóbulos rojos, blancos y plaquetas.
Technicon H-3: Citómetro flujo típico
FACScan
 Electroforesis

Técnica para separar fragmentos de ADN, ARN y

proteínas. aplica una corriente a través de un gel con las
moléculas. según su tamaño y carga, se desplazarán en
diferentes direcciones o a distintas velocidades
En gel de almidón o de agarosa el tapón
cubre el gel (para evitar que se seque
por calentamiento al pasar la corriente)
Se aplica la muestra depositándola
(pipeta) como una gota sobre el
soporte (papel, acetato de celulosa) o
dentro de un “pocillo” creado en el gel.
materiales de soporte geles de acetato
de celulosa, agarosa y poliacrilamida

soluciones más empleadas para

visualización amido black,
ponceau s, red 7B, Sudan Black B
Aplicaciones: Proteínas suero,

hemoglobinas, isoenzimas

Fabricantes: Beckman
Coulter, Helena Laboratories
Proteínas se cargan negativamente con
sustancias como SDS (Dodecilsulfato

sódico)

los fragmentos más cortos de

ADN estarán más cerca del
extremo positivo del gel
 TIPOS
Electroforesis en gel agarosa:
cadenas pequeñas Horizontales
Poliacrilamida: separación de
proteínas o ácidos nucleicos de
pequeño tamaño Verticales
Campos Pulsados: genomas

bacterianos Gradiente desnaturalizante

Capilar: detector de DNA con un fluoróforo

 Densitometria
Densitometria: mide la absorbancia de la tinción en un medio de soporte

Beckman Appraise Densitometer System 80s

Densitómetros leen con un fotoreceptor las tiras de electroforesis creadas en acetato

de celulosa, y genera un densitograma que permite estimar las fracciones proteicas
(albúmina y globulinas alfa1, alfa2, beta y gamma).
GS-900 para filmar y cuantificar proteínas en un amplio rango dinámico.

Image Lab software Captura y analiza la gel de electroforesis y blots.