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Determinacin de hierro total en vinos mediante espectrofotometra UV - Visible

RESUMEN. El Fe que contiene el vino (aprox. 3 mg/L) se encuentra en dos formas: Fe 2+ o Fe3+. El ion Fe3+, en un medio moderadamente cido, reacciona con KSCN, para dar lugar a una serie de complejos de color rojo: [Fe(SCN)]2+; [Fe(SCN)2]+; [Fe(SCN)6]3-, siendo los de estequiometria superior los ms coloreados. Esta reaccin es la base de la determinacin espectrofotomtrica de Fe en diferentes matrices, entre ellas los vinos blancos o poco coloreados. Previo a la determinacin del contenido en hierro frrico y total en la muestra de vino proporcionada, se elabora la recta de calibracin, cuyos resultados se ajustan a un coeficiente R muy satisfactorio (09999). Los valores de las absorbancias obtenidos en las muestras, por duplicado- se han redondeado y el resultado obtenido est dentro de los rangos legales en cuanto al contenido en hierro de los vinos (hasta 8-10 mg/L para no provocar enturbiamientos). INTRODUCCION TERICA Los mtodos pticos de anlisis qumico se basan en la medida de la radiacin electromagntica emitida por la materia o que interacta con ella. Dichos mtodos se clasifican en espectroscpicos y no espectroscpicos. Los primeros, que sern los tratados en esta prctica, se basan en la propiedad que tienen las molculas, los tomos y los iones de absorber o emitir radiacin electromagntica a una determinada longitud de onda. Todos ellos implican la medida de la radiacin que es emitida, absorbida o transmitida al interactuar el campo elctrico o magntico de la misma con los campos elctricos o magnticos de la materia. Cuando un tomo o una molcula absorben radiacin electromagntica de longitud de onda , esto significa que absorbe un fotn de esa . Tras esta absorcin la especie se excita pasando un electrn de un orbital del estado fundamental a un orbital excitado de energa superior. Los estados excitados de cada tomo o molcula dependen de su estructura electrnica y que los distinguen del resto. Como consecuencia, el espectro de absorcin de cada sustancia constituye una verdadera sea de identidad de la especie. Los parmetros que se utilizan para describir este proceso son la Transmitancia que es la relacin entre la luz incidente I0 y la luz transmitida I y la Absorbancia que es el logaritmo decimal con signo negativo de la transmitancia: T = I/I0 A = -log10 T = log (I0/I). La ley de Lambert-Beer, que es una ley de proporcionalidad que se cumple para luz monocromtica y disoluciones diluidas de las especies absorbentes (< 001 M), establece una relacin directa entreala a bsorbancia (A) y la concentracin de especies absorbentes (A): A = log (I0/I) = l C donde: A: absorbancia; : absortividad; l: longitud de la trayectoria del haz de radiacin a travs del medio o camino ptico; C: concentracin del analito.

Determinacin del hierro total en vinos mediante espectrofotometra UV-visible. Los metales que se encuentran en el vino pueden provenir de diversas fuentes: desde la propia uva hasta los propios recipientes de almacenamiento por la transferencia de metales que puede ocasionar el ataque de los cidos presentes en el vino, pasando por las cesiones en el proceso de elaboracin. Un alto contenido en metales puede provocar un enturbiamiento del vino ya que dichos metales se insolubilizan quedando afectado el color o limpidez del vino , originando lo que se denominan quiebras o depsitos. La cantidad mxima de Cu y Fe que tolerar un vino antes de que se produzca una quiebra depende del tipo de vino, composicin y, hasta en cierta medida, de las condiciones de almacenamiento. Los lmites mximos recomendados son de 05 ppm para el Cu y 6 ppm para el Fe. El Fe que contiene el vino (aprox. 3 mg/L) se encuentra en dos formas: Fe2+ o Fe3+. El ion Fe3+, en un medio moderadamente cido, reacciona con KSCN, para dar lugar a una serie de complejos de color rojo: [Fe(SCN)]2+; [Fe(SCN)2]+; [Fe(SCN)6]3-, siendo los de estequiometria superior los ms coloreados. Esta reaccin es la base de la determinacin espectrofotomtrica de Fe en diferentes matrices, entre ellas los vinos blancos o poco coloreados. La espectroscopia UV-Visible se basa en el anlisis de la cantidad de radiacin electromagntica (en el rango de longitudes de onda del ultravioleta y visible) que puede absorber o transmitir una muestra en funcin de la cantidad de sustancia presente. La absorcin selectiva de radiacin de determinadas longitudes de onda por parte de un analito permite obtener el espectro de absorcin caracterstico del mismo, mediante un instrumento denominado espectrofotmetro. El primer paso a seguir en cualquier anlisis cuantitativo mediante el tipo de espectroscopia que nos ocupa es la seleccin de la longitud de onda () de media, que normalmente ser la de mxima abso rcin del compuesto, dado que en las proximidades del mximo se cumple la ley de Lambert-Beer. Se procede a la medicin de la absorbancia a la seleccionada de una serie de disoluciones patrn de concentracin creciente y conocida para elaborar la recta de calibrado representando las absorbancias medidas frente a su correspondiente concentracin (en el eje de abscisas). El ajuste se har por el mtodo de mnimos cuadrados y la pendiente de la recta ser . Cuanto mayor sea la pendiente, mayor exactitud tendremos en la medida. Finalmente, llevando a la grfica obtenida la absorcin de una muestra determinada, nos proporcionar su concentracin. Fundamento qumico de la determinacin. Se basa en la propiedad mencionada ms arriba. En concreto:

Fe3+ + nSCNdonde n = 1, 2, 3,, 6

Fe(SCN)n(3-n)

La concentracin de los reactivos y el pH del medio condicionan el predominio de cada uno de los posibles complejos, todos ellos de color rojo, cuya intensidad aumenta a medida que lo hace el nmero de coordinacin. En general, en un medio poco cido y con concentraciones moderadas de tiocianato, se forma el complejo [Fe(SCN)2]+ en cantidad significativa, mantenindose estable durante, aproximadamente 45 minutos. No debe usarse cido sulfrico pues los iones sulfato forman complejos con los iones frricos, disminuyendo la intensidad del color a medida que aumenta la concentracin de cido. Usar, en su lugar, cido ntrico o cido clorhdrico. El espectro de absorcin vara en el intervalo comprendido entre 470 y 530 nm, dependiendo del medio de reaccin. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. Preparacin de las disoluciones de trabajo: o 50 mL de etanol 20% (v/v). Se prepara por dilucin 1:5 (v/v) de etanol comercial con agua destilada. o Disolucin de perxido de hidrgeno al 3% (v/v). Se prepara a partir de una dilucin 1:10 (v/v) de la existente al 30% en el Laboratorio. o Disolucin patrn de hierro (disolucin madre) de 50 mg/L, que se proporciona preparada. o Disolucin de tiocianato potsico 21 M. 25 mL. 2. Preparacin de las disoluciones de patrn de hierro para la obtencin del calibrado. o A partir de la solucin madre de Fe(III) se preparan 6 soluciones patrn de 10 mL de la siguiente forma: Se aade de forma secuencial a cada matraz aforado de 10 mL: 50 mL de disolucin de etanol al 20% (v/v), 025 mL; 05 mL; 10 mL; 15mL; 20 ,L; 25 mL de la disolucin patrn de hierro de 50 mg/L, respectivamente, para obtener disoluciones patrn que contengan 125; 25; 50; 75; 100 y 125 mg/L de hierro, respectivamente. A continuacin se adiciona a cada matraz 10 mL de HCl concentrado, 5 gotas de disolucin de H2O2 al 3% (v/v) y 10 mL de disolucin 21 M de tiocianato potsico. Se enrasan los matraces con agua destilada y se agitan hasta homogeneizar. o Se prepara, adems, un blanco para la recta de calibrado (B0) que contiene todos los reactivos excepto el hierro y se aaden de forma secuencial en el mismo orden que los anteriores. 3. Preparacin de las muestras a analizar. o La muestra procede de un envase tetra brik, ya abierto, de vino blanco. o Se va a determinar en ella el contenido total de hierro y el hierro trivalente. o Para el contenido total de hierro (M1) se toman 70 mL de la muestra de vino y se lleva a un matraz aforado de 10 mL. o Se aade de forma secuencial 1 mL de HCl concentrado, 5 gotas de disolucin de perxido de hidrgeno al 3% (v/v) y 1 mL de disolucin 21 M de tiocianato potsico. Se enrasa con agua destilada y se agita vigorosamente. o Se prepara la muestra (M2) para el hierro trivalente, igual que la muestra anterior, exceptuando la adicin de agua oxigenada.

4. Preparacin del blanco de la muestra. o Se preparan sendos blancos B1 y B2, correspondientes a las muestras M1 y M2, de la misma forma que ellas, con los mismos reactivos a excepcin de las muestras en s. Medidas espectrofotomtricas. Se ajusta el espectrofotmetro a una longitud de onda de 478 nm, usando una cubeta de 1 cm de paso de luz. Se ajusta al 0 de absorbancia con el blanco de calibrado. Se efectan las lecturas con los patrones, comenzando con el de menor dilucin, obtenindose los siguientes resultados:

Abs 0,178 0,341 0,652 0,976 1,301 1,638

mg/L Patrn 1,25 2,5 5 7,5 10 12,5

Las muestras arrojan los siguientes resultados:


Absorbancia Media: 0.226 0.225 0.226 Media 0.114 0.114 0.113

Muestra 1 1 Lectura 2 Lectura Muestra 2 1 Lectura 2 Lectura

RESULTADOS Y CLCULOS Curva de calibracin, ecuacin y coeficiente de regresin:

Hierro total en vinos


1.8 1.6 1.4 1.2 1 Absorbancia 0.8 0.6 0.4 0.2 0

y = 0.1293x + 0.0124 R = 0.9999

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Concentracin en mg/L

Pendiente: 01293. Ordenada en el origen: 00124; Coeficiente de correlacin: 09999.

Contenidos en hierro: Total: 165 ppm = 165 mg/L Frrico: 079 ppm =079 mg/L que representa el 4787% del hierro total. Comentario a los datos obtenidos en relacin con los datos de la bibliografa.

El valor de Fe total est dentro del rango permitido por la legislacin vigente. Los valores de hierro (II) consultados oscilan entre 090 y 178 ppm frente a las 085 ppm de la muestra analizada. La variacin observada en la muestra analizada puede ser debida, casi con toda seguridad, a la exposicin del envase al aire que ha oxidado el hierro (II) a hierro (III) y ha aumentado, en consecuencia la proporcin de ste. El valor de la absortividad () es el valor de la pendiente de la recta. Convirtiendo las concentraciones a moles/L, obtenemos un de 71777 L. mol-1. cm-1 Lmite de Deteccin Desviacin estndar 257.10-3. L.D. =771.10-3/01293 = 00596 mg/L = 1067.10-7 mol/L

EJERCICIOS: Por qu una muestra de vino se trata con perxido de hidrgeno y la otra no? Para oxidar todo el hierro de la muestra y que se combine en ese estado oxidado con el tiocianato. De esta forma se calcula la totalidad del hierro existente. En la otra muestra, si no se trata con agua destilada, slo se detectarn los iones Fe3+ presentes. Por qu la disolucin patrn comercial de hierro est preparada en medio cido? Porque el cido impide la hidrlisis del hierro (III). Por qu se preparan dos blancos diferentes? Qu significado tiene la medida de la absorbancia de cada uno de ellos? Porque las condiciones analticas para el hierro total y frrico en cuanto a reactivos son diferentes y, por tanto, los blancos han de ser diferentes, puesto que e llos son los que fijan el punto 0 de absorbancia en la determinacin analtica de que se trate. Qu problemas podran presentarse si la longitud de onda seleccionada para realizar las medidas no es la correcta? A nivel de lectura podran presentarse valores negativos de la absorbancia o no aparecer las medidas. Adems, al establecer la ley de Lambert-Beer una proporcionalidad directa entre la absorbancia y la concentracin, valores errneos de absorbancia por seleccin equivocada de la longitud de onda, implican valores errados de concentracin puesto que la longitud de onda que indique el mtodo se corresponde con la mxima absorcin. Antes de poder medir en el espectrofotmetro es necesario ajustarlo. Explicar el proceso de ajuste. En primer lugar, se conecta el espectrofotmetro y se selecciona la longitud de onda adecuada. Se pone la cubeta con el blanco en la celda y se ajusta al 0 de Absorbancia o 100% de Transmitancia. Posteriormente, se pueden comenzar las lecturas de las muestras o de los patrones, si fuese necesario elaborar la recta de calibrado previamente.