ELABORACIÓN DE PLACAS DE CARIOGRAMA A PARTIR DE

LINFOCITOS HUMANOS Utilizando pipeta Pasteur estéril,

Llevar a la incubadora a eliminar el sobrenadante, dejando
37 °C durante 3 horas 0,3 a 0,5 ml del mismo sobre el
3 horas antes de finalizar el ciclo de botón.
incubación del cultivo celular de linfocitos
(48 o 72 horas), agregar a cada tubo 100µl de
Colcemide a concentración de 10ug/ml
(Realizar este procedimiento en la cámara de
flujo laminar).
Centrifugar el cultivo a 800
rpm por 6 minutos

Resuspender el botón con el vórtex, y agregar

Agregar 5 ml de KCI 0,075M,
Metanol - Ácido acético (3:1) 1 ml por vez, hasta
resuspender el botón utilizado el
llegar al total de 5 ml para fijar las células,
agitando simultáneamente con el vórtex. vórtex

Centrifugar a 800 rpm por 12 minutos,

eliminar el sobrenadante dejando
aproximadamente 0,3 ml del mismo sobre
el botón. Dejar reposar el cultivo 6 minutos a 37°C.

Cubrir las muestras de forma permanente

Al día siguiente centrifugar a 800 con cubre objetos, utilizando Entellan
rpm por 6 minutos y lavar con el
diluido en Xilol, como adhesivo.
fijador (se recomienda hacer este
procedimiento un par de veces
más, hasta que la muestra esté
clara).
Gotear la muestra en
Teñir con Giemsa al 4% en tampón fosfato
portaobjetos
pH 6,8 (buffer Sörensen), durante 15-20
previamente limpios y
minutos, dejando secar por 1 día más.
rotulados. Dejar secar las placas por 24 horas.
Observar al microscopio