Espectroscopía de fluorescencia.

La absorción de radiación UV-Vis por una

molécula conlleva a la formación de un estado
electrónico excitado. Al disponer de moléculas
de una energía extra, las moléculas excitadas
vuelven rápidamente al estado fundamental
perdiendo la energía de excitación, por lo que
los estados electrónicos excitados suelen tener
tiempos de vida muy cortos. Hay dos tipos de
procesos de desactivación, los procesos
radiativos (la energía de excitación es
reconvertida en emisión de luz) y los procesos
no radiativos (la energía se disipa en forma de
calor).
El estado fundamental de la mayoría de los
sistemas moleculares es un estado singlete S0,
por lo que la absorción de luz conlleva a estados
singletes excitados S1, S2,…etc. La emisión de
un fotón desde el estado S1 al estado
fundamental S0 se llama Fluorescencia y está
caracterizada por una constante de velocidad k f. La emisión de luz debida a una
transición entre niveles de distinta multiplicidad (por ejemplo, del estado triplete T 1 al
estado fundamental S0) se denomina Fosforescencia, con una constante de velocidad kp.
Puesto que transiciones entre niveles de distinta multiplicidad están prohibidas, la
intensidad de fosforescencia es en general mucho menor que la de fluorescencia, siendo
muy difícil de observar a temperatura ambiente, y en el tiempo de vida fosforescente
(microsegundos a segundos) es siempre muy superior al de fluorescencia
(nanosegundos). La emisión fosforescente siempre está situada a menores energías que
la fluorescente ya que T1 es menos energético que S1.
Una molécula excitada en S1 también puede sufrir un proceso de desactivación no
radiativo al estado fundamental S0, proceso llamado conversión interna (constante de
velocidad kci). Por otra parte, la molécula en S1 puede pasar también a un estado triplete
de menor energía T1 mediante un proceso no radiativo de cruce entre sistema (constante
de velocidad kcis). Fluorescencia, conversión interna a S0 y cruce entre sistema a T1 son
todo procesos de desactivación de S1 que compiten entre sí, y el hecho de observar uno
u otro dependerá de las velocidades relativas de los diferentes procesos. Así, una
molécula altamente fluorescente se caracterizará por que k f predomina sobre kp y kcis.
Además de estos procesos unimoleculares de desactivación, una molécula en el estado
excitado S1 puede ser desactivada por la presencia de una segunda molécula mediante
un proceso bimolecular. El desactivador es capaz de aceptar y/o disipar la energía de
excitación de la molécula original mediante diversos mecanismos tales como colisiones,
transferencias de energía o formación de complejos. Este proceso extra de desactivación
compite con los procesos anteriores y una consecuencia directa del proceso es la pérdida
de la intensidad de emisión por la presencia del desactivador.