UNIVERSIDAD

NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO

CURSO
“ANALISIS METALÚRGICO
INSTRUMENTAL”

TEMA
“Espectrometría de luminiscencia
molecular, absorción en el infrarrojo,
espectroscopia Raman”
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Espectrometría molecular por luminiscencia
PUNO

Las moléculas del analito se excitan para generar una

especie cuyo espectro de emisión suministra
información para el análisis cualitativo y cuantitativo.
Los métodos se conocen en conjunto como
procedimientos luminiscentes moleculares.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Espectrometría molecular por luminiscencia
PUNO

La fluorescencia y la fosforescencia se parecen en que la

excitación se consigue mediante la absorción de fotones.
Como consecuencia, se alude a menudo a los dos
fenómenos con el término más general de
fotoluminiscencia las transiciones energéticas electrónicas
que causan la fluorescencia no cambian el espín del
electrón. Por esta razón, los estados excitados en los que
hay fluorescencia presentan vida corta (<10—5 s). En
cambio, las emisiones de fosforescencia están
acompañadas por un cambio en el espín del electrón, y los
tiempos de vida de los estados excitados son mucho más
largos, con frecuencia del orden de segundos o hasta de
minutos.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL Espectrometría molecular por
ALTIPLANO
PUNO
luminiscencia

La medición de la intensidad de la fotoluminiscencia o

de la quimioluminiscencia facilita la determinación
cuantitativa de un conjunto de especies inorgánicas y
orgánicas importantes cuando están presentes en
cantidades de trazas. En la actualidad, el número de
métodos fluorométricos es mucho más grande que la
cantidad de aplicaciones de los procedimientos
fosforescentes y quimioluminiscentes.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
TEORÍA DE LA FLUORESCENCIA Y LA FOSFORESCENCIA
PUNO

La fluorescencia tiene lugar en sistemas químicos gaseosos,

líquidos y sólidos, tanto sencillos como complejos. El tipo
más sencillo de fluorescencia es el que manifiestan los vapores
atómicos diluidos.
Ejemplo los electrones 3s de los átomos de sodio vaporizados
pueden ser excitados para pasar al estado 3p cuando absorben
radiación de longitudes de onda de 589.6 y 589.0 nm. Después
de 10—8 s, los electrones vuelven al estado fundamental
emitiendo radiación de estas dos mismas longitudes de onda
en todas las direcciones. Este tipo de fluorescencia, en la cual
la radiación absorbida se vuelve a emitir sin cambio de
frecuencia, se conoce como radiación de resonancia o
fluorescencia de resonancia.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
Estados excitados que producen fluorescencia y fosforescencia
PUNO

Espín del electrón

El principio de exclusión de Pauli establece que no puede haber
dos electrones en un átomo cuyos cuatro números cuánticos
sean iguales. Esta restricción requiere que no haya más de dos
electrones en un orbital y, además, el espín de cada uno debe ser
opuesto al del otro.
Debido al emparejamiento de los espines, la mayoría de las
moléculas no presenta un campo magnético neto, por eso se
dice que son diamagnéticas, es decir, no son atraídas ni
repelidas por campos magnéticos estáticos. Por el contrario, los
radicales libres, que contienen electrones desemparejados,
poseen un momento magnético y, por consiguiente, los atrae un
campo magnético. Por eso se dice que los radicales libres son
paramagnéticos.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO

Estados excitados sencillo/triple

Un estado electrónico de una molécula en el cual todos los
espines de los electrones están emparejados se llama
estado sencillo y cuando la molécula se expone a un
campo magnético no se produce una división de niveles
energéticos.
El estado fundamental de un radical libre es un estado
doble, porque hay dos orientaciones posibles que puede
tomar el electrón impar en un campo magnético, lo cual
proporciona ligeras diferencias de energía al sistema.
Cuando uno de un par de electrones de una molécula es
excitado y pasa a un nivel de energía superior, se forma un
estado sencillo o triple.
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Velocidades de absorción y de emisión
PUNO

La velocidad a la cual se absorbe un fotón de radiación

es enorme, y su valor es del orden de 10—14 a 10—15 s.
Por otro lado, la emisión fluorescente tiene lugar a una
velocidad significativamente más baja. Por lo regular, la
fluorescencia se presenta en 10—5 a 10—10 s.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Procesos de desactivación
PUNO

Una molécula excitada puede volver a su estado fundamental

mediante una combinación de varias etapas mecánicas. Como
lo muestran las flechas verticales rectas con punta hacia abajo
de la figura 15.2, dos de estas etapas, fluorescencia y
fosforescencia, requieren la emisión de un fotón de radiación.
Las otras etapas de desactivación, indicadas por flechas
onduladas, son procesos no radiantes. El camino más propicio
hacia el estado fundamental es aquel que reduce al mínimo
el tiempo de vida del estado excitado. Por consiguiente, si la
desactivación por fluorescencia es más rápida que los procesos
no radiantes, se observa tal emisión. En cambio, si una
trayectoria no radiante tiene una constante de velocidad más
favorable, no hay fluorescencia o es menos intensa.
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Relajación vibracional
PUNO

Como se muestra en la figura 15.2, una molécula puede ser

promovida para llegar a cualquiera de los diversos niveles
vibracionales durante el proceso de excitación electrónico. Las
colisiones entre moléculas de las especies excitadas y las del
solvente ocasionan una transferencia de energía rápida y un
incremento minúsculo de la temperatura del solvente. La
relajación vibracional es tan eficaz que el tiempo de vida
medio de una molécula excitada en forma vibracional es 10—
12 s o menos, un periodo significativamente más corto que el
tiempo de vida medio de un estado excitado con medios
electrónicos. Como consecuencia, la fluorescencia de una
solución siempre involucra una transición desde el nivel
vibracional más bajo de un estado electrónico excitado.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Conversión externa
PUNO

La desactivación de un estado electrónico excitado puede

comprender la interacción y la transferencia de energía entre
la molécula excitada y el solvente u otros solutos. Estos
procesos se llaman conversión externa. Entre la evidencia de
la conversión externa se encuentra el marcado efecto que
ejerce el solvente en la intensidad de la fluorescencia de la
mayor parte de las especies. Además, aquellas condiciones
que tienden a reducir la cantidad de colisiones entre
partículas (baja temperatura y elevada viscosidad) tienden
por lo general a aumentar la fluorescencia. Los detalles de
los procesos de conversión externa se desconocen aún.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Cruce entre sistemas
PUNO

El cruce entre sistemas es un proceso en el cual hay un

cruce entre estados electrónicos de multiplicidad distinta. El
proceso más común es del estado sencillo al estado triple
(S1 S T1) como se muestra en la figura 15.2. Como con la
conversión interna, la probabilidad del cruce entre sistemas
aumenta si los niveles vibracionales de los dos estados se
superponen. Observe que en el cruce sencillo-triple que se
muestra en la figura 15.2 el nivel vibracional sencillo más
bajo se superpone a uno de los niveles vibracionales triples
más elevados, por lo que es más probable un cambio de
espín.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
Fosforescencia
PUNO

La desactivación de estados electrónicos excitados

también puede ser causada por la fosforescencia. Después
del cruce entre sistemas para lograr un estado triple
excitado, la desactivación posterior puede tener lugar por
conversión interna o externa o por fosforescencia.
Una transición triple S sencilla es mucho menos probable
que una conversión sencilla-sencilla. La probabilidad de
la transición y el tiempo de vida del estado excitado son
inversamente proporcionales. Por tanto, el tiempo de vida
promedio de un estado triple excitado respecto a la
emisión es grande y varía desde 10—4 a 10 s o más. La
emisión causada por una transición de este tipo podría
persistir durante algún tiempo después de que la
irradiación se haya interrumpido.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Rendimiento cuántico
PUNO

El rendimiento cuántico o la eficacia cuántica de la

fluorescencia o la fosforescencia es simplemente la
relación entre la cantidad de moléculas que manifiestan
luminiscencia y el número total de moléculas excitadas.
En el caso de una molécula muy fluorescente como la
fluoresceína, la eficacia cuántica, en determinadas
condiciones, se aproxima a la unidad. Las especies
químicas que no presentan fluorescencia apreciable tienen
eficacias que se aproximan a cero.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Tipos de transiciones en fluorescencia
PUNO

Es importante resaltar que la fluorescencia rara vez es

consecuencia de la absorción de radiación ultravioleta de
longitud de onda menor a 250 nm, porque tal radiación es
suficientemente energética como para desactivar los estados
excitados por predisociación o disociación. Por ejemplo, una
radiación de 200 nm corresponde a alrededor de 140 kcal
/mol. La mayor parte de las moléculas tiene por lo menos
algunos enlaces que se pueden romper con energías de esta
magnitud. Por consiguiente, rara vez se observa fluorescencia
debida a transiciones s* S s. En cambio, este tipo de emisión
está confinada a los procesos menos energéticos p* S p y p* S
n.
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO Fluorescencia y estructura
PUNO

La mayoría de los hidrocarburos aromáticos no sustituidos son

fluorescentes en solución; la eficacia cuántica aumenta de
ordinario en relación con la cantidad de anillos y con su grado
de condensación. Los heterocíclicos sencillos, como la
piridina, el furano, el tiofeno y el pirrol,
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL INSTRUMENTOS PARA MEDIRFLUORESCENCIA Y
ALTIPLANO
PUNO FOSFORESCENCIA
En la figura 15.8 se muestra una configuración característica de
estos componentes en los fluorómetros y los espectrofluorómetros.
Casi todos los instrumentos para la medición de la fluorescencia
utilizan equipo óptico de doble haz, tal como se muestra, para
compensar las fluctuaciones en la potencia radiante. El haz de la
muestra superior pasa primero a través de un selector de longitud de
onda de excitación (filtro o monocromador), que transmite la
radiación que causa la fluorescencia pero excluye o limita la
radiación de la longitud de onda de emisión de fluorescencia. La
fluorescencia se propaga desde la muestra en todas las direcciones,
pero lo más conveniente es observar la que forma un ángulo recto
con el haz de excitación. La geometría de ángulo recto reduce al
mínimo las contribuciones de la dispersión y de la radiación intensa
de la fuente. La radiación emitida atraviesa un selector de longitud
de
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO
 UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
Componentes de los fluorómetros y de los
ALTIPLANO espectrofluorómetros
PUNO

Fuentes
Como se muestra, la magnitud de la señal de salida en las
mediciones de luminiscencia y, por tanto, en la
sensibilidad, es directamente proporcional a la potencia
de la fuente radiante P0. Por esta razón, se usan fuentes
más intensas en los métodos luminiscentes, y ya no las
lámparas de tungsteno o deuterio que se emplean en las
mediciones de absorción.
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL Componentes de los fluorómetros y de los
ALTIPLANO
PUNO
espectrofluorómetros

Lámparas.
La lámpara más común para los fluorómetros de filtro
es la lámpara de vapor de mercurio a baja presión
equipada con una ventana de sílice fundida. Esta
fuente emite líneas útiles para producir la
fluorescencia a 254, 302, 313, 546, 578, 691 y 773
nm. Cada una de las líneas se puede aislar con filtros
de interferencia o absorción apropiados
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL Componentes de los fluorómetros y de los
ALTIPLANO
PUNO espectrofluorómetros

Rayos láser.
Fuentes de excitación para medir la fotoluminiscencia.
Son de particular interés los rayos láser sintonizables y
de colorante que utilizan como sistema de bombeo un
rayo láser de nitrógeno pulsante o un láser de Nd-
YAG. Los rayos láser de longitud de onda fija también
se usan, sobre todo en los detectores para
cromatografía y electroforesis.
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL Componentes de los fluorómetrosy de los
ALTIPLANO
PUNO espectrofluorómetros

Filtros y monocromadores.
Los filtros de interferencia y de absorción se utilizan
en los fluorómetros para seleccionar la longitud de
onda tanto del haz de excitación como de la radiación
fluorescente resultante. Los espectrofluorómetros están
equipados con al menos uno y a veces dos
monocromadores de red.
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL Componentes de los fluorómetros y de los
ALTIPLANO
PUNO espectrofluorómetros

Transductores
Las señales de emisión de luminiscencia son de baja
intensidad. Por tanto, se requieren transductores
sensibles. Los tubos fotomultiplicadores son los
transductores que más se utilizan en instrumentos de
fluorescencia sensibles. Con frecuencia funcionan en
la modalidad de recuento de fotones para mejorar la
relación señal-ruido; con este mismo fin, a veces los
transductores se refrigeran. En la espectrofluorometría.
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL Componentes de los fluorómetros y de los
ALTIPLANO
PUNO espectrofluorómetros

Celdas y compartimientos para las celdas

Para mediciones de fluorescencia se utilizan celdas o
cubetas tanto cilíndricas como rectangulares,
fabricadas con vidrio o con sílice. Se debe tener
cuidado en el diseño del compartimiento de la celda
para reducir la cantidad de radiación dispersada que
llega hasta el detector.
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO
UNIVERSIDAD
NACIONAL DEL
ALTIPLANO
PUNO

GRACIAS