LA FLUORESCEINA Y

OTROS CIOLORANTES
VITALES.

Profesor: Jos Baeza Herrera.

T. M. Oftalmologa.
Hospital Naval Via del Mar.
2012.

Colorantes en Oftalmologa
Desde finales del siglo XIX e inicios del
siglo XX
Algunos colorantes como la Fluorescena y la
Rosa de Bengala han tenido un importante
papel en la oftalmologa clnica, en el
diagnstico y evaluacin de varias patologas
de la superficie ocular. Cada colorante tiene
una estructura qumica nica, y las diferentes
caractersticas que le permiten su
uso
preferencial en las diferentes patologas
oculares.
Veremos los colorantes ms usados en
Oftalmologa, ventajas y debilidades de cada
uno de ellos.

 Que es un Colorantes ?
Se definen como un compuestos
orgnicos que tienen grupos cromforos y
auxocromos unidos a anillos benceno. Los
grupos cromforos son portadores del color y
los grupos auxocromos son responsables de
las propiedades de tincin. Los colorantes se
clasifican, segn su origen:
en Naturales y Sintticos.
De los colorantes Naturales, el nico usado
como agente de tincin de conjuntiva y
crnea, es el Carmn (cido carmnico), el cual
se obtiene de las cochinillas secadas.
Los dems son Sintticos, la mayora
derivados del benceno. Segn el grupo
qumico del cual se derivan se clasifican en:

Compuestos Xantnicos:
-Fluorescena Sdica.
-Indocianina Verde.
- Rosa de Bengala.
- Fluorexon.
-Merbromn.
Compuestos oxacnicos:
- Azul bsico 6.
-Azul Cresyl brillante.
Compuestos Tiaznicos:
- Azul de Metileno.
-Azure II.
Colorantes azoicos
- Sudan 4.

El trmino colorante fue introducido en

1886 por EHRRLICH para referirse a
compuestos que tien bacterias, protozoos,
clulas o tejidos en su estado vivo.

FLUORESCENCIA :
Es la capacidad que tienen algunas
molculas de emitir luz mientras estn
siendo estimuladas de modo adecuado. No
confundir con fosforescencia que es la
emisin de luz con posterioridad a la
estimulacin, cuando sta ltima ha cesado.
Los
Fluorocromos
(colorantes
fluorescentes) al ser estimulados con fotones
de una determinada longitud de onda,
denominada de absorcin o excitacin,
emiten otro fotn de mayor longitud de onda,
es decir con menor energa. El Fluorocromo
prototipo es la Fluorescena que al ser
estimulada con luz azul (abs. mx. a 495
nm.) emite luz verde (emisin mxima a 520

Tanto la excitacin como la emisin no

son exactas a esa longitud de onda, aunque la
excitacin de la Fluorescena sea mxima a
495 nm, tambin es posible estimular con
470 o con 510 nm (menos eficazmente) , en
realidad la longitud de onda de excitacin es
una campana de Gauss (espectro de
absorcin). Siempre que se
hable
de
excitacin y emisin de un Fluorocromo
se entiende que se est hablando de los
valores mximos.

Las Fluorescencias mltiples son

posibles , ya que se puede combinar a la
vez 2 o 3 colorantes fluorocromos, siempre
que emitan diferentes longitudes de onda y
nuestro angiografo sea capaz de excitarlos a
la vez y discriminar los fotones emitidos por
ellos.

Fue sintetizada
en 1871 Sdica.
por ADOLF VON
Fluorescena
BAERYER, quien inmediatamente identific sus
propiedades fluorescentes. En 1882 PFLUGER
us la F en la valoracin de la integridad del
epitelio corneal. Hacia 1920 SEIDEL describi
su test para valoracin del humor acuoso, y en
1957 GOLDMAN public su tcnica clsica de
tonometra.
La
fluorescena
es
una
dihidroxipiroxantina
con
propiedades
fluoroqumicas, exhibiendo F . La luz azul
(longitud de onda de 495 nm) excita la
molcula y mueve los electrones ms externos
a una rbita ms alta. Despus de 10 9
segundos, los electrones retornan a su estado
basal, emitiendo energa como fotones a 520

Fluorocromos

Espectro de absorcin y emisin

de la fluorescena.

Camino recorrido por la luz de excitacin (azul) y la luz

emitida por el objeto fluorescente (verde oscuro). El espejo
dicroico refleja la longitud de onda de excitacin y deja pasar la
de emisin. La luz emitida, tras pasar por el filtro, solo abarca
un rango estrecho de longitud de onda (verde intenso).

La longitud de onda de excitacin y

emisin vara con diversos factores. A
altas concentraciones la F
forma
dmeros
que
absorben
su propia
emisin, y
a
bajas
concentraciones
disminuye
la
dimerizacin
aumentando
la Fluorescencia
transmitida. Otro factor es el pH, Cuando
este es menor de 2, la F . est en su
forma catinica y fluoresce dbilmente;
mientras que en la forma aninica (pH
> 5) Aparece
fluorescencia
amarilloverde.

La
FLUORESCEINA es una sustancia
relativamente
inerte.
Despus
de
su
aplicacin tpica, el alto contenido Lipdico
de las clulas epiteliales cornales previene su
toma, por ser una molcula hidrosoluble, pero
en reas de prdida epitelial pasa fcilmente al
estroma, donde difunde rpidamente.

Despus de la inyeccin intravenosa,

se une en un 80 a 90 % a protenas
plasmticas. La concentracin disminuye
rpidamente debido a la fuga a travs del
endotelio capilar al espacio extravascular,
excepto en los rganos donde existen barreras
compartimentales, como Cerebro y Retina.
Es metabolizada a nivel heptico,
produciendo
otros
productos
de
baja
fluorescencia. Se excreta completamente en
24 a 48 horas, por va renal.

Las presentaciones farmacuticas

incluyen Preparaciones tpicas acuosas al
0.25 o 2 %, tiras y frasco ampolla al 5, 10 o
25 %. La presentaciones tpicas acuosas
son
altamente
susceptibles
a
contaminacin bacteriana,
especialmente
con Pseudomona.
El pico de fluorescencia mxima se
obtiene a pH 7.4 siendo muy similar al
pH normal de la sangre.

La F tiene mltiples usos:

Ayuda en el diagnstico y la evaluacin de
alteraciones conjuntivales y corneales, ya que
tie los defectos epiteliales, e irregularidades
de la cornea.
En la adaptacin de lentes de contacto
rgidos se utiliza al 0.25 %, para visualizar el
patrn de
adaptacin y el movimiento del
lente. Con lentes
blandos no se debe usar,
ya que por ser
hidroflicos, son teidos por
esta.

Dendrita.

visual de las miras de aplanacin, y

precisin
en la toma de la presin intraocular. Las
tomas
de presin sin F muestra lecturas de 5.62 a
7.01
mmHg. ms bajo.
SEIDEL, describi el uso de F al 2 % para
valoracin de fugas de humor acuoso. En
este test debido a un efecto dilucional,
se
observa un viraje en la F en el sitio de fuga
del
humor acuoso.
Otros
usos, incluyen la valoracin del
tiempo de
ruptura de la pelcula lagrimal (Break Up

TONOMETRIA.

OBSERVACION POLO ANTERIOR.

 La aplicacin intravenosa de 500 mg F

(para un adulto, 6 - 7 mg/kg de
peso) permite
la realizacin de
angiografa del segmento
anterior
( iris ) o del polo posterior
( retina ).

Fluorescena en cpsulas 500 mg,

Contiene:

Fluorescena sdica 50 grs.

Lactosa 11,2 grs.
Cpsulas rojas N 00.
Duracin 1 ao.
Utilizacin en casos de rechazo de
terapia endovenosa o examen difcil de
realizar.

Los efectos adversos de su aplicacin

tpica son mnimos (ardor, escozor). Con el
uso intravenoso. Se
han
reportado
mltiples
reacciones, desde leves hasta
severas. La frecuencia de reacciones leves
es un 5-15 %
e incluye nuseas,
vmito, extravasacin con dolor local,
prurito, flebitis, granuloma
subcutneo.
Los efectos moderados como la urticaria y
sncope son menos frecuentes. En 1:2000
pacientes ocurren reacciones severas como
edema larngeo, edema pulmonar, shock
anafilctico, e incluso la muerte
(1: 225.000 pacientes).
.

La causa exacta de la toxicidad no se

conoce,
pero puede ser debida a una
reaccin de hipersensibilidad tipo I, en la cual
la F acta como hapteno que se une a la IgE,
y produce la degranulacin de mastocitos con
liberacin de histamina y enzimas como
proteasas. Otros atribuyen
a un efecto
vasoespstico como causante de los efectos
adversos.

Fluorexon.
Es un derivado de la F , cuya composicin
es carboxi metil amino etil fluorescena. Tiene
unas
caractersticas
farmacolgicas
y
propiedades de tincin muy similares a la F
, excepto su peso molecular ms alto (710),
y la posibilidad de usarse en adaptacin de
lentes de contacto blandos e hbridos (con
contenido acuoso > 60 %) ya que no produce
tincin de estos.

Rosa de Bengala.
En 1914 ROMER reporta el uso de Rosa de
Bengala, como tratamiento de infeccin
neumoccica. En 1933 se populariza su uso
cuando SJOGREN describe el patrn clsico en
queratoconjuntivitis Sicca. Es un derivado
tetracloro tetraiodo de fluorescena foto
reactivo, que al ser estimulado con luz de
longitud de onda de 550 nm genera radicales
libres de oxgeno, que pueden inactivar enzimas
y producir dao en el DNA y membranas
celulares.

Clsicamente se ha descrito la
propiedad de la Rosa de Bengala para
producir tincin de clulas muertas o
degeneradas y moco, recientemente se ha
demostrado que tambin produce tincin de
clulas epiteliales
vivas, y toxicidad
celular con prdida de la motilidad y
muerte.
Se ha demostrado tambin efecto
antiviral por inhibicin de replicacin viral y
reduccin en ttulos virales.

Los usos principales incluyen la

valoracin
de
lesiones
corneales
y
conjuntivales (ulceras, abrasiones, cuerpos
extraos, dendritas, displasia, metaplasia) y
el diagnstico y valoracin de la severidad
del ojo seco, tiene una sensibilidad y
especificidad altas (93%) para el diagnstico
del ojo seco, que puede aumentarse al
combinar con otras pruebas.

El azul de metileno es una anilina azul con

un pico de absorcin de 660 nm, con
propiedades de tincin similares a la Rosa de
Bengala para teir clulas desvitalizadas,
moco, y adems nervios. Tienen un efecto
bacteriosttico. Con la aplicacin tpica de la
solucin al 0.5 % de azul de metileno (3
aplicaciones cada 5 minutos) se obtiene tincin
de efectos epiteliales (en lceras, erosiones,
queratitis),
del
tejido
subepitelial
(en
flictnulas, pingueculitis), y del tejido nervioso.
Tambin se ha usado intraquirrgicamente
en dacriocistorrinostoma para la tincin e
identificacin del saco lagrimal, y adems en
ciruga de catarata con aplicacin intracameral

Lisamina Verde :
La Lisamina verde es un colorante cido
sinttico, Ampliamente
utilizado
en la
industria de las comidas.
Su peso
molecular es de 576.6 kd. Tiene propiedades
similares a la Rosa de Bengala para teir
clulas degeneradas- muertas y moco, pero a
diferencia de esta, no tie ni afecta la
viabilidad de clulas epiteliales cornales
vivas. e ha usado para la valoracin de
alteraciones
epiteliales
conjuntivales
y
cornales.

Indocianina Verde :
En 1957 Fox introdujo el uso de la
Indocianina Verde en la medicina, hacia 1970
Orth inici su uso para la realizacin de
Angiografa
Retiniana,
sin
embargo
tcnicamente no era lo suficientemente
sensible para delinear vasos Coroideos ms
pequeos, por lo cual, slo hasta 1984 el
desarrollo de tecnologa de video, filtros
apropiados y sistemas de registro infrarrojo
permitieron la realizacin de angiogramas
coroideos con alta resolucin.

La molcula es una anhidro tetra metil

dibenzo tricarbocianina, con pico de absorcin
mximo de 770 780 nm, y cuyo pico de
emisin de fluorescencia es de 835 nm.
Farmacolgicamente es una sustancia inerte.
Despus de su administracin intravenosa, el
100 % se une a protenas sricas, por lo cual
no existe fuga desde el compartimento
intravascular cuando los sistemas de barrera
estn intactos.

Tiene eliminacin heptica, siendo

excretada el 97 % de la molcula intacta en
la bilis. A diferencia de la F , la Indocianina
verde no se bloquea por el pigmento, sangre
o lpidos, debido a su espectro de emisin
mayor. Por esto es una ayuda til en el
diagnstico
de
lesiones
coroideas
y
coroidoretinianas.

El mayor uso de la Indocianina

verde es la realizacin de la Angiografa de
coroides. La presentacin en polvo se diluye
en
agua
estril,
alcanzando
una
concentracin de 50 mg/ml. La dosis
utilizada es de 2 mg / k de peso
intravenoso
(generalmente
en
vena
antecubital). La Indocianina puede utilizarse
sola, o complementarse con el estudio con F ,
para el estudio de enfermedades retinianas y
coroideas.

Es
muy
til
en
el
estudio
de
anormalidades
coroideas
(congnitas,
isqumicas, inflamatorias, degenerativas), e
identificacin de MNV coroideas. Las MNV.
coroideas clasificadas como ocultas en la
angiografa fluorescenica, un 39 a 78 %
han sido reclasificadas como clsicas con la
videoangiografa con indocianina verde, y han
permitido realizar un tratamiento ms eficaz.
Se ha utilizado para tincin capsular en
ciruga de catarata con buenos resultados.
En catarata traumtica ha mostrado gran
habilidad para tincin capsular, contrastando
con el material cortical expuesto, el cual no
tie.

En catarata avanzada es una gran

ayuda para la realizacin de la capsulorrexis
curvilnea anterior continua, ya que se logra
una buena tincin capsular, superior a la
alcanzada con el Azul de Trypan. Una
limitante para su uso es su alto costo.
Es en general muy bien tolerada, no se
han visto efectos txicos significativos, los
efectos ms frecuentes (0.15 %) son
nusea, vmito, extravasacin y prurito.
Otras reacciones mucho menos frecuentes
(0.05
%)
son
broncoespasmo,
laringoespasmo,
shock
anafilctico
y
convulsiones. No se han reportado muertes
con su uso.

Producto USA CARDIOGREEN. pero

la Indocianina de USA presenta Yodo en
su composicin.
Producto Frances INFRACYANINE. El
producto viene liofilizado. La solucin
hay que usar dentro de las 12 horas
siguientes a su preparacin.

Fin.