1º laboratorio

VETERINARIA
2º Semestre / 2022

TITULACIÓN DEL
AMINO ÁCIDO
GLICINA

Profesor Responsable: Eduardo Gutiérrez Da’Forno

En este laboratorio vamos a montar un experimento para titular el Aminoácido Glicina.
Esto ya se vio en cátedra, por lo tanto Uds. tienen los conocimientos necesarios y cuentan
con el marco teórico.
Lo que haremos es simplemente comprobarlo en forma experimental.

¿Qué deben saber antes de comenzar?

Antes de llevar a cabo el trabajo experimental, deben estar muy claros los siguientes
conceptos analizados en cátedra:

 Ácidos y bases débiles

 pH
 PKa
 PI
 Estructura de un Aminoácido
 Disociación de grupos carboxilos y aminos
 Sistemas Buffers

Intenta responder estas preguntas:

1.- ¿Qué significa que un AA tenga capacidad ácido-base?

2.- ¿Qué es una curva de titulación?
3.- ¿Qué es lo que se representa en ella?
4.- ¿Qué equipamiento necesito para llevar a cabo este experimento?
5.- ¿Qué reactivos y soluciones necesito?
6.- ¿Cómo van a representar el resultado?
¿A través de una gráfica? ¿Cuál?
7.- ¿Se comporta la Glicina como buffer?
¿Cómo puedo comprobar esto experimentalmente?
8.- ¿Cómo es la distribución de cargas de este AA a diferentes pHs?
 Materiales, Reactivos y Soluciones

 Bureta
 Pedestal
 Nueces para sujetar la bureta al pedestal
 embudo
 Vaso pp de 250ml ( para la Gly)
 Probeta paa medir los 100ml de Gly
 Pipetas automáticas de P1000 y P5000 + los correspondientes tips
 Phchimetro
 Vaso pp de 500ml para lavados del electrodo
 Bureta con agua destilada.
 Agitador magnético + magneto
 Glicina ( Gly) 0,1M
 NaOH 0.3M
 Indicador Rojo Fenol
 HCl concentrado
 Piseta con agua destilada
 Botella de 5lt con agua destilada
 Toalla nova
 Cinta adhesiva
 Papel milimetrado

NOTA: para este laboratorio es importante que traigan:

Lápices de colores. Lápiz grafito, goma de borrar, una regla
 Montaje Experimental

1.- Montar sobre el pedestal la bureta. Debe quedar vertical.

2.-Cerrar la llave de paso de la bureta y agregar con embudo y con mucho cuidado
NAOH hasta enrazar a 0 ml
cuidado con derramar el NaOH

3.-Al vaso pp de 250ml agregar 100ml de Gly 0,1M y medirle el pH

Debería estar alrededor de su PI o sea 6,0

5.-Colocar el vaso pp con la Gly en el agitador, colocar el electrodo dentro

de la solución de tal modo que no toque el fondo del vaso y que quede apoyado en el
borde de éste( para ello utilizar la cinta adhesiva)

6.-Colocar el magneto dentro de la solución de Gly y encender el agitador

La agitación debe ser constante, pero moderada. Se debe tener cuidado
de que el magneto no pase a llevar el electrodo.

7.-El extremo de la bureta debe quedar exactamente sobre el vaso pp que contiene la Gly

8.-Antes de comenzar la titulación debemos bajar el pH de la solución de Gly

a un pH inferior al 1º pKa que corresponde al del grupo carboxilo.
Para ello se le agrega a la solución 1 ml de HCL concentrado con agitación.
Se esperan 30´ y se lee el pH
Proteína queda protonada
9.- Se le agrega a la solución el indicador Rojo Fenol: 3ml . La solución se vuelve
amarilla. ¿Por qué? Indica que la solución esta acida, y que el aminoácido esta
protonado.
 Titulación
Antes de comenzar cada grupo deberán preparar una tabla donde registrará las variables:
volumen de NaOH agregado vs pH observado.

- Agrega 5 ml de la Ureta, ph de 1,8.

- Se agregan otros 5 ml y queda ph de 1.9
- agregó otros 5 ml y quedo ph 2 ,
- se agregan 5 ml mas y queda 2,3 de ph (pk1)
- Agrega 3 ml mas y queda 2,5 de ph
- Agrega 4ml y queda 2,7 de ph
- Agregó 3 ml y queda 2,9
- Agregó 3 ml (cambia brevemente de color rojo) y queda en 3,2 de ph
- Agrega hidróxido de sodio (0,5ml) y ph de 3,3
- Agrega otro 0,5 ml y sube ph a 3,4
- Agrega otros 0,5 ml y queda en 3,5
- Agrega otros 0,5 y sube a 3,6 ml
- Agrega otros 0,5 ml y quedan en 3,7 ph
- Otro0,5  3,8 ph
- Otros 0,5  4 ph
- Agrega 0,2  4,2 ph
- Agrega 0,2  4,4 ph
- Agrega 0,2  4,8 ph
- Agrega 0,2  5,3 ph
- Agrega 0,2  5,8 ph
- 0,2 ml  (se coloca roja) 6,2 ph
- 0,2 ml  6,5 ph
- 0,2 ml  6,8 ph
- 0,2 ml  7,4 ph
- 0,2 ml  7,7 ph
- 0,4 ml  8 ph
- 0,5 ml 8,3 ph
- 2 ml  8,8
- 2 ml  9 ph
- 4 ml  9,4 ph(avanza lento por que se acerca al pk2 (efecto buffer)
- 4 ml  9,6 ph
- 4 ml  9,8 ph
- 5 ml  10 ph
- 5 ml  10,2
- 5 ml  10,4
- 5 ml  10,6
- 5 ml  10,9
- 5ml  11,3
- 5ml  11,8
- 5ml  12,1
- 5ml  12,3
- 5ml  12,4
La titulación comienza del momento que abrimos la llave de la bureta y comienza a
caer el NaOH sobre la solución de Gly.
Para ello es muy importante:

 Que la solución este siempre agitándose

 Que se registren los volúmenes de NaOH agregados.
 Que el volumen de NaOH agregado al inicio no sea superior
A los 5ml

 Que cada vez que se agregue un volumen de NaOH se debe cerrar la llave de
paso y registrar el PH hasta ese momento esperando unos
segundos a que el pH de la solución se estabilice antes de tomar el
valor de PH correspondiente.

CUIDADO!!
El pH aumenta muy lentamente en torno a los pKa (2,3 y 9,6) pero
después se dispara a medida que se aproxima al PI. Por lo tanto después
de pH 3,0 no se debe agregar el NaOH desde la bureta sino agregando
pequeños volúmenes de NAOH. Para ello se utiliza una pipeta
automática P1000.

La Función del indicador ( Rojo Fenol) es precisamente indicarnos con un cambio de

color a que pH aproximadamente se encuentra la solución, lo que debe corresponder
con lo que indica el pHchimetro.
Esta observación visual hace que el experimento de titulación sea mucho más atractivo y
fácil de seguir.

El indicador Rojo Fenol presenta las siguientes variaciones de color según el pH del
medio:

Amarillo entre pH 0- 6,4

Rojo violeta, zona de viraje de color, entre pH 6,8 y 8.2
Violeta, a un pH sobre 8,2
Violeta intenso a un pH muy alcalino (10-13)
 ATENCION!!
Si se acaba todo el NaOH
de la bureta deberá llenarla tal como se hizo al inicio.
MUCHO CUIDADO DE MANTENER LA LLAVE DE PASO CERRADA Y QUE POR NINGUN
MOTIVO VAYA A CAER NAOH EN LA SOLUCION DE GLY QUE ESTAN TITULANDO.

En caso de no volver a llenar la bureta se puede agregar el NaOH con una pipeta
automática ( P 5000 )

Representación gráfica de los resultados

Finalizada la Titulación deberán representar los resultados en un papel milimetrado:

pH vs ml de NaOH agregados.
En este gráfico además deberán indicar con colores los cambios del indicador.
Pero lo más importante que deben señalar en el gráfico es la distribución de cargas de
este aminoácido a los pH: 1,0 / 2,3 / 6,0 / 9,6 y 12.
Es decir dibujar en el gráfico el aminoácido Glicina con las cargas que tendría a los pH
indicados y los diferentes equilibrios.

Es precisamente en este punto donde deberán integrar lo aprendido en clases, con

el trabajo práctico que llevaron a cabo.