DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

ENZIMOLOGÍA

2° Parcial - Monografía: Métodos de purificación enzimática

CUESTIONARIOS

Docente: Rodrigo Ávalos

NRC: 7165

01 de Julio de 2022
Integrantes: Altamirano Pamela, Andrade Nicolas, Arequipa Ayrton

Cuestionario

1) Los métodos mecánicos se basan en:

a) uso de la fuerza y fricción de corte para deformar la célula hasta su ruptura

b) uso de la fuerza y reacciones químicas para deformar la célula hasta su ruptura

c) uso del peso molecular y reacciones químicas para deformar la célula hasta su ruptura

d) uso de inhibidores de ph para deformar la célula hasta su ruptura

2) El proceso de homogeneización debe realizarse a temperaturas _______ ya que

de este modo los orgánulos intracelulares permanecen ______

a) bajas; intactos

b) altos, intactos.

c) bajas; alterados

d) altos, alterados

3) Los métodos químicos se basan en:

a) Tratamientos de ruptura celular por agentes químicos como disolventes, detergentes,

etc

b) uso de la fuerza y fricción de corte para deformar la célula hasta su ruptura

c) uso del peso molecular y reacciones químicas para deformar la célula hasta su ruptura

d) uso de inhibidores de ph para deformar la célula hasta su ruptura

4) Cual de los siguientes enunciados sobre el isoelectroenfoque (método

electroforético) es el correcto:

a) Las diferentes enzimas se detendrán en la posición donde el pH es igual a su punto

isoeléctrico.

b) Las diferentes enzimas se detendrán en la posición donde el pH es menor a su punto

isoeléctrico.
c) Las diferentes enzimas se detendrán en la posición donde el pH es mayor a su punto

isoeléctrico.

d) Ninguna de las opciones es correcta.

5) Seleccione la respuesta correcta sobre la división de los métodos físicos sobre la

inmovilización enzimática

a) Encapsulación y reacciones de membrana

b) Unión a soportes e inclusión en membranas

c) Atrapamiento e inclusión en membranas

d) Unión a soportes y reticulado

Grupo No. 3

Integrantes: Ismael Calderón, Katheryne Campaña, Luis Carrera

Cuestionario

1) Las membranas del proceso de ultrafiltración se caracterizan por:

a) La precipitación por adición de sales neutras.

b) El peso molecular de los solutos a retener.

c) De acuerdo al flujo del solvente permeado.

d) Características eléctricas de las moléculas

2) ¿Cuál es el fundamento de la precipitación por punto isoeléctrico?

a) Ajuste de pH cercano o igual al punto isoeléctrico de la proteína.

b) Ajuste de pH menor al punto isoeléctrico de la proteína.

c) Adición de sales a la proteína.

d) La proteína está por debajo del punto isoeléctrico cuando su superficie está cargada

negativamente.

3) ¿Cuál es el principio de separación de la técnica de cromatografía de

intercambio de iones?

a) Hidrofobicidad

b) Tamiz molecular

c) Carga iónica

d) Constante de afinidad

4) ¿En qué consiste la diálisis en la purificación en base al tamaño molecular?

Es un proceso en el cual se separan las moléculas de acuerdo al tamaño de estas, esto

mediante el empleo de membranas semipermeables que contienen poros de tamaño

menor a las macromoléculas, en los cuales las moléculas pequeñas (disolventes, sales
 y metabolitos pequeños) se difunden a través de la membrana, a excepción de las

moléculas mayores.

5) ¿En qué consiste el método de ultrafiltración?

En este se separa proteínas en base al peso molecular y el tamaño utilizado en las

membranas hidrófilas de baja adsorción y una fuerza impulsora, este funcionamiento

no difiere de técnicas como la ósmosis inversa, microfiltración o nanofiltración, la

diferencia radica en el tamaño de las moléculas que retiene.

Integrantes: Mayorga Alejandra, Stefania Mendoza, Morales Daniela

Cuestionario.

1. ¿Qué parámetros se debe tomar en cuenta para utilizar el método de

ultrafiltración?

a) Tamaño del poro, velocidad del flujo y la presión ejercida.

b) Densidad del poro, presión ejercida y caudal.

c) Velocidad de flujo, tamaño del poro y tamaño del recipiente.

d) Densidad del poro, velocidad del flujo, caudal.

2. ¿Qué es la cromatografía?

a) Es un método químico de homogeneización que busca aumentar la velocidad de las

reacciones químicas

b) Es un método físico de homogeneización que busca disminuir la velocidad de las

reacciones químicas

c) Es un método físico de separación que consiste en separar los componentes de una

muestra

d) Ninguna es correcta

3. ¿Qué métodos NO intervienen en la cromatografía de columna?

a) Cromatografía de gases

b) cromatografía de fluidos supercríticos

c) cromatografía de papel

d) cromatografía en capa fina

4. Cuál es el detergente más usado para la electroforesis sds y por qué se usa con mayor

frecuencia?

a. EDTA
b. El detergente más usado en sds es el dodecil sulfato sódico y se lo usa debido a su

afinidad con varias proteínas.

c. MGDA

d. GLDA

● ¿Cuál es la ventaja de la purificación enzimática?

A) La purificación enzimática sirve para aislar un solo tipo de proteína, la

proteína de interés, de una mezcla compleja. La purificación de proteínas

permite su estudio de manera individual, para conocer su función

biológica.

B) Inhibe la actividad enzimatica y reduce la velocidad de la reacción

C) Aíslan compuestos proteicos, permite su estudio de manera generalizada

D) Aumenta la cantidad de enzima

Integrantes: Criollo Guilliana, Cuji Katy, Dasum Yharome

Cuestionario

Enliste las condiciones generales a evaluar para la purificación enzimática.

1. Calidad (% de pureza del producto de acuerdo a mis objetivos)

2. Cantidad técnicas de alta capacidad y de baja capacidad
3. Costos

Enumere 4 métodos de purificación enzimática que dependen de la carga.

1. Cromatografía por intercambio iónico.

2. Electroforesis
3. Electroforesis bidimensional en gel
4. Electroforesis SDS

¿Cuáles son los factores que afectan la solubilidad diferencial de una enzima?

Depende de la composición y distribución de los aminoácidos periféricos (los aminoácidos

hidrofóbicos tienden a encontrarse en el interior de la molécula y los aminoácidos hidrofílicos
en la superficie), la estructura tridimensional, temperatura, pH y fuerza iónica.

¿A qué se debe la precipitación de la proteína cuando se realiza la separación de una

enzima con sales?

La proteína debe presentar una solubilidad mayor al solvente en solución. La precipitación

por sales presenta a los grupos hidrófobos con un reordenamiento de las moléculas de agua
alrededor que proporciona un estado termodinámicamente inestable que lleva a la agregación
y precipitación de la proteína.

Indique tres técnicas de cromatografía que se pueden utilizar en la purificación

enzimática y detalle en qué consisten.

● Cromatografía por filtración: permite separar las proteínas en función de su tamaño.

● Cromatografía por intercambio iónico: se debe a una interacción entre cargas, donde
las proteínas que tienen carga positiva se adhieren a grupos funcionales con carga
negativa (carboxilatos y sulfatos) y las proteínas con carga negativa se unen a grupos
funcionales con carga positiva (aminas terciarias o cuaternarias).
● Cromatografía por afinidad: permite separar a las proteínas en función a la afinidad
por ligandos específicos.
Integrantes: Terán Paúl, Tejada Gabriela, Toapanta Luz

Cuestionario

1. Seleccione cuál de los siguientes métodos de purificación no se basa en el tamaño

de las moléculas.
a. Centrifugación
b. Diálisis
c. Ultrafiltración
d. Precipitación por salado.
2. La inmovilización enzimática es un proceso en el que se localiza a la enzima en
una región definida del espacio, para dar lugar a formas _______ que retienen su
actividad catalítica y que pueden ser reutilizadas repetidamente.
a. Solubles
b. Insolubles
c. Protonadas
d. Desprotonadas
3. ¿Por qué es tan complejo purificar enzimas?
Debido a la complejidad de los organismos y al elevado número de proteínas y otras
sustancias que un organismo o tejido puede contener.
4. Cuáles son los dos tipos de métodos de ultrafiltración en la purificación de
enzimas?
a. Microporos y difusión.
b. Espectroscopia y diálisis.
c. Homogeneización y difusión
d. Diálisis y difusión
5. ¿Cuál de los siguientes métodos corresponde a la inmovilización de enzimas?
a. Electroforesis
b. Centrifugación
c. Ultrafiltración
d. Microencapsulación
Integrantes: Genesis Baquedano, Fulton Barros, Mishel Cadena

Cuestionario

1. En la electroforesis, ¿cuál es la ventaja de trabajar con geles de poliacrilamida

frente a geles de agarosa?
a. El gel de poliacrilamida es más resistente
b. El gel de poliacrilamida aumenta la resolución de las bandas y su porosidad es
regulable
c. Es mejor el gel de agarosa por su porosidad
d. Trabajar con ambos geles da lo mismo
2. Complete: La diálisis es un proceso que utiliza gradientes de concentración en un
medio a través de membranas ________
a. impermeables
b. permeables
c. semipermeables
d. porosas
3. En forma general, ¿describa el proceso de la electroforesis?

El proceso de electroforesis consiste en una migración de proteínas, en este caso

enzimas, influenciadas por cargas que permite diferenciarlas por el tamaño y peso
molecular.

4. ¿Qué características debe tener el gel de la cromatografía de exclusión?

Debe ser inerte químicamente, los poros y partículas deben ser uniformes y debe tener
una considerable rigidez química.

5. ¿Método de purificación de enzimas que se realiza a través de membranas con

porosidad fina a manera de tamiz molecular?

a. Ultrafiltración por aspiración o presión

b. Centrifugación
c. Diálisis
d. Electroforesis
Integrantes: Gualotuña Jhon, Guevara Victoria, Marin Lesly

Cuestionario

1. Seleccione un método de purificación enzimático que depende del peso.

a. Cromatografía de afinidad

b. Cromatografía por zonas de velocidad

c. Electroforesis SDS

d. Fraccionamiento salino

2. De qué factores depende la centrifugación?

a. Longitud de la columna

b. Empaquetado del gel

c. Migración diferencial

d. a y b

3. Las membranas de ultrafiltración son caracterizadas por:

a. pH ácido

b. cantidad de Na+ en su estructura

c. peso molecular de corte de la membrana

d. Ninguna de las anteriores

4. En qué consiste la electroforesis?

Es el movimiento de partículas dispersas en relación con un fluido bajo la influencia

de un campo eléctrico espacialmente uniforme.

5. En qué consiste la ultrafiltración para purificación enzimatica?

El método se fundamenta en el paso del agua y otras pequeñas moléculas a

través de una membrana semipermeable, mediante la aplicación de fuerza, ya sea

por altas presiones o centrifugación.

Integrantes: Tonato Daniela, Vallejo Paula, Velasco José

Cuestionario

1) Las técnicas de separación con membranas son particularmente dirigidas a la

extracción o purificación parcial de:

a.- biomoléculas de bajo valor agregado solubles en agua

b.- biomoléculas de alto valor agregado solubles en agua
c.- biomoléculas de alto valor agregado insolubles en agua
d.- biomoléculas de bajo valor agregado insolubles en agua
2) Los detergentes actúan como sustancias ….., es decir, poseen afinidad por compuestos

……… y lipofílicos, es así que pueden facilitar el proceso de desestabilización de las

membranas celulares debido a los fosfolípidos que éstas posee.

a)solubles, hidrofílicos
b) anfipáticas, hidrofílicos
c)solubles, hidrofobicos
d) anfipáticas, hidrofobicos
3) Los detergentes pueden ser de tres tipos: ………… como las sales de tetra-alquil-
amonio, para un pH básico, ……….. como el SDS para un pH ácido y ………..
como el Tritón-X
a)cationicos, anionicos, no- iónicos
b) anionicos, cationicos, no - iónicos
c) catiónicos, anionicos, iónicos
d)iónicos, cationicos, anionicos
4) Electroforesis basado en un un detergente aniónico, que se une a todas las
proteínas en la misma proporción formando una especie de micela.
a) Electroforesis de zona
b) electroforesis SDS
c) electroforesis en gel poliacrilamida
d) electroforesis de frente movil

5) Cromatografía que separa las moléculas en base a su carga iónica neta

a) cromatografía de exclusión molecular
b) cromatografia de afinidad
c) cromatografía de intercambio iónico
d) cromatografía de interacción hidrofóbica
INTEGRANTES:Ordoñez Cintia,Piñarcaja Dayana, Ruiz Paola

1. ¿ En qué caso puede usarse el método de centrifugación como purificación de las

enzimas?

a. Cuando las moléculas poseen bajo peso molecular

b. Cuando la sedimentación es muy lenta.
c. Cuando la sedimentación es muy rápida.
d. Cuando las moléculas cargadas son de gran tamaño.

2. ¿Cuál es el principio básico de la cromatografía de intercambio iónico?

a. Las moléculas cargadas se adhieren a los intercambiadores de forma reversible

de modo que dichas moléculas pueden ser asociadas o disociadas cambiando el
ambiente iónico.
b. La separación de biomoléculas de acuerdo a su tamaño, cuando una solución
fluye a través de una cama empacada con un medio poroso.
c. Las proteínas se unen reversiblemente a ligandos hidrofóbicos que se
encuentran inmovilizados en el soporte cromatográfico, debido a la presencia
de una elevada concentración de sal.
d. Alteración de alguna propiedad del solvente original, el resultado es la
precipitación de la proteína.

3. ¿Cuál es una de las técnicas usualmente utilizadas cómo un paso de separación durante
las primeras etapas de un proceso de purificación?

a. Separación por precipitación

b. Diálisis
c. Ultrafiltración
d. Electroforesis

4. Complete: …………. su utilidad radica en la separación de moléculas de alto peso

molecular

a. Adsorción selectiva
b. Electroforesis en gel de agarosa
c. Cromatografía
d. Electroforesis de zona

5. Proceso que utiliza gradientes de concentración en un medio a través de membranas

semipermeables

a. Diálisis
b. Centrifugación
c. Cromatografía de interacción hidrofóbica
d. Isoeléctroenfoque