Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles

sindrómicos por PCR Multiplex

GUÍA DE PROCEDIMIENTO PARA DETECCIÓN DE

MICROORGANISMOS INFECCIOSOS MEDIANTE UN
SISTEMA DE PANELES SINDRÓMICOS POR PCR
MULTIPLEX

UNIDAD DE SOPORTE AL DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO

SUBUNIDAD DE SOPORTE AL DIAGNÓSTICO–PATOLOGÍA CLÍNICA

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Dra. Elizabeth Zulema Tomas

Sub Unidad de Soporte al  Unidad de Soporte al Gonzales de Palomino
Diagnóstico - Patología Diagnóstico y Tratamiento
Clínica  Unidad de Gestión de la Directora General del Instituto
Calidad Nacional de Salud del Niño - San
Borja
Firmado digitalmente por VELIZ
SILVA Emma Victoria FAU
20552196725 soft
Motivo: Doy V° B°
Fecha: 20.01.2022 15:45:19 -05:00

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 1 de 20

Firmado digitalmente por MENDEZ Firmado digitalmente por PORTELLA

CHACON RODRIGUEZ Carla MENDOZA Julio Eduardo FAU
Elizabeth FAU 20552196725 soft 20552196725 soft
Motivo: Soy el autor del documento Motivo: Soy el autor del documento
Fecha: 23.12.2021 12:15:15 -05:00 Fecha: 24.12.2021 09:52:52 -05:00
Firmado digitalmente por UGAS
CHARCAPE Carlos Federico FAU
20552196725 soft
Motivo: Doy V° B°
Fecha: 23.12.2021 14:19:19 -05:00
 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

GUÍA DE PROCEDIMIENTO PARA DETECCIÓN DE

MICROORGANISMOS INFECCIOSOS MEDIANTE UN SISTEMA DE
PANELES SINDRÓMICOS POR PCR MULTIPLEX

I. Título ............................................................................................................................................. 3
II. Finalidad ...................................................................................................................................... 3
III. Objetivos ...................................................................................................................................... 3
a. Objetivo General ....................................................................................................................... 3
b. Objetivos Especificos .............................................................................................................. 3
IV. Ámbito de aplicación............................................................................................................... 4
V. Nombre del Proceso o Procedimiento a Estandarizar y Código CPMS ................ 4
VI. Consideraciones Generales................................................................................................... 5
a. Definiciones Operativas ................................................................................................... 5
1. Definición del Procedimiento ................................................................................... 5
2. Aspectos Epidemiológicos importantes ............................................................... 7
3. Consentimiento Informado ..................................................................................... 10
b. Conceptos Básicos ............................................................................................................ 11
c. Requerimientos Básicos ................................................................................................. 11
VII. Consideraciones Específicas .............................................................................................. 12
a. Descripción detallada del Proceso o Procedimiento .......................................... 12
b. Indicaciones ........................................................................................................................ 16
1. Indicaciones Absolutas ............................................................................................. 16
2. Indicaciones Relativas ............................................................................................... 17
c. Riesgos o complicaciones frecuentes ........................................................................ 17
d. Riesgos o complicaciones poco frecuentes ............................................................. 17
e. Contraindicaciones........................................................................................................... 17
VIII. Recomendaciones .................................................................................................................. 17
IX. Autores, fecha y lugar ........................................................................................................... 17
X. Anexos ........................................................................................................................................ 19
XI. Bibliografía................................................................................................................................ 20

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 2 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

GUÍA DE PROCEDIMIENTO PARA DETECCIÓN DE MICROORGANISMOS

INFECCIOSOS MEDIANTE UN SISTEMA DE PANELES SINDRÓMICOS POR PCR
MULTIPLEX

I. Título

Guía de procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un

sistema de paneles sindrómicos por PCR Multiplex.

II. Finalidad

La presente guía busca contribuir con un documento técnico en el que se definan los
pasos a seguir para el procedimiento de ¨ detección de microorganismos infecciosos
mediante un sistema de paneles sindrómicos por PCR Multiplex¨. Este procedimiento
permite un diagnóstico rápido y preciso de microorganismos infecciosos que permita
mejorar el uso efectivo de antibióticos y el cuidado integral del paciente en el Instituto
Nacional de Salud del Niño – San Borja (INSN-SB).

III. Objetivos

a. Objetivo General

Establecer un procedimiento estandarizado para el desarrollo de una prueba

molecular diagnóstica rápida y precisa mediante el uso de paneles sindrómicos
que analizan los grupos de patógenos más comunes de bacterias, virus, levaduras,
parásitos y/o genes de resistencia a antibióticos.

b. Objetivos Específicos

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 3 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

 Establecer los requerimientos básicos para el adecuado desarrollo de la

Detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex.
 Proporcionar al personal especializado un documento técnico con los pasos a
seguir para realizar el procedimiento de Detección de microorganismos
infecciosos mediante un sistema de 5 paneles sindrómicos por PCR Multiplex.

IV. Ámbito de aplicación

La Guía de Procedimiento de Detección de microorganismos infecciosos mediante un

sistema de 5 paneles sindrómicos por PCR Multiplex, tiene como ámbito de aplicación la
Sub Unidad de Soporte al Diagnóstico – Patología Clínica, del Instituto Nacional de Salud
del Niño San Borja, establecimiento de salud altamente especializado del Ministerio de
Salud, categoría III-2.
Adicionalmente puede aplicarse en establecimientos de salud de igual complejidad que
cuenten con los recursos necesarios para realizar el procedimiento.
La guía está dirigida a los profesionales biólogos y médicos patólogos clínicos, que
laboran en, los laboratorios de biología molecular, pudiendo servir de consulta a otros
profesionales de salud que lo requieran.

V. Nombre del Proceso o Procedimiento a Estandarizar y Código CPMS

PROCEDIMIENTO CPMS
PCR identificación de múltiples patógenos respiratorios (virus y
83898.04
bacterias)
PCR Identificación de múltiples Patógenos Gastrointestinales (Virus,
83898.05
Bacterias Y Parásitos)
PCR Identificación de múltiples Patógenos En Hemocultivos
83898.06
(Bacterias Y Levaduras)
PCR Identificación de múltiples Patógenos en LCR (Virus, Bacterias Y
83898.07
Levaduras)

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 4 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

PCR identificación de múltiples patógenos relacionados a neumonía

87633
(virus y bacterias)

VI. Consideraciones Generales

a. Definiciones Operativas

1. Definición del Procedimiento

FilmArray es un sistema de reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

multiplex que integra la preparación, amplificación, detección y análisis de
muestras en un sistema cerrado, minimizando la contaminación. Permite
realizar pruebas moleculares simultáneas que facilitan el diagnóstico
sindrómico para una amplia variedad de gérmenes patógenos, incluyendo
bacterias, virus y levaduras, así como genes de resistencia a los
antimicrobianos, utilizando paneles integrales que incluyen hemocultivos,
respiratorios, gastrointestinales, meningoencefalitis y neumonía.

El dispositivo requiere un tiempo de manipulación mínimo. Simplemente se

desliza el cartucho autónomo que almacena todos los reactivos necesarios en la
estación de carga y se inyecta la solución de hidratación junto con la muestra. El
vacío en el cartucho asegura que se entreguen los volúmenes correctos y
elimina la necesidad de pipetear. Al insertar el cartucho, el sistema comienza a
ejecutar la prueba y entrega los resultados en aproximadamente una hora.

Durante un análisis, el sistema FilmArray realiza los siguientes procesos:

1. Purificación del ácido nucleico: La purificación del ácido nucleico tiene lugar
en los tres primeros pocillos del cartucho. La muestra se lisa mediante una
combinación de mecanismos químicos y mecánicos (batido de perlas) y el ácido
nucleico liberado se captura, lava y eluye mediante la tecnología de perlas
magnéticas. Estas etapas requieren aproximadamente diez minutos.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 5 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

2. Transcripción inversa y primera etapa de la PCR múltiple: Puesto que algunos

paneles incluyen virus de ARN, se realiza una etapa de transcripción inversa
(RT) para convertir el ARN vírico en ADNc antes de la amplificación. La solución
de ácido nucleico purificada se combina con una mezcla maestra precalentada
para iniciar la etapa de RT y el termociclado posterior para la PCR múltiple. El
efecto de la primera etapa de la PCR es aumentar la concentración de ácidos
nucleicos diana presente en la muestra.

3. Segunda etapa de la PCR: Los productos de la primera etapa de la PCR se

diluyen y mezclan con reactivos de PCR nuevos que contienen un colorante
intercalador fluorescente del ADN. Esta solución se distribuye en la matriz de la
segunda etapa de la PCR. Los depósitos individuales de la matriz contienen los
cebadores de los diferentes ensayos (cada uno por triplicado) dirigidos a las
secuencias específicas de ácido nucleico de cada uno de los patógenos
detectados, así como para el control del material de la plantilla. Estos cebadores
están ‘anidados’ o internalizados en los productos específicos de la primera
etapa de la reacción múltiple, que potencia tanto la sensibilidad como la
especificidad de las reacciones.

4. Análisis de fusión del ADN: Después de la segunda etapa de la PCR, la

temperatura aumenta lentamente y se controla la fluorescencia de cada
depósito de la matriz, que se analiza para generar una curva de fusión. La
temperatura a la que funde cada producto de la PCR específico (temperatura de
fusión o Tm) es consistente y predecible, y el software FilmArray evalúa
automáticamente los datos de los depósitos replicados de cada ensayo para
notificar los resultados.

FilmArray está indicado como una ayuda diagnóstica que deberá utilizarse
junto con otros hallazgos clínicos y de laboratorio.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 6 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

2. Aspectos Epidemiológicos importantes

Los métodos de prueba molecular sindrómica han revolucionado el diagnóstico

de enfermedades infecciosas al aumentar la precisión de la detección
microbiana, disminuyendo sustancialmente el tiempo necesario para generar
resultados de pruebas de laboratorio útiles. A cambio, los pacientes son capaces
de recibir el tratamiento adecuado antes, evitando exposición prolongada a
antimicrobianos innecesarios y evitando así la selección de patógenos
resistentes a medicamentos.

Además, muchos de estos métodos permiten la detección rápida de patógenos

que suponen un importante control de infecciones y peligros para la salud
pública, cuya rápida detección les brinda a los médicos y a los profesionales del
control de infecciones la capacidad de implementar rápidamente las terapias e
intervenciones epidemiológicas de control apropiadas.

Panel Hemocultivo / Sepsis:

Las infecciones del torrente sanguíneo pueden ser causadas por una variedad
de patógenos y conllevan un alto riesgo de mortalidad, que aumenta con cada
hora cuando no se suministra el tratamiento antimicrobiano apropiado. Los
paneles sindrómicos que pueden detectar rápidamente las causas comunes de
las infecciones del torrente sanguíneo y los genes de resistencia asociados son
ideales para mejorar al paciente atención y resultados.

Las siguientes bacterias Gram positivas, bacterias Gram negativas y levaduras

se identifican mediante el FilmArray BCID Panel: Enterococci (Enterococcus
faecalis y Enterococcus faecium), Listeria monocytogenes, Staphylococci
(incluyendo la diferenciación específica de Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus lugdunensis), Streptococci (con la
diferenciación específica de Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 7 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

y Streptococcus pyogenes), Acinetobacter baumannii, Bacteroides fragilis,

Enterobacteriaceae (incluyendo la diferenciación específica del complejo
Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Klebsiella aerogenes, Klebsiella oxytoca,
Klebsiella pneumoniae, Proteus, Salmonella y Serratia marcescens), Haemophilus
influenzae, Neisseria meningitidis (encapsulada), Pseudomonas aeruginosa,
Stenotrophomonas maltophilia, Candida albicans, Candida auris, Candida
glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Cryptococcus
neoformans. El FilmArray BCID Panel también incluye ensayos para detectar
determinantes genéticos de resistencia a carbapenemasas (IMP, KPC, Tipo OXA-
48, NDM y VIM), meticilina (mecA/C y MREJ), colistina (mcr-1), ESBL (CTX-M) y
vancomicina (vanA y vanB) para ayudar a identificar organismos
potencialmente resistentes a los antibióticos en muestras de hemocultivos
positivos.

Panel tracto respiratorio:

Dada la carga sustancial de enfermedades respiratorias, las pruebas de
diagnóstico sindrómico que permitan la identificación rápida de patógenos para
distinguir entre patógenos virales y bacterianos serían ideales para los sistemas
de salud que buscan optimizar el uso de antimicrobianos. Los paneles
respiratorios de diagnóstico (RP) sindrómicos están disponibles tanto para las
infecciones del tracto respiratorio superior mediante hisopado nasofaríngeo o
muestras de secreción como para las infecciones del tracto respiratorio inferior
mediante muestras de aspirado, lavado o esputo.

En el panel respiratorio RP2.1 de FilmArray podemos identificar los siguientes

virus: Adenovirus, Coronavirus 229E, Coronavirus HKU1, Coronavirus NL63,
Coronavirus OC43, SARS-CoV-2, Metapneumovirus humano,
Rinovirus/Enterovirus humano, Influenza A, A/H1, A/H3, A/H1-2009, B, Virus
Parainfluenza 1, 2, 3 y 4, Virus sincitial respiratorio. Como también las
bacterias: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Chlamydia pneumoniae,
Mycoplasma pneumoniae.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 8 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

Panel gastrointestinal:
A pesar de los avances en seguridad alimentaria, desinfección y tratamiento
médico, las infecciones gastroentéricas siguen siendo un problema sanitario
importante a nivel mundial. A nivel mundial, las enfermedades diarreicas
infecciosas son una causa significativa de mortalidad entre los niños pequeños;
además, la diarrea en niños contribuye a la desnutrición, mayor susceptibilidad
a otras infecciones, y puede ocasionar retrasos en el crecimiento y en el
desarrollo intelectual.

Mediante el FilmArray GI Panel se identifican las siguientes bacterias :

Campylobacter (C. jejuni/C. coli/C. upsaliensis), Clostridium difficile (C. difficile)
toxina A/B, Plesiomonas shigelloides, Salmonella spp, Vibrio (V.
parahaemolyticus/V. vulnificus/V. cholerae), Yersinia enterocolitica, Escherichia
coli enteroagregativa (EAEC), Escherichia coli enteropatógena (EPEC),
Escherichia coli lt/st enterotoxigénica, Escherichia coli productora de toxina tipo
Shiga (STEC) stx1/stx2 (incluida la identificación específica del serogrupo O157
de E. coli dentro de STEC), Shigella/Escherichia coli enteroinvasiva (EIEC).
Además, puede identificar los siguientes parásitos: Cryptosporidium spp,
Cyclospora cayetanensis, Entamoeba histolytica y Giardia lamblia. Finalmente,
también discrimina entre los siguientes virus: Adenovirus F 40/41, Astrovirus,
Norovirus GI/GII, Rotavirus A, Sapovirus (Genogrupos I, II, IV, y V).

Panel neumonía:
La neumonía es la causa más común de problemas asociados al tracto
respiratorio que daña uno o ambos pulmones y puede ser causada por virus,
bacterias u hongos. Encontrar la causa microbiológica de la neumonía es difícil
con las técnicas microbiológicas usadas hoy en día, quedando un alto porcentaje
sin encontrar el agente causal.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 9 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

Mediante el FilmArray Panel de neumonía se pueden identificar, entre otros, los

siguientes agentes infecciosos: Bacterias: Acinetobacter calcoaceticus-baumanii
complejo, Enterobacter cloacae complejo, Escherichia coli, Haemophilus
influenzae, Klebsiella aerogenes, Klebsiella oxytoca, Grupo Klebsiella pneumoniae,
Moraxella catarrhalis, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Serratia
marcescens, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus
pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Chlamydia pneumoniae, Legionella
pneumophila, Mycoplasma pneumoniae.
Virus: Adenovirus, Coronavirus, Metapneumovirus humano,
Rinovirus/Enterovirus humano, Influenza A, Influenza B, Virus de la
parainfluenza, Virus sincicial respiratorio. Genes de resistencia antimicrobiana:
Carbapenemasas, IMP, KPC, NDM, Tipo OXA-48, VIM, ESBL: CTX-M y resistencia
a la meticilina: mecA/C y MREJ (MRSA)

Panel meningitis:
La meningitis es una inflamación de las membranas que cubren el cerebro y la
medula espinal. Este proceso inflamatorio puede ser producida por virus, pero
también lo pueden producir bacterias y hongos. En algunos casos este proceso
se soluciona sin tratamiento en pocas semanas. Sin embargo, en otros requiere
el uso de drogas que neutralizan al agente infeccioso.

Mediante el FilmArray Panel de meningitis se puede diagnosticar los siguientes

agentes etiológicos: Bacterias: Escherichia coli K1, Haemophilus influenzae,
Listeria monocytogenes, Neisseria meningitidis, Streptococcus agalactiae,
Streptococcus pneumoniae. Virus: Citomegalovirus (CMV), Enterovirus (EV),
Virus del herpes simple 1 (VHS-1), Virus del herpes simple 2 (VHS-2), Virus del
herpes humano 6 (HHV-6), Parechovirus humano (HPeV), Virus varicela-zóster
(VZV). Levaduras: Cryptococcus neoformans/gattii

3. Consentimiento Informado

No Aplica

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 10 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

b. Conceptos Básicos

 Equipo de protección personal (EPP): Material, incluyendo la indumentaria

(p. ej., batas, guantes, respiradores, lentes de seguridad, mascarillas de
protección), utilizado para evitar la exposición o la contaminación de una
persona por materiales peligrosos.
 PCR: La PCR, siglas en inglés de 'Reacción en Cadena de la Polimerasa', es una
prueba molecular de diagnóstico que permite detectar un fragmento del
material genético de un patógeno.
 PCR multiplex: Esta metodología usa la tecnología de la PCR, por sus siglas en
inglés, en la cual dos o más blancos son incluidos en la misma reacción. Dicho
proceso se realiza usando un grupo de cebadores que son seleccionados de
manera cuidadosa y que no puedan generar reacción cruzada entre sí.

c. Requerimientos Básicos

 Recursos Humanos
 Médico Patólogo Clínico.
 Biólogo.
 Técnico de Laboratorio.

 Equipos Biomédicos
- Cabina de Bioseguridad - Estación de carga de
Clase II-A2. cartuchos de FilmArray
- Vórtex. - Computadora con el
- Congeladora de - 70 °C. programa de análisis
- Refrigeradora de 2 - 8 °C. instalado.
- Equipo sistema integrado
FilmArray 2.0

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 11 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

 Materiales Médicos No Fungibles

- Gradillas para tubos de 2 ml.
- Gradilla de tubos de 12 x 75mm.
- Contenedor de desechos biológicos de 4L.

 Materiales Médicos Fungibles

 Materiales
- Papel absorbente. - Jeringas capaces de medir
- Guantes de nitrilo. un volumen de muestra de
- Respirador N95. 0,2 ml (200 µl) (Panel
- Gorros descartables. sepsis)
- Mandil descartable. - Tubos con medio de
- Botas descartables. transporte Caryblair (Panel
- Protector facial. gastrointestinal)

 Reactivos de Laboratorio
- Kit de cartucho de FilmArray por cada panel

 Soluciones
- Etanol 70%.
- Lejía al 10%.

VII. Consideraciones Específicas

a. Descripción detallada del Proceso o Procedimiento

Indicaciones generales para todos los paneles sindrómicos

 Al inicio del trabajo (30 minutos)
- El personal de laboratorio debe ponerse el equipo de protección
personal (EPP) respectivo: respirador N95, mandil descartable,

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP-064/INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 12 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex
guantes, lentes de protección y/o protector facial, gorros y botas
durante todo el tiempo de trabajo en el laboratorio.
- Limpiar bien tanto la zona de trabajo como la estación de carga de
cartuchos de FilmArray con soluciones de alcohol etílico al 70% o
hipoclorito de sodio al 10%. Secar con papel descartable y eliminar el
residuo en contenedores rojos. Para evitar la acumulación de residuos
y la posible inhibición de la PCR, pase un trapo con agua sobre la
superficie desinfectada.
- Esterilizar la cabina de bioseguridad con UV durante mínimo 15
minutos.
- Asegurarse de tener todos los materiales antes de iniciar el proceso de
laboratorio.

 Recepción de muestra y preparación de reactivos (10 Minutos)

 Recepción y verificación de la muestra
- Recibir las muestras en cadena de frío entre 2°C y 8°C.
- Verificar la correspondencia de datos del paciente según orden médica
y asignar un código para cada muestra.
- La codificación asignada debe estar indicada en la orden médica, así
como en el recipiente que contiene la muestra.

 Preparación e hidratación del cartucho de reactivos

- Inserte el cartucho en la estación de carga de cartuchos.
- Coloque el vial de inyección de muestra en el pocillo rojo.
- Coloque el vial de inyección de hidratación en el pocillo azul.
- Desenroscar la tapa del vial de inyección de hidratación, dejando la
tapa en la estación de carga de cartuchos e insertar el vial en el puerto
de hidratación del cartucho. Empujar hacia abajo con fuerza hasta
romper el sello.
- Esperar hasta que la solución de hidratación se introduzca en el
interior del cartucho.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 13 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex
 Mezcla y cargado de muestra y reactivos (10 Minutos)
 Mezcla de la muestra y reactivos
- Incorporar el tampón para muestra al vial de inyección de muestra.
- Invertir la ampolla del tampón para muestra de manera que la punta
mire hacia arriba. Nota: No toque la punta de la ampolla.
- Apretar firmemente la lengüeta de plástico con relieve en el lateral de
la ampolla hasta que se rompa el sello. Con la punta mirando hacia
abajo, dispensar el tampón para muestra en el vial de inyección de
muestra apretando lentamente, pero con fuerza y, a continuación,
vuelva a apretar. Evitar demasiadas burbujas.
- Homogenizar bien las muestras.
- En la cabina de bioseguridad utilizar la pipeta de transferencia para
extraer la muestra hasta la segunda línea. Añadir la muestra al vial de
inyección de muestra. Cerrar bien la tapa del vial de inyección de
muestra.
- Tapar el tubo de la muestra y almacenarlo en refrigeración hasta su
descarte, el cual será 48 horas después de terminado todo el proceso.
- Mezclar la muestra invirtiendo suavemente el vial de inyección de
muestra 3 veces.
- Volver a poner el vial de inyección de muestra en el pocillo rojo de la
estación de carga de cartuchos.

 Cargado de la mezcla de muestra y reactivos en el cartucho

- Desenroscar el vial de inyección de muestra de la tapa.
- Esperar de 3 a 5 segundos, a continuación, quitar el vial de inyección
de muestra dejando la tapa en la estación de carga de cartuchos.
- Insertar el vial de inyección de muestra en el puerto de muestra del
cartucho.
- Empujar hacia abajo con fuerza hasta romper el sello, y esperar hasta
que la mezcla de muestra se introduzca en el interior del cartucho.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 14 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex
 Procesamiento de la prueba (65 minutos)
- Colocar el cartucho en el equipo FilmArray. Sonará un clic cuando el
cartucho esté correctamente insertado en su sitio.
- Escanear el código de barras del cartucho FilmArray mediante el lector
de código de barras. La identificación del cartucho, número de lote y
número de serie, tipo de cartucho y protocolo están preprogramados
en el código de barras de la bolsa FilmArray y se introducirán
automáticamente cuando se escanee el código de barras. Si no es
posible escanear el código de barras, el número de lote, el número de
serie del cartucho y tipo de protocolo se pueden introducir
manualmente a partir de la información proporcionada en la etiqueta
del cartucho. Para reducir los errores a la hora de introducir datos, se
recomienda encarecidamente que la información de la bolsa se
introduzca escaneando el código de barras.
- El software FilmArray controla el funcionamiento del equipo, recoge y
analiza los datos y genera automáticamente un informe de la prueba al
final de la misma.

 Análisis y exportación de Resultados (10 minutos)

- El informe de la prueba de FilmArray se muestra automáticamente al
finalizar el proceso.
- Revisar que los controles figuren como APROBADO. Notificaciones de
FALLIDO o INVÁLIDO anulan el proceso y se repetirá con un nuevo
cartucho.

 Resultados esperados por cada microorganismo del panel

- DETECTADO: El análisis se ha completado correctamente, los

controles del cartucho están APROBADOS, el ensayo fue positivo para
la detección del microorganismo.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 15 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex
- NO DETECTADO: El análisis se ha completado correctamente, los
controles del cartucho están APROBADOS, el ensayo fue negativo para
la detección del microorganismo.

- NO APLICA: El análisis se ha completado correctamente, los controles

del cartucho están APROBADOS. Casos especiales:
o En Escherichia coli, el resultado de EPEC no es aplicable porque
la detección no puede diferenciarse de STEC.
o Se ha detectado E. coli productora de toxina tipo Shiga (STEC)
Stx1/Stx2, no se ha detectado el serotipo O157.

- INVÁLIDO: El análisis no se ha completado correctamente (se detuvo,

quedo incompleto, se perdió comunicación del equipo, error del
equipo o error del software); o los controles del cartucho notificó
INVÁLIDO o FALLIDO.

 Al Final del trabajo (30 minutos)

- Limpiar la superficie de la mesa de trabajo con soluciones
desinfectantes.
- Eliminar los guantes y otros materiales descartables en los reservorios
adecuados (bolsa roja).
- Dejar los materiales utilizados en su lugar respectivo.
- Esterilizar la cabina de bioseguridad con UV durante mínimo 15
minutos.

b. Indicaciones

1. Indicaciones Absolutas

Pacientes con características clínicas sindrómicas: respiratorio, gastrointestinal,

sepsis sanguínea, neumonía y meningitis.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 16 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex
2. Indicaciones Relativas

De acuerdo al criterio del médico tratante que solicita el estudio.

c. Riesgos o complicaciones frecuentes

- El tampón de muestra ha recibido las siguientes clasificaciones: toxicidad

aguda, lesión ocular grave, e irritación cutánea. Para más información,
consulte la Ficha de datos de seguridad de materiales (SDS/MSDS) del Kit de
reactivos FilmArray.
- El tampón de muestra formará compuestos y humos peligrosos si se mezcla
con lejías u otros desinfectantes.

d. Riesgos o complicaciones poco frecuentes

No Aplica

e. Contraindicaciones

No Aplica

VIII. Recomendaciones

La presente guía aprobada debe ser socializada en la Sub Unidad de Soporte al

Diagnóstico - Patología Clínica para conocimiento del staff profesional.

IX. Autores, fecha y lugar

1. Nombre del Ejecutor responsable:

Jefatura de la Sub Unidad de Soporte al Diagnóstico y Tratamiento.
2. Fecha de elaboración y vigencia del protocolo:
Diciembre, 2021.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 17 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex

Vigencia: 02 años a partir de su aprobación mediante Resolución Directoral del

Instituto Nacional de Salud del Niño San Borja.

3. Lista de Autores y correos electrónicos:

 Blga. Elizabeth Noelia Ubillus Borja eubillus@insnsb.gob.pe
 Blga. Lisette Arminda Marín García lmarin@insnsb.gob.pe
 Blgo. Carlos Alberto Figueroa Villanueva cafigueroa@insnsb.gob.pe
 Dra. María Hernández Meza mhernandez@insnsb.gob.pe
 Dra. Helen Morales Miranda hmorales@insnsb.gob.pe
 Dr. Julio Díaz Henderson jdiazh@insnsb.gob.pe
 Dra. Andrea Zavaleta González azavaleta@insnsb.gob.pe
 Dra. Carla Méndez Chacón Rodríguez cmendez@insnsb.gob.pe

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 18 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex
X. Anexos
1. Anexo N° 01: Reporte Final de resultado que se entrega al paciente

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 19 de 20

 Guía de Procedimiento para detección de microorganismos infecciosos mediante un sistema de paneles
sindrómicos por PCR Multiplex
XI. Bibliografía

1. Higuchi, R, Fockler, C, Dollinger, G, Watson, R. Kinetic PCR analysis: real time

monitoring of DNA amplification reactions. Bio/technology. 1993. 11:1026-1030.
2. Radmard S, Reid S, Ciryam P, et. al. Clinical utilization of the FilmArray
Meningitis/Encephalitis (ME) Multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR) Assay.
Front. Neurol. 2019. Disponible en https://doi.org/10.3389/fneur.2019.00281.
3. Cobo F, Borrego J, Rodriguez-Granger J, et. al., Detection of bacterial pathogens in
sterile fluids with the FilmArray Meningitis/Encephalitis identification system. Rev
Esp Quimioter. 2019 Feb; 32(1): 85–86.
4. Piralla A, Lunghi G, Ardissino G., et. al. FilmArray™ GI panel performance for the
diagnosis of acute gastroenteritis or hemorragic diarrhea. BMC Microbiology. 2017.
17:111.
5. Cremet L, Gaborit B, Bouras M, et. al. Evaluation of the
FilmArray® Pneumonia Plus Panel for Rapid Diagnosis of Hospital-Acquired
Pneumonia in Intensive Care Unit Patients. Front. Microbiol. 2020. Disponible
en: https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.02080.

Fecha: Diciembre, 2021 Código: GP 064-INSN-SB/USDT/SUSD-PC. V.01 Página 20 de 20