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Albaaloopeez

Biología Molecular

1º Grado en Biotecnología

Facultad de Biología
Universidad de Oviedo

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 - Test:
a) Construya el mapa de restricción del plásmido recombinante de pBR322, en el que 1) Los enzimas de restricción:
se ha insertado entre los sitios BamHI y SaII un fragmento de DNA humano de 3276 o Son exonucleasas.
pb en cuya secuencia hay dos sitios de restricción internos: un sitio EcoRI a 1000 pb
➔ Son endonucleasas específicas de secuencia.
en el punto 5’ de inserción (BamHI) y en el sitio PstI a 1000 pb del punto 3’ de
o (Solo) Hidrolizan enlaces fosfodiéster en DNA monocatenario.
inserción (SaII).
➔ Pueden producir extremos sobresalientes o extremos romos.
b) ¿Qué fragmentos se obtendrían si este plásmido recombinante se digiere con:
BamHI con EcoRI+SaII, con SalI+PvuII y con SaII+PstI?, ¿Y si se digiere el plásmido
2) Los métodos de hibridación:
original pBR322 con los mismos enzimas?
o Permiten identificar secuencias con alto grado de identidad.
c) A continuación, analice los productos de todas las digestiones mediante
electroforesis en geles de agarosa. Haga un esquema de los resultados esperados ➔ Se basan en el apareamiento entre dos cadenas por complementariedad de bases.
comparando las digestiones de pBR322 y del plásmido recombinante, indicando la o Se forman cadenas de DNA triples.
movilidad electroforética de los fragmentos con ayuda de los marcadores o Solo se utilizan para comparar DNA del mismo origen y tamaño.
mostrados a la derecha en la representación esquematizada del gel.
d) ¿Cómo distinguiría (mediante su cultivo) las bacterias transformadas con el 3) La electroforesis en geles de agarosa permite separar:
o Fragmentos de DNA en función tanto de su carga como de su masa.
plásmido recombinante de aquellas transformadas con el plásmido original pBR322.
- En el dibujo adjunto se muestra un esquema del resultado de la secuenciación de un ➔ Fragmentos de DNA de la misma conformación en función solo de su tamaño.
fragmento de DNA clonado en un vector plasmídico utilizando el método de Sanger de o Los componentes de un heteroduplex DNA-RNA.
la terminación forzada. o Fragmentos de DNA pero no de RNA.
a) Leer la secuencia del DNA mostrada en el dibujo señalando su polaridad.
b) ¿Cuál es la secuencia del DNA usado en las reacciones de secuenciación? 4) Señale las respuestas correctas:
c) Localice en ella las dianas de reconocimiento para siete endonucleasas de o Una molécula de DNA recombinante contiene fragmentos de DNA de distintos orígenes
restricción cuyas secuencias de reconocimiento son palíndromas de 6 pb. unidos por puentes de hidrogeno.
- ➔ Una molécula de DNA recombinante contiene fragmentos de DNA unidos
a) Diseñar los dos oligonucleótidos cebadores (de 12 pb cada uno y señalando covalentemente.
claramente su polaridad) para la amplificación por PCR de la siguiente secuencia: o Los vectores de clonación pueden ser tanto plásmidos como virus o fagos.
5’ TATGATGCCGGAGAGTCTCTCTGTACTGA --- GACTGATAGATAGATCCCAATTCGCGCGG 3’ o Una genoteca genómica es una colección de fragmentos de DNA amplificados
3’ ATACTACGGCCTCTCAGAGAGACATGACT --- CTGACTATCTATCTAGGGTTAAGCGCGCC 5’ mediante PCR.
b) Partiendo de 1 𝜇g de DNA molde, ¿cuántos ciclos de amplificación serían necesarios ➔ Los plásmidos poseen capacidad de replicación autónoma.
como mínimo en teoría para conseguir 1 mg de DNA? ➔ Una genoteca de cDNA es una colección de DNAs complementarios de los mRNAs
- Escherichia coli es productora de la endonucleasa de restricción EcoRI cuya secuencia celulares maduros clonados en un vector.
de reconocimiento es GAATTC. Analizando el genoma de E. coli se puede observar que
hay varias secuencias GAATTC a lo largo de su cromosoma, y que todas ellas están 5) Una genoteca:
metiladas. ¿Qué explicación encuentra a este hecho? o Puede ser una colección de fragmentos de restricción del mismo tamaño.
o Es una colección de fragmentos de DNA amplificados mediante PCR.
➔ Puede ser una colección de genes o de fragmentos del genoma clonados en un vector.
➔ Puede ser una colección de DNAs complementarios de los mRNAs celulares maduros
clonados en un vector.

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6)La edición del RNA:
o Es un mecanismo generalizado de modificación postranscripcional.
o Altera la secuencia del DNA molde de la transcripción.
➔ Altera la secuencia de la proteína codificada de modo que difiere de la predicha por la
secuencia genómica.
➔ Puede ser debida a una desaminación de alguna base en el RNA maduro.
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12) Señale las respuestas correctas:
➔ La síntesis de RNA no requiere un cebador.
➔ La RNA polimerasa no tiene ningún tipo de actividad exonucleasa.
➔ La fidelidad de la transcripción es menor que la de la replicación.
o Las cadenas de RNA se sintetizan en sentido 3’-5’.

7) La secuenciación mediante el método Sanger: 13) Las RNA polimerasas utilizan como sustratos:
➔ Se basa en la copia del DNA a secuenciar mediante la terminación forzada de la síntesis o Desoxirribonucleósidos trisfosfato.
en todos los puntos de su secuencia. o Coenzimas de oxidorreducción.
o Permite leer directamente la secuencia de la cadena que se desea secuenciar. o Un oligonucleótido cebador.
o Utiliza ribonucleósidos trisfosfato sin 3’OH. o Ribonucleósidos monofosfato.
➔ Utiliza didesoxiribonucleosidos trisfosfato. 14) La subunidad sigma (𝜎) de la RNA polimerasa de E. Coli:
➔ Es esencial en la determinación del sitio de inicio de la transcripción.
8) El denominado DNA complementario (cDNA): o Participa en la terminación de la transcripción.
➔ Representa a los genes codificantes de proteína expresados en una célula. o Es esencial en la etapa de elongación.
o Se obtiene mediante una amplificación por PCR reversa. ➔ Reconoce secuencias específicas en los promotores de los genes procarióticos.
o Se obtiene por replicación de la cadena de DNA codificante del RNA. 15) La terminación de la transcripción en procariotas:
➔ Se obtiene mediante una transcripción reversa de los mRNAs celulares. o Se produce por agotamiento de ribonucleótidos.
➔ Depende de secuencias de terminación.
9) La reacción en cadena de la polimerasa (PCR): ➔ Tiene lugar por formación de estructuras secundarias en el RNA sintetizado.
➔ Es una técnica que permite la síntesis in vitro de DNA. o Se produce por corte endonucleolítico
o Es una técnica que permite la síntesis in vitro de RNA. 16) Señala las respuestas correctas:
o Utiliza para la amplificación oligonucleótidos cebadores de DNA. ➔ La RNA polimerasa III sintetiza los precursores de las tRNAs.
o Lo lleva a cabo una RNA Polimerasa termoresistente. ➔ La RNA polimerasa II sintetiza los pre-mRNAs.
➔ TBP es esencial para que la RNA Pol II inicie la transcripción.
10) El término RT-PCR se refiere a una amplificación:
➔ El factor TFIIB forma parte del complejo iniciador de Pol II.
o Por PCR reversa.
17) Entre las modificaciones post-transcripcionales que sufren los tRNAs están:
o Por PCR llevada a cabo a temperatura ambiente (RT “room temperature”).
➔ Modificaciones de bases.
o Por PCR del RNA celular.
o Adición del “cap”.
➔ Por PCR del cDNA sintetizado por retrotranscripción.
o Poliadenilación.
➔ Modificación de los extremos 5’ y 3’.
11) La reacción en cadena de la polimarasa (PCR) es una técnica que:
18) El procesamiento del extremo 5’ de los precursores de los mRNAs:
➔ Permite la síntesis in vitro de DNA. o Permite la síntesis in vitro de RNA. o Tiene lugar mediante corte por endonucleasas.
➔ Supone la unión de 7-metil-guanilato al nucleótido iniciador.
➔ Utiliza para la amplificación oligonucleótidos cebadores de DNA. o Supone la adicción de la secuencia CCA.
o Lo lleva a cabo una RNA Polimerasa termorresistente. o Es una poliadenilación.

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19) La poliadenilación de los mRNAs:
➔ Está catalizada por una poliA polimerasa.
➔ Se produce tras el procesamiento del extremo 3’ por corte.
o Tiene lugar en el citoplasma.
➔ Confiere estabilidad a los mRNAs.

20) El splicing de los pre-mRNAs:

➔ Implica reacciones de transesterificación.
o Se produce durante el proceso de síntesis de RNA.
➔ Necesita secuencias consenso en el intrón.
➔ Se realiza en el núcleo.
21) La escisión de intrones autocatalíticos:
o Se da solo en procariotas.
➔ No requiere la participación de proteínas enzimáticas.
➔ Implica reacciones de transesterificación.
o Es llevado a cabo por las partículas ribonucleoproteicas pequeñas (snRNPs).
22) Señale las respuestas correctas:
➔ Las snRNPs participan en el splicing de los intrones de los pre-mRNAs.
o Los snoRNAs participan en la maduración de los pre-tRNAs.
➔ Los RNAs de la serie U forman parte de las snRNPs y snoRNPs.
➔ Los ribozimas son enzimas de naturaleza ribonucleica.
Nota: Faltan dibujos necesarios para ejs 1 y 2.

Nota 2: Faltan respuestas del test.

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