TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE 13-14
Es el conjunto de técnicas que permite aislar un gen
de un organismo para su posterior manipulación e
inserción en otro diferente.
PASOS DE LA TECNOLOGIA
1. Cortar el ADN en sitios específicos
2. Selección de vector de clonación
3. Ligar o pegar los fragmentos
4. Introducción del ADN en un celula huésped
5. Selección e identificación de las células que
contienen ADN recombinante
FUENTES DE GENES PARA TECNOLOGÍA
DEL ADN RECOMBINANTE
ADN genómico…el ADN cromosomico
aislado directamente de la celula
ADNc…es el ADN obtenido mediante
transcripción inversa
Genes sintéticos…sustancia biológicamente
funcionales de ADN químicamente
sintetizado
VECTORES
Son agentes que pueden insertar un
fragmento de ADN dentro de una célula
huésped = MOLÉCULA DE ADN
TRANSPORTADORA
-PLASMIDOS: • Inserción de hasta 10kb •
Sistema más común
-FAGOS: • Filamentosos (M13, capacidad
de inserción 10kb) • Tipo I (T1, capacidad
23kb) • Lamba (capacidad 25kb) •P1
(capacidad 100 kb)
-COSMIDOS: • Capacidad de 44kb •
Plásmidos con sitios cos
-BAC: • Capacidad de 300kb • Cromosoma
artificial de bacterias
TIPOS DE VECTORES
Son moléculas de DNA de doble hebra, de
pequeño tamaño (2-5Kb) y forma circular,
presentes en forma libre en el citosol de
muchas bacterias y de algunos eucariotas
unicelulares o Permiten la incorporación de
insertos de DNA de un tamaño máximo de
10Kb o El empleo de un plásmido como
vector de clonación se favorece cuando
incluye genes marcadores, cuya presencia
pueda ser detectada o cuya expresión
confiera a la célula anfitriona portadora del
rDNA una serie de propiedades especiales
o Comúnmente se utilizan plásmidos
artificiales obtenidos a su vez por técnicas
de DNA recombinante. Ej Plásmido pUC19
BACTERIOFAGOS
Son virus que tienen la propiedad de
replicar su genoma en las bacterias que
infectan. o Esta propiedad resulta útil para
conseguir una alta eficiencia de clonación
al ser utilizados como virus modificados o
Admiten insertos mayores que en el caso
de los plásmidos. o La técnica de inserción
es la misma que para plásmidos: cortar
inserto y DNA del fago con las mismas
enzimas de restricción y ligar para obtener
rDNA o Los bacteriófagos más utilizados
son: fago M13 y lambda
CÓSMIDOS
o Son vectores sintéticos, que combinan
características de plásmidos y fagos para
combinar las ventajas de ambos tipos de
vectores o Son útiles para clonar insertos
de gran tamaño (45 kb)
Métodos de introducción del
rDNA: Inserto pequeño
Transformación Inserto grande
Empaquetamiento previo
aprovechando las secuencias cos
Fragmento plasmídico:
Proporciona las características de
tamaño pequeño, circularidad, un
origen de replicación, sitios de
restricción donde se inserta el
DNA, uno o más marcadores
seleccionables y la propagación
en bacterias como si fuesen
plásmidos
Fago: Se toman las secuencias
“cos” que proporcionan al
cósmido la capacidad de
empaquetar su ADN en cápsides
víricas in vitro
Objetivos de la clonación
Amplificación: Secuenciación
Estudio de la estructura de ácidos
nucleicos Estudio de homología
entre especies Identificación de
mutaciones
Expresión: Estudio del proceso de
transcripción y traducción
Estudio de su regulación:
secuencias de control ( por
ejemplo, promotores)
Producción de la proteína o RNA
(formas normales o alteradas)
 Para su identificación Para su
estudio (propiedades, función… )
Para aplicarla ( producción
comercial): diagnóstico,
terapéutica, nutrición, industria…
Ingeniería de proteínas con
alteración de sus propiedades
(para estudio o aplicación)
DETECCIÓN Y SELECCIÓN DE LOS CLONES
RECOMBINANTES
Métodos de hibridación: detección de una
secuencia del DNA clonado, o del mRNA
transcrito a partir de él, por hibridación con
una sonda marcada Métodos
inmunoquímicos: detección de la proteína
codificada por el gen clonado, mediante un
anticuerpo específico. Métodos genéticos o
de selección fenotípica: en ciertos casos, la
expresión del propio inserto produce
cambios apreciables en la célula anfitriona,
que sirven para reflejar su clonación con
éxito.
Genes que codifican una proteína
detectable: habitualmente una enzima
para la que se dispone de un ensayo. Por
ejemplo, la b-galactosidasa (gen lacZ de E.
coli) transforma el sustrato sintético X-gal
(5-bromo-4-cloro-3- indolil-b-D-
galactopiranósido) en un producto de color
azul. Genes de resistencia a un antibiótico:
que codifican una proteína que permite el
crecimiento de la célula anfitriona en
presencia de un determinado antibiótico.
Se nombran:
CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Por ejemplo, el gen ampr codifica una b-
lactamasa capaz de degradar la ampicilina,
una penicilina semisintética. El gen de
resistencia a tetraciclina (tetA) codifica una
proteína de membrana que actúa como
una bomba, extrayendo este antibiótico de
la célula. Genes que complementan
defectos nutricionales: En este caso, se
emplean cepas mutantes de la célula
anfitriona, que no pueden crecer en
ausencia de un determinado nutriente. Por
ejemplo, clonando en levaduras con un
defecto metabólico en la ruta de
biosíntesis de triptófano, se emplea un
vector que contiene el gen TRP1 correcto,
con lo que sólo las células transformadas
crecen en un medio carente de Trp
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Son endonucleasas de origen bacteriano
que cortan los enlaces fosfodiéster del ADN
en una secuencia específica denominada
secuencia diana.
Se denominan enzimas de restricción
debido a que restringen la permanencia de
un ADN exógeno en la célula bacteriana
que produce dicha enzima
En la actualidad, se sabe que todas las
especies de bacterias sintetizan uno o más
tipos de endonucleasas capaces de hacer
cortes en secuencias específicas de
nucleótidos de una doble cadena de ADN
exógeno
Los dímeros de cebadores es una de las causa del efecto Plateau

Elija una;
Verdadero
Falso
Pregunta 2
Completada
Puntúa 0.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
Son los posibles estados en los cuales no podemos encontrar al factor F:

a.
Autónomo, en las células F+

b.
Como episoma en las células Hfr

c.
Como episoma en las cepas F+

d.
Autónomo en las cepas F'

e.
Autónomo en las células Hfr

Pregunta 3
Completada
Puntúa 0.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
En cuanto a los transposones de DNA, no es cierto:
a.
Se mantienen como DNA durante todo un ciclo de recombinación

b.
Portan secuencias de DNA que actúan como sitios de recombinación

c.
No necesita un intermediario de RNA para la reacción

d.
Los transposones no autónomos no presentan las repeticiones terminales

Pregunta 4
Completada
Puntúa 2.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
Cuando afirmamos que la PCR es una técnica que requiere una cantidad mínima de DNA necesaria para que se
produzca la amplificación, nos referimos a su:

a.
Umbral

b.
Efecto plateau

c.
Especificidad

d.
Sensibilidad

Pregunta 5
Completada
Puntúa 0.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
Las células electrocompetentes se usa para la transformación por choque térmico:

Elija una;
Verdadero
Falso
Pregunta 6
Completada
Puntúa 0.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
Los productos de reacción de la PCR son moléculas de ADN lineales y bicatenarias

Elija una;
Verdadero
Falso
Pregunta 7
Completada
Puntúa 2.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
Son características de la transformación en las bacterias Gram negativas; excepto:

a.
Estado de competencia se induce internamente

b.
Presenta secuencia captadora de DNA

c.
Capta ADN de especies del mismo género

d.
Sus sistemas de captación de ADN son inespecíficos

Pregunta 8
Completada
Puntúa 0.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
La transducción especializada requiere que un profago se escinda y entre en el ciclo lítico

Elija una;
Verdadero
Falso
Pregunta 9
Completada
Puntúa 2.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
En el secuenciamiento enzimático no se requiere de cebador

Elija una;
Verdadero
Falso
Pregunta 10
Completada
Puntúa 2.00 sobre 2.00
No señalada (bandera)Señalar con bandera la pregunta
Texto de la pregunta
En Haemophilus influenzae el ADN que ingresa es bicatenario