Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
ADN bacteriano: Se protege de las endonucleasas propias metilando ciertas bases en un numero
muy limitado de sitios (los virus no). Pude ser dañado por virus, agentes químicos y factores
ambientales. Puede ser intercambiado entre bacterias.
Tipo 1: una enzima con subunidades que reconocen, se anclan y metilan, reconocen una secuencia
simple, y hasta 1000 bases después se anclan.
Tipo II: Dos diferentes enzimas va a reconocer una secuencia simétrica, se anclan, cortan o pueden
modificar. (las más fáciles de usar, uso en la manipulación genética, V cortan en sitio especifico no
requiere cofactores)
Tipo III: Una enzima con dos subunidades, una para reconocimiento y otra para romper. Reconoce,
metila y corta, hasta 24-26 bases después.
Tipo IV: Dos diferentes enzimas van a reconocer una secuencia asimétrica, se anclan cortan o
modifican después de 20 bases.
Nomenclatura
Nombre del organismo huésped :SmaI Serratia marcescens, primera enzima (CCCGGG)
Primera letra: Nombre del género y las dos letras del epiteto especifico. Cuando una cepa del
huésped en particular tiene varios sistemas R-M se identifica con romanos.
Sitios de reconocimiento
Palindromos: Secuencias particulares de 4-18 nucléotidos que tienen un doble eje de simetria
rotacional.
Las enzimas con alta puresa estan libres de otras endonucleasas, exonucleasas y fosfatasas.
Digestion: Se agrega una enzima de restriccion paa que corte.
Ligación de las moléculasde ADN
Utilizar la capacidaddel ADN ligasa para unir cobvalentemente los extremos, se pegan por
los puentes de hidrogeno y se unen por complementariedad.
Utilizar fago T4 para catalizar l formación del enlace fosfodiester en los extremos romos.
Utilizar la enx¡zima terminal desoxinucleotidiltransferasa para sintetisi de colas
monocatenarias.
Da como resultado la amplificación selectiva de una region elegida de una molécula de ADN.
Puede elegirse cualquier region de ADN siempre y cuando se conozcan las secuencias de los
bordes de la region.
Primer o cebador
Al abrir la cadena, dos dos oligonucleotidos se tienen que hibridar, en cada hebra de la cadena,
van aa ctuar como cebadores para la reacciones de sintesis de ADN, ademas de que limitan la
region que se amplificara.
Taq polimersa
Protocolos de Pcr:
30s de alineación(55 C)
90s de elongacion(72 C)
Programación de la PCR
Temperatura de alineamiento
Tiempo de elongación
Buffer estandar utilizado por biologos moleculas Tris HCL (pH de Taq polimerasa superior a 8)
Sales
El rendimiento de PCR aumenta con el uso de KCL 10 y 50mM, y cae a concentraciones de más de
50Mm, el NaCl inhibe la apmlificacion.
Mg influye en:
Concentraciones
0.5 2.5mM de Mg
200microM de nucleotidos
10 pmol de cebadores
Plasmidos y Vectores
Plásmidos cripticos: Son aquellos a los que no se les ha atribuido resgos fenotipicos.
Plasmidos F: Solo tienen genes tra, capacidad de promover la transferencia conyugal de los
plasmidos.
Plasmidos R (de resistencia): Llevan genes que confieren la bacteria huesped, la resistencia a uno
o más agentes antibacterianos como cloranfenicol, amicilia y mercurio.
Conjugativos
No conjugativos
Rango de hospederos
Esta determinado por su region ori, cuya regio ori derive del plasmido Col E1, tienen un rango de
hospedadores restringido: olo se replkican en bacterias entéricas Ecoli Salmonella.
PAR: funcion de particion que mantiene estables a los plasmidos, en cada division celular.
Inestabilidad debida a la formación de multiméricas, el mecánismo que controla el nímero de
copias de un plasmido asegura un número fijo de origenes de plásmidos por bacteria.
Transformacion bacteriana
Vectores de clonación
Molecula de ADN que transporta ADN extraño en una celula huesped se replica dentro de una
célula bacteriana (o levadura) y produce muchas copias de sí mismo y del ADN extraño.
Caracteristicas de un vector
pequeños como para que se puedan separar fácilmente del DNA cromosómico
Deben de tener un ori.
Sitio de clonacion multiple MCS: fragmento de DNA con secuencias de reconocimiento
para muchas enzimas de restricción.
Genes marcadores que se puedan seleccionar: permiten la selección e identificación de
bacterias transformadas mediante un plásmido recombinante en comparación con las
células no transformadas.
Secuencias de promotor de RNA polimerasa(transcripcion de RNA POL)
Secuencias de cebadores para la secuenciacion de DNA
No. Vector Usos importantes Tamaño máximo del Ejemplos
inserto en kb
Cósmidos
BAC`s
Plásmido Ti
• contiene la información de 196 genes, de los cuales 195 son traducidos a proteínas, tan
solo el 19% de su contenido no codifica proteínas.