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Mejora molecular 3: 161–168, 1997. c 1997 Editores 161

académicos de Kluwer. Impreso en Bélgica.

La resistencia derivada de patógenos proporciona a la papaya una protección eficaz.

contra el virus de la mancha anular de la papaya

Suwenza Lius 1, Richard M. Manshardt 1; , Maureen MM Fitch 3, Jerry L. Slightom 4,

John C. Sanford 5 y Dennis Gonsalves 2
1 Departamento de Horticultura, Universidad de Hawái, Honolulu, HI 96822, EE. UU. (Autor de la correspondencia);
2 Departamento de Fitopatología, Universidad de Cornell, Ginebra, NY 14456, EE. UU.; 3 Departamento de Agricultura de EE. UU.,
ARS, PO Box 1057, Aiea, HI 96701, EE. UU.; 4 Pharmacia & Upjohn Company, Unidad de Biología Molecular, Unidad 7242,
Kalamazoo, MI 49007, EE. UU.; 5 Departamento de Ciencias Hortícolas, Universidad de Cornell, Ginebra, NY 14456, EE. UU.

Recibido el 29 de abril de 1996; aceptado en forma revisada el 26 de noviembre de 1996

Palabras clave: prueba de campo, resistencia derivada de patógenos, potyvirus, PRSV, papaya transgénica

Abstracto

Transgénico Carica papaya plantas (cv. Sunset, R 0 clon 55-1) que lleva el gen de la proteína de la cubierta del virus de la mancha anular de
la papaya (cepa HA 5-1) permaneció asintomático y ELISA negativo durante 24 meses después de la inoculación con Hawaiian
cepas del virus de la mancha anular de la papaya en condiciones de campo. Las plantas de control no transgénicas y transgénicas que carecen del
gen de la proteína de la cubierta desarrollaron síntomas de la enfermedad dentro de un mes después de la inoculación manual o dentro de los
cuatro meses cuando las poblaciones naturales de áfidos eran los vectores del inóculo. El diámetro medio del tronco fue significativamente mayor
en las plantas 55-1 clonadas en comparación con los controles infectados por virus (14,7 cm frente a 9,3 cm después de 18 meses). El brix de la fruta,
la morfología de la planta y la fertilidad de las plantas 55-1 fueron todos normales y no se observaron efectos pleiotrópicos del gen de la proteína de
la cubierta. Estos resultados indican que la resistencia derivada de patógenos puede proporcionar una protección eficaz contra una enfermedad
viral durante una parte importante del ciclo de cultivo de una especie perenne.

Abreviaturas: CP, proteína de la cubierta; CPMP, protección mediada por proteínas de la cubierta; PDR, resistencia derivada de patógenos; PRSV,
virus de la mancha anular de la papaya

Introducción er el mecanismo de resistencia opera a nivel de proteína o

El concepto de resistencia derivada de patógenos (PDR) propone que
un rasgo de patógeno, expresado de manera inapropiada en un
organismo huésped, puede alterar la relación parasitaria y resultar en
resistencia del huésped [15]. La aplicación agrícola más importante de
la PDR es la protección mediada por proteínas de la cubierta (CPMP)
contra las enfermedades causadas por virus de las plantas. En la
década transcurrida desde que se demostró por primera vez el
fenómeno de CPMP [12], numerosas especies de cultivos se han
transformado genéticamente con genes de proteínas de la cubierta
viral con la intención de producir variedades resistentes a virus [7, 8].
Se ha evaluado la resistencia a enfermedades de al menos 17 especies
así transformadas en condiciones de campo que simulan situaciones
comerciales (J. White, comunicación personal). La resistencia ha
oscilado entre cero y la inmunidad, y no siempre ha sido claro si
ARN, o ambos. Sin embargo, todo el trabajo corrobora que la
PDR, basada en la transformación con genes de la proteína
de la cubierta viral, es un método válido y potencialmente
eficaz para controlar las enfermedades víricas en los cultivos.
La gran mayoría de cultivos transformados con genes de
proteínas de la cubierta han sido especies anuales. Esto ha
dejado abierta la cuestión de la idoneidad de este enfoque para
cultivos perennes, que deben mantener la resistencia a los virus
en un rango mayor en condiciones ambientales, presión de
vectores y variación genética en poblaciones de patógenos. La
pregunta es importante para los productores de árboles leñosos
por su valor frutal, maderable y ornamental, que necesitan
formas económicas de controlar las enfermedades virales
durante la vida útil de su cultivo.
Papaya ( Carica papaya L.) es una planta perenne tropical
al cultivo de frutas con un ciclo de producción comercial de
162
unos 3 años. La producción está limitada principalmente por la
susceptibilidad al virus de la mancha anular de la papaya (PRSV),
un miembro de Potyviridae [11, 13], que se transmite de manera
no persistente por los pulgones. El PRSV destruye la capacidad
fotosintética del dosel, lo que conduce a reducciones en la
calidad y rendimiento de la fruta, pérdida de vigor vegetativo y
eventual mortalidad. En Hawái, ha invadido recientemente
importantes áreas de producción en la isla de Hawái y amenaza
con repetir allí la destrucción de la industria de la papaya que
provocó en Oahu hace varias décadas.
[9].
Se han identificado niveles moderados de resistencia
multigénica en el germoplasma de papaya y se han utilizado en
programas de mejoramiento convencionales con éxito limitado
[2, 3, 19]. Otras medidas de control, como la cuarentena y la
erradicación o la protección cruzada con cepas de virus leves,
sólo han proporcionado soluciones temporales o parciales al
problema [18].
Anteriormente, se desarrolló una papaya transgénica con un
alto nivel de resistencia a una cepa hawaiana de PRSV mediante
la transformación de la variedad de papaya hawaiana Sunset con
el gen de la proteína de la cubierta (CP) de una cepa mutante de
PRSV leve [5, 6]. El gen de la proteína de la cubierta expresado en
el transformante resistente (55-1) se aisló de la cepa mutante de
PRSV hawaiana HA5-1 [14], y es muy similar a la de su cepa
virulenta de PRSV hawaiana parental.
[17]. Los clones del transformante 55-1, y otros, se
caracterizaron y evaluaron en condiciones de invernadero
para determinar la utilidad de PDR, primero contra el aislado
hawaiano homólogo, pero virulento, de PRSV.
[6] y posteriormente contra una variedad de aislados de PRSV de
diferentes ubicaciones geográficas [16]. Estos experimentos de
PDR mostraron claramente que las plantas derivadas del
transformante 55-1 son resistentes al aislado virulento de PRSV
hawaiano, pero también revelaron diferentes niveles de
resistencia contra los aislados de PRSV de otras ubicaciones
geográficas. En este documento, informamos las res-
Resultados de un ensayo de campo en el que 55-1R propagado clonalmente 0
las papayas transgénicas y los controles fueron expuestos a
vectores del pulgón ural durante un período de dos años. El alto
nivel de resistencia observado en las pruebas de invernadero
para plantas derivadas de 55-1 fue nuevamente evidente durante
todo el período de la prueba de campo. Este resultado indica
claramente que los transgenes de la proteína de la cubierta serán
eficaces para proteger la papaya del PRSV durante el ciclo normal
de cultivo en Hawai. Además, nuestro trabajo sugiere que la
protección a largo plazo de los cultivos perennes será posible
mediante este enfoque.
Materiales y métodos
Materiales vegetales transgénicos
Las plantas de papaya transgénicas se produjeron a través de
investigaciones previas utilizando métodos de transformación de
bombardeo de microproyectiles [5, 6]. Los genotipos de papaya
incluidos en el ensayo de campo consistieron en
que expresa (CP +) transgénico pistilado 'Sunset' R 0 línea
55-1, transgénico pistilado 'Sunset' R 0 línea 62-1 que carecía del
gen de la proteína de la cubierta (CP) y actuó como control
para las plantas CP +, y plántulas no transgénicas 'Sunset'
utilizadas como control para las plantas transformadas. Pruebas
anteriores en condiciones de invernadero mostraron que
R 0 las plantas de la línea 55-1 fueron resistentes tras la inoculación
con un aislado hawaiano de PRSV y que R 0 las plantas de la
línea 62-1 fueron susceptibles [6]. Clones vegetativos de
Estas dos líneas transgénicas fueron producidas para el ensayo de
campo por in vitro micropropagación de puntas de brotes [6].
Diseño experimental
Para determinar qué tan bien se comportaría el PDR en las
condiciones de las plantaciones comerciales con exposición
continua al inóculo de PRSV, se instaló un experimento en un
campo irrigado por goteo en la Estación Experimental
Waimanalo de la Universidad de Hawai a 15 metros de altura en
la costa de barlovento (noreste) de Oahu. El experimento se
organizó como un diseño de parcela dividida. Las parcelas
principales consistieron en dos métodos de inoculación de PRSV,
es decir, inoculación manual versus inoculación de áfidos, y las
subparcelas consistieron en tres genotipos de papaya,
incluyendo theR 0 transgénicos 55-1 y 62-1 y las plántulas no
transgénicas 'Sunset'. Cada uno de los seis tratamientos
mentos (2 métodos de inoculación 3 genotipos) fue
replicado diez veces, con una planta de cada tratamiento por
replicado. Las 60 plantas de prueba se dispusieron en diez filas
(repeticiones) con 3 m entre filas y 2 m entre plantas en cada fila.
La población de prueba estaba rodeada de filas fronterizas que
consistían en cv no transgénico. Plántulas de Waimanalo. Las
plantas de semillero no transgénicas se plantaron el 11 de marzo
de 1992, y las plantas transgénicas micropropagadas se
plantaron periódicamente desde el 11 de marzo de 1992 hasta el
1 de julio de 1992, a medida que estuvieron disponibles en el
cultivo de tejidos. Todos los aspectos del ensayo de campo se
ejecutaron de acuerdo con el plan detallado en nuestra solicitud
de liberación ambiental (Permiso APHIS 91-253-01).
Inoculación de plantas con PRSV

El extracto de virus fresco se preparó triturando una parte de

hojas infectadas con PRSV, obtenidas de plantas de papaya
infectadas que crecían en las instalaciones de horticultura de la
Universidad de Hawaii, campus de Mauka, en dos partes (p / v) de
tampón fosfato 0,1 M pH 7,0 como describe Zee [19 ]. Una
pequeña cantidad de Carborundum (grano 320), ca. 1: 100 (p / v),
se mezcló completamente con el extracto, y las tres hojas más
jóvenes, completamente expandidas, de cada planta se
inocularon frotando suavemente las superficies de las hojas con
un mortero pequeño sumergido en extracto. Cinco minutos
después de la inoculación, las hojas se enjuagaron con agua para
evitar daños por sal.
Las hileras fronterizas y la mitad de las parcelas principales
se inocularon manualmente con PRSV el 8 de julio de 1992, y las
plantas asintomáticas se volvieron a inocular el 28 de julio.
1992. La otra mitad de las parcelas principales no fueron
Figura 1. Mapa de campo del ensayo de papaya transgénica en Hawai, julio
inoculadas, pero fueron monitoreadas para registrar la
de 1992 a julio de 1994. A, inoculación de pulgón; M, inoculación mecánica;
respuesta de los diferentes genotipos de papaya a la inoculación 1, CP + cv transgénico. Clon Sunset 55-1; 2, CP transgénico cv. Clon
por poblaciones naturales de áfidos vectores. Sunset 62-1; 3, cv. Plántulas al atardecer; o, plantas en hileras
fronterizas no transgénicas.

Evaluación de los síntomas de PRSV

Las evaluaciones de los síntomas se llevaron a cabo a intervalos de

aproximadamente dos semanas durante los primeros cuatro meses
del ensayo de campo y el 11 de noviembre de 1992, el 9 de febrero de
1993, el 13 de abril de 1993, el 8 de septiembre de 1993, el 3 de enero
de 1994 y el 4 de julio de 1994. Gravedad de la enfermedad por PRSV
Los síntomas se registraron usando una escala de calificación, pero
las claras diferencias visuales en los síntomas entre las plantas de
prueba (síntomas de PRSV asintomáticos versus normales) hicieron
innecesario el análisis estadístico.
Además, se obtuvo una medida acumulativa de la gravedad de la
enfermedad por PRSV midiendo el diámetro del tronco a 45 cm sobre
el nivel del suelo. Esta variable refleja el efecto de la infección por
PRSV sobre la tasa de crecimiento o vigor de los árboles.
Ensayos ELISA para la detección de PRSV
También se utilizaron ensayos de inmunoabsorción ligados a enzimas
(ELISA) para detectar y con fi rmar las infecciones por PRSV en el
campo. Se recolectaron muestras de hojas de todas las plantas de
prueba en las mismas fechas en que se calificaron los síntomas del
PRSV. La presencia de PRSV en los tejidos de las hojas se determinó
mediante ELISA sándwich de doble anticuerpo (DAS-ELISA) como
describen Clark y Adams [1]. Se utilizaron anticuerpos policlonales
contra PRSVHA 5-1 para detectar PRSV en plantas infectadas, incluidas
plantas transgénicas 55-1 CP +, ya que ensayos anteriores habían
revelado que los anticuerpos policlonales no reaccionaban de forma
cruzada a niveles detectables con el
producto de la expresión de CP transgénica [4] en R 0 plantas,
pero respondió positivamente solo cuando una planta fue PRSV-
infectado. Absorbancia a 405 nm (A 405) se registró después
de un mínimo de una hora de incubación del sustrato
a temperatura ambiente. Dentro de cualquier prueba, los valores
de absorbancia se consideraron reacciones positivas cuando
excedieron el doble del valor de los controles sanos de papaya no
transformada.
Ensayo histoquímico GUS
Tinción histoquímica con glucurónido de 5-bromo-4-
cloro-3indolilo ( X-gluc) se empleó sustrato para analizar
la expresión de GUS [10]. Se observó un precipitado azul
en los tejidos que expresan actividad GUS después de la
incubación a 37 ° C durante 1 a 10 h. Los tejidos de las
hojas se lavaron varias veces con etanol al 95% para
extraer la pigmentación de la clorofila y mejorar la
visualización del precipitado azul.
Ensayo ELISA NPT II
Expresión de la kan El gen se ensayó usando un kit ELISA
NPT II (5 Prime-3 Prime, Boulder, CO), de acuerdo con las
instrucciones del fabricante.
1
Figura 2. Efecto del gen CP y el método de inoculación sobre el
desarrollo de síntomas visibles de PRSV en condiciones de campo.
Características reproductivas y frutales de plantas
transgénicas.
A partir de septiembre de 1992, las plantas con flores del
clon pistilado 55-1 se polinizaron manualmente con
CV. Sunset o cv. Polen Kapoho y embolsado para evitar que el
polen perdido contamine los cruces. Los frutos maduros se
cosecharon de 4 a 6 meses después, comenzando a fines de
enero de 1993, y se evaluó su calidad midiendo el porcentaje de
sólidos solubles totales con un refractómetro. Se recolectaron
semillas y se utilizó la cantidad de semillas regordetas
producidas en los frutos polinizados manualmente para evaluar
la fertilidad de los clones pistilados 55-1 y 62-1 en relación con los
pistilados no transgénicos sanos.
CV. Plantas al atardecer. También se cosecharon de vez en cuando
frutos de polinización abierta de plantas de la línea 55-1 para evaluar
la calidad.
Resultados
Resistencia de R 0 línea 55-1 en condiciones de campo
Nuestras pruebas iniciales de resistencia al PRSV en plantas de
papaya transgénicas se llevaron a cabo en el invernadero en
clones de cuatro CP + R 0 plantas. Los resultados mostraron que
solo las plantas clonales derivadas del transformante 55-1
permaneció uniformemente libre de enfermedades. Estos
experimentos duraron hasta seis meses después de inoculaciones
mecánicas únicas o repetidas con el aislado virulento homólogo de
Hawaii de PRSV [6]. Sin embargo, todavía estaba en duda el nivel de
resistencia en condiciones de campo, especialmente cuando las
plantas estaban expuestas a vectores de áfidos virulíferos durante
largos períodos de tiempo. En consecuencia, se llevó a cabo una
prueba de campo de dos años en un área con un pozo
desarrollaron PRSV epifitótico para determinar el grado de
resistencia al PRSV en plantas transgénicas 55-1 en relación con
las plantas de control que carecen del gen CP (Fig. 1).
Todos los controles de PC y las filas fronterizas que se inocularon
mecánicamente desarrollaron síntomas de PRSV dentro de los 20 días
posteriores a la inoculación en el campo (Fig. 2). Los controles de PC
que se dejaron para la inoculación por pulgones tardaron más en
infectarse, pero todos desarrollaron síntomas dentro de 2 a 4 meses
después de que las otras plantas en el experimento se habían
inoculado manualmente (Figs. 2 y 3A). Si bien el método de
inoculación afectó claramente la tasa de desarrollo de los síntomas de
la enfermedad entre los controles de PC, no tuvo un efecto
significativo sobre la gravedad de la expresión de los síntomas en
ninguna fecha de evaluación durante el experimento (datos no
mostrados).
El gen CP tuvo un efecto muy significativo sobre la expresión
de los síntomas del PRSV entre las plantas de prueba. Las plantas
de control de PC, sean transgénicas o no transgénicas, fueron
igualmente susceptibles a la infección viral, desarrollando
síntomas de PRSV leves a moderados durante los primeros
meses del experimento. Cerca del final del primer año del
ensayo, las plantas de PC debilitadas por PRSV comenzaron a
morir de infecciones fúngicas de las raíces, lo que refleja una
capacidad reducida para eliminar la humedad del suelo de la
zona de las raíces a través de la transpiración (Fig. 3B). Dos años
después de la primera inoculación manual, ninguno de los
controles de PC seguía vivo, todos habían sucumbido a una
combinación de PRSV y enfermedades de la pudrición de la raíz.
En marcado contraste, el CP + R 0 clon 55-1 funcionó
excepcionalmente bien en el campo, mostrando virtudes
inmunidad a la infección por PRSV durante el transcurso de 2
años del experimento (Fig. 3C). De hecho, la distinción entre
plantas CP + y CP con respecto a la reacción del virus fue tan
obvia que, aunque todas las plantas fueron clasificadas por
síntomas de enfermedad durante el experimento, no fue
necesaria ni se informó aquí ninguna evaluación cuantitativa
de la gravedad de la enfermedad. El moteado ocasional de
hojas menores en las copas de algunas plantas CP + fue
responsable de ligeras desviaciones de una condición
completamente asintomática en varias fechas de evaluación,
pero el moteado fue transitorio y no hubo evidencia ELISA de
que fuera causado por PRSV. Al final de la prueba, 12 de las
20 plantas de CP + estaban todavía vivas y sin síntomas de
PRSV, ocho plantas murieron durante los últimos seis meses
del experimento debido a la pudrición de la raíz.
Las pruebas ELISA realizadas en cada planta de la
población de prueba en cada fecha de evaluación
confirmaron el carácter resistente del clon 55-1 de CP +. En el
transcurso del experimento, el clon 55-1 tuvo lecturas de
ELISA que variaron de 0,000 a 0,084, en contraste con el CP.
166
Figura 3. A. Vista de R 0 ensayo transgénico en diciembre de 1992, cinco meses después de la primera inoculación. Las marquesinas de color verde oscuro son del clon 55-1 de
CP + transgénico, en contraste con las marquesinas cloróticas del clon 62-1 de CP transgénico y el cv no transgénico. Plántulas al atardecer y filas fronterizas. B. mayo
1993, diez meses después de la primera inoculación mostrando plantas de CP + clon 55-1 y controles de CP supervivientes. C. Planta infectada con PRSV del clon CP 62-1
(derecha) y planta sana del clon CP + 55-1 (izquierda) en diciembre de 1992.
trols, que tenían lecturas de ELISA que oscilaban entre 0,157
y 2,138.
La única excepción a la inmunidad contra PRSV demostrada
por el clon 55-1 fue la aparición peculiar de síntomas de PRSV en
pequeñas ramas laterales de dos árboles diferentes. Una sola
rama de aproximadamente 1 metro de altura en el tronco
principal de cada planta produjo síntomas de follaje espontáneo,
en un caso aproximadamente 11 meses después del inicio del
experimento y en el otro caso aproximadamente 21 meses
después del experimento. Los síntomas persistieron en las
ramas, que dieron positivo en PRSV por poli
ELISA clonal (A 405 = 1: 586 y 1.977), GUS positivo por
ensayos de x-gluc y NPT II positivo por ELISA, pero
los síntomas no se propagaron a otras partes de las plantas, que
permanecieron libres de PRSV.
Efecto del gen CP sobre el crecimiento, la calidad de la fruta y la
fertilidad en condiciones de enfermedad.
La resistencia al PRSV proporcionada por el gen CP
influyó positivamente en otras características del clon
55-1 en presencia del virus. Aunque no hubo controles
sanos para la comparación en este ensayo, las plantas CP
+ 55-1 parecieron crecer normalmente durante la
duración del experimento, en contraste con los controles
CP infectados. Hubo un efecto muy significativo (
PAG
0:01) del gen CP sobre el vigor del árbol, según lo determinado por las
<
pruebas t de diámetro medio del tronco a 45 cm sobre el nivel del suelo (Fig.
4). La circunferencia del tronco de las plantas 55-1 continuó aumentando
durante todo el ensayo, mientras que en los controles de PC dejó de
agrandarse después de los primeros siete meses.
La evaluación de la calidad de la fruta también mostró que el
clon 55-1 de CP + fue superior a las plantas de control de CP en
condiciones de enfermedad. El promedio de sólidos solubles
totales (TSS) de 47 frutos del clon 55-1 fue 13.1%, que fue
significativamente más alto que el TSS promedio (11.3%) de seis
frutos recolectados del clon de control 62-1.
La fertilidad de 55-1, un clon pistilado, fue similar a la
esperada para plantas sanas no transgénicas, según lo
determinado por la producción de semillas en frutos polinizados
manualmente.
Discusión
La historia de la agricultura puede verse como la historia de la
protección de las plantas para beneficio humano, una actividad
cultural que ha pasado desde el menor estímulo de especies
útiles en paisajes silvestres hasta sofisticadas manipulaciones de
plantas de cultivo domesticadas para prevenir su aniquilación
por plagas y enfermedades. En la última década, la tecnología de
la ingeniería genética ha aumentado tanto la precisión del
manejo de genes como el tamaño del acervo genético potencial,
lo que ha generado nuevas posibilidades para la protección de
cultivos. El presente trabajo describe el primer ensayo de campo
a largo plazo diseñado para probar la eficacia de la PDR
modificada genéticamente como tecnología para controlar una
enfermedad viral de importancia económica en una planta de
cultivo perenne.
El alto nivel de resistencia demostrado por las plantas CP +
en este ensayo fue sorprendente, especialmente cuando se
compara con la efectividad limitada reportada para estrategias
de control de PRSV alternativas como la protección cruzada
[18] y la tolerancia genética al PRSV identificada en el
germoplasma de papaya [3, 19]. Durante el período de dos años
del experimento, las plantas de prueba fueron sometidas tanto a
la inoculación mecánica como al ataque constante de
poblaciones de áfidos virulíferos. Al final de la prueba, todas las
plantas de control habían muerto por los efectos combinados del
PRSV y un complejo de enfermedades de la pudrición de la raíz
por hongos, mientras que el 60% de las plantas CP + todavía
estaban vivas y sanas. Se registró que la mayoría de las plantas
de CP + que murieron sufrieron daños en sus sistemas de raíces
durante un período de clima ventoso, lo que provocó que se
infectaran con la pudrición de las raíces por hongos.
El efecto protector del gen CP también se reflejó en un
mayor contenido de sólidos solubles totales en frutos y en un
crecimiento constante del tronco durante todo el período de
prueba, en comparación con los controles CP que fueron
inferiores en términos de calidad de fruto y vigor del árbol.
Las implicaciones de estos resultados para la producción
de papaya hawaiana son muy claras y positivas. La papaya
'Sunset', que se transformó para producir la planta 55-1
resistente al PRSV, es una variedad ginodioica, de carne roja
y de calidad comercial que fue desarrollada por la Facultad
de Agricultura Tropical y Recursos Humanos de la
Universidad de Hawai. Actualmente se está cultivando en
grandes superficies en Brasil para uso doméstico y

Figura 4. El efecto de la resistencia derivada de patógenos en el tronco de la papaya
El diámetro bajo condiciones de campo fue altamente significativo (
PAG
<
en cada fecha de observación.
Mercados europeos. It y F resistente a virus 1 híbridos, que
ahora se producen por métodos convencionales a partir de
cruces entre 55-1 y otras líneas de papaya, prometen eliminar la
amenaza de un desastre de PRSV que ha estado amenazando a
la industria de la papaya hawaiana en los últimos años. Los
cultivares de papaya transgénica con resistencia al PRSV
permitirán a los productores recuperar las tierras perdidas por la
producción en Oahu y la isla de Hawai debido a la infestación del
virus.
Es menos probable que la línea 55-1 sea importante como
fuente de resistencia al PRSV en otras regiones del mundo donde
existen diferentes cepas geográficas de PRSV. Tennant
et al. [ 16] han demostrado que, si bien la resistencia en 55-1
es muy eficaz contra cepas homólogas de PRSV de las islas
hawaianas, tiene poca o ninguna utilidad contra cepas
heterólogas originarias de otras regiones. Las cepas de
Sudamérica, Jamaica, Asia y Australia superaron fácilmente
la resistencia de las plántulas 55-1 en las pruebas de
detección en invernadero con aislados de PRSV de una
colección mundial mantenida en Ginebra, NY.
A pesar de los resultados alentadores del ensayo de campo
de dos años, la estrecha especificidad de resistencia en 55-1
implica que será vulnerable a variantes de cepas que pueden
introducirse involuntariamente en Hawai desde el extranjero o
pueden generarse mediante mutaciones en poblaciones de virus
locales. La utilidad a largo plazo de este gen puede depender de
que se despliegue en combinación con otros genes de resistencia
derivados del PRSV que todavía están en desarrollo, de modo
que se pueda minimizar la presión selectiva que ejerce sobre las
poblaciones de virus locales.
El mecanismo por el cual el gen CP protege al 55-1 de la
enfermedad viral no se comprende completamente. La falta
de síntomas de PRSV en las plantas CP + sugiere alguna
forma de inmunidad, pero la aparición espontánea y no
sistémica de los síntomas del virus en el lado
ramas de dos plantas de CP + durante la prueba de dos años
167
hace que esta interpretación sea cuestionable. La posibilidad
que el quimerismo en el 55-1 R propagado clonalmente 0
las plantas podrían ser responsables parece remoto, ya que el
el tejido foliar anómalo infectado con PRSV expresó claramente los
genes marcadores de transformación GUS y NPT II. El silenciamiento
del gen CP a través de la metilación o la mutación de la secuencia del
ADN son posibles explicaciones, pero también puede serlo alguna
forma de falla de la protección frente al virus inducida por el estrés. La
última hipótesis está algo apoyada por el hecho de que una de las
plantas CP + con una rama lateral infectada se voló al principio del
ensayo y después de la recuperación creció más lentamente que otras
plantas debido a un sistema radicular debilitado. Las cuestiones de
0:01)
mecanismo pueden ser más fáciles de abordar en generaciones
posteriores después de que se hayan analizado las respuestas a
enfermedades de las plantas en las progenies producidas
sexualmente.
Expresiones de gratitud
Agradecemos la ayuda del Dr. John Hu del Departamento de
Fitopatología de la Universidad de Hawái por proporcionar
anticuerpos policlonales contra PRSV para el trabajo en
Hawái. Esta investigación fue apoyada, en parte, por el
Centro Cornell de Tecnología Avanzada (CAT) en
Biotecnología, que es patrocinado por la Fundación de
Ciencia y Tecnología de Nueva York y Socios Industriales, y
por el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos
bajo la Beca Especial CSRS 88-34135 -
3607, gestionado por el Grupo Asesor de la Cuenca del
Pacífico (PBAG). Este documento es No. 4209 en la serie de
revistas del Instituto de Agricultura Tropical y Recursos
Humanos de Hawaii.
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