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Bioqumica ejercicios cintica enzimtica

TALLER BIOQUIMICA
CINETICA ENZIMATICA

CINTICA ENZIMTICA
RESPONDA:
1. Qu se entiende por velocidad mxima (Vmax) de una reaccin enzimtica?

Rta: Es la actividad mxima que alcanza una concentracin enzimtica de substrato y una enzima en
particular.

La Vmax es un parmetro cintico importante y en una grfica esta velocidad mxima es el punto alto de
una curva parablica en donde toda la reaccin se est llevando a cabo en un tiempo determinado.
Se obtiene cuando la velocidad de reaccin se hace independiente de la concentracin de substrato,
cuando esto ocurre la velocidad alcanza un valor mximo. Este valor depende de la cantidad de enzima
que tengamos.

2. Qu se entiende por velocidad inicial (v) de una reaccin enzimtica?

Rta: Es la velocidad al comienzo de la reaccin para una determinada concentracin de substrato o se


entiende como la formacin de producto en un tiempo.

En una reaccin catalizada por una enzima, al principio hay una determinada concentracin de substrato
en el medio de reaccin, pero conforme transcurre la reaccin, el substrato, por la accin de la enzima, va
transformndose en producto, por lo que va disminuyendo progresivamente su concentracin y, al
disminuir la concentracin de substrato tambin disminuye la velocidad de reaccin. Por esta razn, para
indicar la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se utiliza el trmino velocidad inicial (V0) que
indica la velocidad al principio de la reaccin antes de que disminuya la concentracin de substrato

3. Calcule el valor de Km cuando v = 1/2 de V. Deduzca una definicin de Km basado en este resultado.

Rta: El valor de Km es un valor igual al sustrato.

4. Qu relacin existe entre la concentracin de la enzima y la velocidad mxima (V) de la reaccin?


Influye la concentracin de la enzima sobre el valor del Km? Haga una grfica aproximada de la
velocidad en funcin del sustrato (S) de dos preparaciones de una misma enzima de las cuales una
tiene el doble de concentracin de la otra. Indique claramente en los valores arbitrarios la Km y la V en
ambos casos.

Rta: La velocidad mxima es dependiente de la concentracin de enzima y si se aumenta la concentracin


de enzima es el doble la curva ser el doble, pero Km es constante para ambos casos
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5. Qu importancia tiene la determinacin del Km en una enzima?

Rta: La constante de Michaelis (Km) nos indica la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de
reaccin es la mitad de la velocidad mxima. La Km tambin indica la afinidad que posee la enzima por el
sustrato.
Cuanto menor sea la Km menor ser la cantidad de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima, por lo que mayor ser la afinidad del enzima hacia ese sustrato.

6. Puede una enzima tener diferentes Km para distintos sustratos?

Rta: Si, porque va depender del sustrato la afinidad o compatibilidad de la enzima frente a sustrato y una
enzima puede ser ms compatible con un sustrato que con otro.

7. En qu unidades deben expresarse las variables que se han medido para la determinacin del Km de
una enzima?

Rta: Las unidades de las variables que se han medido para la determinacin de km van hacer las mismas
del sustrato. Puede ser en mM, moles, depende de cmo me den las concentraciones del sustrato.

8. Cmo debe tabular sus resultados para calcular el Km de una enzima por el mtodo de Lineaweaver-
Burk (recprocos)?

Rta: 1/[S] y 1/vo

EJERCICIOS

1. Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reaccin catalizada por una
enzima hipottica son:

[S] (moles) V
( M/min)
5 x10 -2 0,25

5 x10 -3 0,25

5 x10 -4 0,25

5 x10 -5 0,20

5 x10 -6 0,071

5 x10 -7 0,0096

a. Cul es la velocidad mxima para esta reaccin?

Si miramos la tabla podemos ver, si vamos de menor (5x10-7) a mayor (5x10-2) las velocidades van
aumentando hasta que se alcanza la concentracin de 5x10-4 , en la cual por mucho que aumente la
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concentracin de sustrato la velocidad es constante, es decir sigue siendo la misma. Lo que puedo deducir es
que.
Vmax = 0.25 mol/min, ya que de 5x10-4 no aumenta.
Si no se aumenta la velocidad de enzima la velocidad va hacer esta.

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b. Por qu la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10 M

Por mucho que aumente la concentracin de sustrato la velocidad va seguir siendo la misma esto
porque, no hay enzima.
Porque todas las enzimas se encuentra transformando el sustrato.

-4
c. Cul es la concentracin de enzima libre para una [S] de 5x10 M?

Cero, todos los enzimas se encuentran ocupados transformando el sustrato en producto, a esa [S] se da
la Vmax.

d. Cul es el Km de la enzima?

La constante de Michaelis es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de la reaccin es


velocidad mitad de la mxima.
Empleando la ecuacin de Michaelis VO = Vmax [S] / Km + [S] despejo mi incgnita que es la Km.
Para resolver el problema podemos escoger de la tabla cualquier velocidad 0.20, 0.071 o 0.0096 con su
respectiva concentracin de sustrato, porque mi Vmax la tengo que es de 0.25.

V = 0.071 mol/min = 0.071x10-6 moles/l


[S]= 5x10-6
Km = Vmax [S] / VO + [S]
Km = 3.5x10-6 moles/l
e. Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10 -6 y [S]=1x10-1

Se resuelve de la misma manera que el anterior pero aqu me estn pidiendo la V o.


Empleamos de nuevo la ecuacin de Michaelis VO = Vmax [S] / Km + [S] y sabiendo la Km y Vmax

Vmax =0.25 mol/min


Km = 3.5x10-6 moles/l
[S]= 1x10-6 una VO = 0.055 mol/min
[S]= 1x10-1 una VO =0,24 mol/min

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2. En una enzima la constante de afinidad vale 4,5 x10 M y la velocidad inicial en un punto es
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10mmol/L min cuando la concentracin del sustrato es de 2,8x10 M

a) Calcule la velocidad mxima.


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Empleando la ecuacin de Michaelis VO = Vmax [S] / Km + [S]


Vmax = VO (Km + [S]) / [S]
Vmax = 10 (4,510-5+ 2,8x10-4)/2,8x10-4
Vmax = 11.6 mmol/Lmin
3. En base a los siguientes datos, calcular el Km y Vmax, segn la representacin de los dobles inversos.
[S] Actividad
(M) (M/min)
2,1x10-5 0,67
2,5x10-5 0,75
3,3x10-5 0,91
5,0x10-5 1,16
1,0x10-4 1,56
1,5x10-4 1,79
2,0x10-4 1,92
3,0x10-4 2,10
5,9x10-4 2,27
1,4x10-3 2,50

4. Se estudia la cintica de una enzima en ausencia y presencia de un inhibidor A, a una concentracin 10


mM. La velocidad inicial viene dada en funcin de la concentracin de sustrato. Los datos obtenidos son:
[S] V Sin inhibidor Inhibidor A
(M) M/min M/min.
1.25 1.72 0.98
1.67 2.04 1.17
2.50 2.63 1.47
5.00 3.33 1.96
10.00 4.17 2.38

a. Determina Vmax y Km en ausencia y presencia del inhibidor


b. Qu tipo de inhibicin se produce? Argumente la respuesta
c. Calcula la constante de disociacin (Ki) de la reaccin de inhibicin.
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1.2

1 y = 0.8582x + 0.3369

0.8

0.6 1/Vo
y = 0.4843x + 0.1951
1/Vi
0.4

0.2

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

Sin inhibidor
Vmax = 1/b Vmax = 1/ 0.1951 Vmax = 5.13 Mm/min
Km = Vmax * m Km = 5.13 x 0.4843 Km = 2.48 Mm
Con inhibicin
Vmax = 1/b Vmax = 1/ 0.3369 Vmax = 2.97 Mm/min
Km = Vmax * m Km = 2.97 x 0.8582 Km = 2.55 Mm
Comparando
Vmax sin inhibidor > Vmax con inhibicin
Km sin inhibicin Km con inhibicin
Por lo tanto es una inhibicin no- competitiva
[] 10
Ki = sin = 5.13 = 13.75
1 1
2.97

5. En un cultivo de bacterias, la velocidad de reaccin de un enzima fue de20g/min para una concentracin
de sustrato de 3 mM. Si la concentracin de sustrato es igual o superior a 7 mM, la velocidad no supera los
40g/min. Al aadir un inhibidor competitivo, la velocidad de la reaccin fue de 20 g/min para una
concentracin de sustrato de 8 mM.
a. Calcular: la Vmax
Si Para [S] 7 Mm la velocidad es de 40 g/min entonces la Vmax = 40 g/min
Si la concentracin de sustrato es igual o superior a 7 Mm, la velocidad no va a superar los 40 g/min.
Esto significa que se ha alcanzado la Vmax desde el momento en el cual por mucho que aumentemos la
[S] la velocidad no va a variar, y como me dice que a partir de 7 mmoles de concentracin de sustrato
la velocidad sigue siendo la misma por lo tanto la Vmax es 40 g/min.
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La nica manera de aumentar la velocidad mxima no va a depender de la concentracin de sustrato.
Si yo quiero aumentarla lo que tengo que hacer es aumentar la cantidad de enzimas que hay en este
proceso. Porque toda la enzima se encuentra ocupada transformando el sustrato en producto.
b. la Km
El enunciado nos dice que cuando la velocidad de reaccin de una enzima es de 20 g/min para una
concentracin de sustrato de 3 mM. Utilizando la ecuacin de Michaelis calculo la Km
VO = Vmax [S] / Km + [S]
Vo = 20 g/min
Vmax = 40 g/min
[S] = 3 mM
Despejando Km
Km = 3 Mm
c. la Ki para este enzima, sabiendo que la concentracin de inhibidor aadido es de 6mM.
Tenemos que tener en cuenta que tipo de inhibicin tengo en el problema y el enunciado me dice que es
de tipo competitivo.
Entonces lo que debemos de saber por la teora es que Vmax del proceso en presencia o ausencia de
inhibidor es la misma, lo nico que tengo que tener en cuenta es que si quiero alcanzar la Vmax en
presencia de inhibidor tengo que aumentar la concentracin de sustrato.
En los dos procesos la Vmax va hacer 40 g/min y por lo tanto la mitad de Vmax va hacer 20 g/min.
El enunciado me dice tambin que la velocidad de reaccin fue de 20 g/min para una concentracin
de sustrato de 8 mM, entonces puedo aplicar la ecuacin de Michaelis para calcular Km en Presencia
de inhibicin.
20 = 40 x 80 / Km x 8
Km = 8 mM
Y con el Km puedo calcular Ki
Km = 8 mM
[I] = 6 mM
Km = 3 Mm en ausencia de inhibidor
Km = 1 + ([I]/Ki) / Km
Ki = 3,6 m M

6. En experimentos de laboratorio, se utilizaron dos decarboxilasas (enzima A y enzima B) obtenidas de


diferente microorganismo (ver tabla).
a. Decida cual enzima demuestra un mayor coeficiente de especificidad, (Vmax/ Km).

Enzima B
[S] Velocidad
M M/min
0.005 0.3962
0.005 0.3857
0.01 0.6163
0.01 0.6413
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0.05 1.5606
0.05 1.5689
0.1 1.9862
0.1 1.7909
0.25 2.2011
0.25 2.2047

1/Vmax = 0.4323 Km/ Vmax = 0.0108


1/0.4323 = Vmax Km/2.31 = 0.0108
Vmax = 2.31 Km = 2.31 x 0.0108
Km = 0.024

3.5
Enzima A
[S] Velocidad 3 y = 0.0005x + 0.4223
M M/min 2.5
0.0002 0.3373
0.0002 0.3364 2
0.0005 0.6945 1.5 Series1
0.0005 0.6957 Linear (Series1)
0.001 1.0764 1
0.001 1.1407 0.5
0.005 1.9636
0
0.005 1.7706
0 2000 4000 6000
0.01 2.0641
0.01 2.0751

1/Vmax = 0.4223 Km/ Vmax = 0.0005


1/0.4223 = Vmax Km/2.36 = 0.0005
Vmax = 2.36 Km = 2.36 x 0.0005
Km = 0.0018
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7. En los siguientes grficos se muestra la cintica de una de la actividad de una enzima A y luego la enzima
inhibida por la accin de una molcula B (fig.n1). En el figura 2 se muestran ambas curvas linealizadas, por el
mtodo de los inversos o de Lineckweber-Burk.

a) Al observar la grfica determine qu tipo de inhibidor es la molcula B para la enzima A


No competitiva
Porque si vemos la grfica el inhibidor est afectando directamente a la enzima y al afectarla va a disminuir
su actividad biolgica o enzimtica y tambin nos muestra cmo va ascendiendo, pero en un momento
dado la curva en un punto dado comienza a moverse horizontalmente donde puedo determinar que entro
al orden cero y encuentro que el Km es el mismo.
b) Determine los parmetros inherentes (Km y Vmax) en la figura 1 para la enzima A y determine Km y
Vmax segn la curva linealizada y compare.

Figura 1.
Vmax = 16 mmol/Lmin
Km = 2,5 mmol/L aproximadamente

Figura 2
Vmax = 1/0.0331 = 30,2 mmol/L min
Km = 30,2 x 0.2653 = 8,01 mmol/L

c) Determine Ki para el inhibidor B si tiene una concentracin de 0.01mmol/L.

V max = 1/ 0.0799 mmol/lLmin Vmax afectada


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Vmax = 12,5