Practica 1

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

DEPARTAMENTO DE FARMACIA
ACADEMIA DE FITOQUIMICA
PRÁCTICA N# 1
ANALISIS FITOQUIMICO PRELIMINAR
OBJETIVO
Detectar cualitativamente a los metabolitos secundarios que contiene una muestra

vegetal, de interés en la medicina tradicional, así como en las áreas de la química,
farmacología, alimenticio, industrial.
PROCEDIMIENTO
EXTRACTO ACIDO
Pesar 1 g de droga fresca y cortar finamente, pasar a un vaso de precipitado de 50 mL y

agregar 10 mL a de HCl al 10%, dejar ebullir por 5 min, enfriar y filtrar. Dividir el filtrado
claro, transparente (no incoloro) en seis tubos de ensaye, uno de los cuales servirá
para comparar los cambios que se presenten entre el extracto ácido original y los tubos
en los que se realicen las reacciones.
Nota: Si el material vegetal es seco, se pesa la mitad.
Tubo 1. Adicionar una gota del reactivo Dragendorff, si el extracto contiene alcaloides
se formará un precipitado marrón.
Tubo 2. Adicionar una gota del reactivo de Mayer, se formará un precipitado blanco o
amarillento que indica la presencia de alcaloides.
Tubo 3. Adicionar una gota del reactivo de ácido silicotúngstico, si hay alcaloides se
formará un precipitado blanco amarillento.
Tubo 4. La adición de una gota de reactivo Sonnenschain da un precipitado amarillo o

azul verde (grupo amino reductor), indica la presencia de alcaloides.
Tubo 5. Añadir una gota del reactivo de Wagner, se formará un precipitado café
naranja si se encuentran presentes los alcaloides
Tubo 6. Servirá como testigo

EXTRACTO ETANÓLICO
Pesar 10 g de planta y cortar finamente, pasar a un vaso de precipitado de 250 mL,

agregar 50 mL de etanol. Calentar a ebullición por 10 minutos, enfriar y filtrar. De este
extracto alcohólico se tomarán las alícuotas correspondientes para la identificación de
los siguientes compuestos:
Nota: Si el material vegetal es seco, se pesa la mitad.
FLAVONOIDES.
Tomar 2 mL del extracto etanólico y diluir con 2 mL de EtOH, dividir en 3 tres

tubos
Etiquetar un tubo de ensaye como tubo testigo con 1mL del extracto diluido.
Reacción de Shinoda.
A 1 mL del extracto adicionar 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado, observar si se

presenta algún cambio de coloración comparando con el tubo testigo.
● Si se observa una coloración roja, se encuentran presentes auronas o chalconas. Si no

hay cambio, adicionar un trocito de magnesio metálico, si:
● Coloración naranja a rojo = flavonas Coloración rojo = flavonoles Coloración azul =

antocianinas
● Coloración púrpura a rojizo = chalconas
Reacción de hidróxido de sodio al 10 %.
Adicionar a 1 mL del extracto etanólico 0.5 mL de hidróxido de sodio al 10%. se

observarán coloraciones de amarillo a rojo.
● Si se encuentran presentes xantonas y flavonas; de café a naranja flavonoles, de

púrpura a rojizo chalconas y azul antocianinas.
● Coloración de amarillo a rojo = xantonas y/o flavonas.

● Coloración de café a naranja = flavonles Coloración de púrpura arojizo = chalconas
● Coloración azul = antocianinas
CUMARINAS
Fluorescencia.
Tomar 1 mL del extracto y adicionar 2 gotas de hidróxido de amonio concentrado e

introducirlo el tubo alcohólico diluido a la cámara de U.V.
● Si se presenta una fluorescencia azul- violeta indica la presencia de cumarinas.
Reacción de Erlich
● En una placa muesca se adicionan 0.5 mL del extracto etanólico y se añaden 2 a 3

gotas del reactivo de Erlich y 1 gota de ácido clorhídrico concentrado que se deja
resbalar por la pared de la muesca.
● Si se encuentran presentes las cumarinas, se forma una coloración naranja

inmediata.
SAPONINAS
Reacción de Liebermann Buchard
En un tubo de ensaye, se adiciona 1 mL del extracto, en seguida agregarle 2 gotas de

anhídrido acético y estratificar con 2 gotas de ácido sulfúrico concentrado (dejándolo
resbalar por las paredes del tubo sin agitar)
● Si se encuentran presentes saponinas esteroidales, se formará una coloración azul o

verde en la interfase.
● Las saponinas triterpenoides dan coloraciones rosa, rojo, magenta o violeta.
Reacción de Rosenthaler
En un tubo de ensaye se adiciona 1 mL del extracto, se le adicionan 2 gotas del

reactivo de Rosenthaler y 0.5 mL del ácido sulfúrico concentrado a estratificar.
Si se encuentran presentes saponinas de tipo triterpenoides se formará una coloración

violeta.
GLUCÓSIDOS CARDIOTÓNICOS
Prueba de Kedde.
Aplicar en una tira de papel filtro una gota de reactivo de Kedde y dejar secar.
Enseguida adicionar una gota del extracto sobre un extremo de la mancha que dejó el
reactivo.
● La formación de coloraciones que van del azul al violeta indica la presencia de

glicósidos cardiotónicos.
Prueba Legal.
En una cápsula de porcelana chica, adicionar 1 mL del extracto, 2 o 3 gotas de piridina,

agregar 1 gota de nitroprusiato de sodio al 0.5% y 4 gotas de hidróxido de potasio al
10%. Mezclar con el agitador de vidrio.
● Si se encuentran presentes glicósidos cardiotónicos, se formará una coloración roja

poco estable.
Prueba de Baljet.
En una placa muesca, adicionar 1mL del extracto y adicionar 3 gotas del reactivo de
Baljet (se prepara mezclando 3 gotas de la solución A y 3 gotas de la solución B al
momento de usarse).
● Se formarán coloraciones que varían del naranja a rojo oscuro, si los glicósidos están
presentes.
QUINONAS
Reacción con hidróxido de amonio.
En una placa muesca adicionar 1 mL de extracto, añadirle una gota de hidróxido de

amonio concentrado
● La formación de una coloración roja que aparece en los 2 primeros minutos se

considera positiva para antraquinonas.
Reacción ácido sulfúrico.
En una placa muesca adicionar 1mL del extracto, agregar 0.5 mL de ácido sulfúrico
concentrado.
● La formación de una coloración roja indica la presencia de antraquinonas.
Reacción de Börntraguer.
En un tubo de ensaye se adiciona 1 mL del extracto con 3 mL de hidróxido de potasio

al 5% calentar a ebullición por 3 minutos, enfriar y extraer entonces con 3 mL de
cloroformo, la fase acuosa se elimina con una pipeta Pasteur, a la fase clorofórmica se
le adicionan 2 mL de hidróxido de potasio al 5%.
● Si la fase acuosa alcalina presenta color rojo indica presencia de benzoquinonas, si es

amarillo-verdosa, adicionar 1 gota de peróxido de hidrógeno al 6%.
● Si la coloración pasa a roja, será positiva para derivados de antrona.
SESQUITERPENLACTONAS
Reacción de hidroximato férrico.
Adicionar 1 mL del extracto a una cápsula de porcelana pequeña, se le adicionan dos

gotas de clorhidrato de hidroxilamina 2 N y una gota de hidróxido de potasio 2 N en
metanol, esta mezcla se calienta a ebullición por 1 o 2 minutos. Enfriar y llevar a pH de
1 con ácido clorhídrico 1 N, enseguida adicionar 1 gota de cloruro férrico al 1%.
● La formación de una coloración roja, violeta o rosa se considera positiva.
EXTRACTO ACUOSO
Pesar 3 g de planta y pasarla a un vaso de precipitados de 100 mL, agregar de 25 a 50

mL de agua, calentar hasta ebullición por 5 minutos, enfriar y filtrar.
Nota. Si el material vegetal es seco se pesa la mitad.
SAPONINAS
Prueba de la altura y estabilidad de la espuma
En un tubo de ensaye colocar 1 mL de extracto y agregarle 1 mL de agua agitar

vigorosamente, medir la altura de la espuma, si mide de 8 a 10 mm y es estable por 30
minutos se le considera positivo.
AZÚCARES REDUCTORES
Se toman 2 mL del extracto acuoso se mide el pH y si es necesario se lleva a pH de

11 con hidróxido de sodio al 5%. Dividir el extracto en 2 tubos:
Tubo 1. Reacción de Fehling:
Adicionar 0.5 mL de la solución A y 0.5 mL de la solución B del reactivo de Fehling y 1

mL de extracto.
Tubo 2. Reacción de Benedict:
Adicionar 0.5 mL de reactivo de Benedict y 1 mL de extracto.
Preparar un blanco de cada reactivo en los cuales, en lugar de extracto, se adiciona

agua. Colocar los 4 tubos en un baño con agua por 15 minutos.
● Sí los azúcares se encuentran presentes, se forman en ambos tubos con extracto un

precipitado de color naranja a rojo ladrillo.
TANINOS
Un mL del extracto acuoso se diluye con 2 mL de agua y se adicionan 3 gotas de

cloruro de sodio al 2%. Calentar a ebullición por 1 minuto, enfriar y filtrar, el filtrado se
divide en 3 tubos de ensaye:
Tubo 1. adicionar 2 gotas del reactivo de gelatina.
● La formación de un precipitado blanco indica la presencia de taninos. Derivados del

ácido gálico.
Tubo 2. adicionar 1 gota del reactivo de cloruro férrico al 1%
● La formación de coloración de azul a negro indica la presencia de derivados del ácido

gálico; coloración verde indica derivados del catecólicos.
Después adicionar una gota de ferrocianuro de potasio al 1%.
● La formación de una coloración azul-verde, verde fuerte indica la presencia de

compuestos fenólicos.
Tubo 3. Permanecerá como testigo.
GLICÓSIDOS CIANOGENÉTICOS
Reacción de Gignard.
En un tubo de ensayo pasar 0.5 mL del extracto acuoso y adicionarle 1 mL de ácido

clorhídrico al 10% y 1 mL de cloroformo. Calentar el tubo a baño María colocando en la
boca del tubo una tira de papel filtro impregnado con reactivo de picrato de sodio, tapar
la boca del tubo con algodón.
● La formación de una mancha color rosa a rojo indica la presencia de estos glucósidos.
RESULTADOS
ALCALOIDES
REACTIVO PRECIPITADO O PRECIPITADO

COLOR O
TEÓRICO COLOR
EXPERIMENTA
L
ALCALOIDES
Reactivo Dragendorff Precipitado marrón
Precipitado blanco
Reactivo de Mayer o amarillento
Reactivo de Precipitado
ácido blanco amarillento
Silicotúngstico
Reactivo de Precipitado amarillo o
Sonnenschain azul verde
Reactivo de Wagner Precipitado café naranja
ETANOL
REACTIVO PRECIPITADO O COLOR PRECIPITADO O
TEÓRICO COLOR
EXPERIMENTAL
FLAVONOIDES
Reacción de
Shinoda:
auronas o chalconas Color rojo
adición de Mg
flavonas Naranja a rojo
Flavonoles Coloración roja
Flavononas coloración magenta
Reactivo de
hidróxido de sodio
al 10%:
Xantonas y Flavonas Coloración amarillo- rojo
Flavonoles Coloración café - naranja
Chalconas Coloración Púrpura- rojizo
Antocianinas Coloración azul
COUMARINAS
Reactivo de Erlich Coloración naranja
Reacción con hidróxido
de amonio Fluorescencia azul - violeta
SAPONINAS
Reacción de
Liebermann
Buchard
Saponinas Coloració Azul-verde e
esteroidales n n
interfase
Saponinas Coloración rosa, rojo,
triterpenoides magenta o violeta
Reacción de
Rosenthaler
Saponinas Coloración violeta

triterpenoides
GLUCOSID
OS
CARDIOTO
NICOS
Prueba de Coloración
Kedde de azul a
violeta
Prueba de Coloración roja
Legal poco estable
Colora
Prueba de ción
Baljet que
varía
del
naran
ja a
rojo
oscur
o
QUI
NON
AS
Reacción de
hidr
óxid Coloración roja
o de
amo
nio
Reacción
de ácido
sulfúrico
Antraquinonas Coloración roja
Rea
cció
n de
Bör
ntra
guer
Benzoquinona Coloración roja
s
amarillo-
verdosa,
Derivados de adicionar 1
antraquinonas gota de
peróxido de
hidrógeno
al 6% si la
coloración
pasa a roja
SESQUITERP
ENLACTONA
S
Reacción coloración
de rojo, violeta o
hidroximat rosa se
o férrico considera
positiva
EXTRACTO ACUOSO
REACTIVO PRECIPITADO PRECIPITADO

O COLOR O
TEÓRICO COLOR
EXPERIMENT
AL
AZUCARES
REDUCTORE
S
Coloración naranja a
Reactivo de Fehling rojo ladrillo
Coloración naranja a
Reactivo de Benedict rojo ladrillo
TANINOS
Reactivo de gelatina Precipitado blanco
Reactivo de cloruro Azul de Prusia
férrico al 1% verde
Adicionarle una gota de
K3 Fe (CN)4 al 1 % ferricianuro de potasio
Compuestos al 1%. La formación de
fenólicos una coloración azul-
verde
Verde fuerte
CUESTIONARIO
● ¿Cuáles son las ventajas y desventajas del análisis fitoquímico

preliminar?
● ¿Por qué se utilizan diferentes tipos de disolventes para la extracción

de compuestos?
● ¿Cuál es el efecto de la molienda en el proceso de extracción?
● ¿Qué significan resultados falsos- positivos y falsos-

negativos?
● ¿Por qué a veces no corresponden los resultados de la práctica con

los datos de la literatura?
● Explique cuál es la función del testigo.
RESIDUOS Y SU MANEJO
Retirar los trozos de material biológico y colocar en bolsa de papel de estraza,

posteriormente depositar en la basura.
Disolventes orgánicos: Recuperar en frascos individuales para destilar y re-

usar.
Residuos ácidos: Dado que se trata de pequeñas cantidades del orden de

unos cuantos mililitros, se diluye con agua y se vierte en el recipiente de los
residuos acuosos.
PRACTICAS

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ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Detectar cualitativamente a los metabolitos secundarios que contiene una muestra

Pesar 1 g de droga fresca y cortar finamente, pasar a un vaso de precipitado de 50 mL y

Tubo 4. La adición de una gota de reactivo Sonnenschain da un precipitado amarillo o

Tubo 6. Servirá como testigo

Pesar 10 g de planta y cortar finamente, pasar a un vaso de precipitado de 250 mL,

Tomar 2 mL del extracto etanólico y diluir con 2 mL de EtOH, dividir en 3 tres

A 1 mL del extracto adicionar 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado, observar si se

● Si se observa una coloración roja, se encuentran presentes auronas o chalconas. Si no

● Coloración naranja a rojo = flavonas Coloración rojo = flavonoles Coloración azul =

● Coloración púrpura a rojizo = chalconas

Reacción de hidróxido de sodio al 10 %.

Adicionar a 1 mL del extracto etanólico 0.5 mL de hidróxido de sodio al 10%. se

● Si se encuentran presentes xantonas y flavonas; de café a naranja flavonoles, de

● Coloración de amarillo a rojo = xantonas y/o flavonas.

● Coloración de café a naranja = flavonles Coloración de púrpura arojizo = chalconas

● Coloración azul = antocianinas

Tomar 1 mL del extracto y adicionar 2 gotas de hidróxido de amonio concentrado e

● Si se presenta una fluorescencia azul- violeta indica la presencia de cumarinas.

● En una placa muesca se adicionan 0.5 mL del extracto etanólico y se añaden 2 a 3

● Si se encuentran presentes las cumarinas, se forma una coloración naranja

Reacción de Liebermann Buchard

En un tubo de ensaye, se adiciona 1 mL del extracto, en seguida agregarle 2 gotas de

● Si se encuentran presentes saponinas esteroidales, se formará una coloración azul o

● Las saponinas triterpenoides dan coloraciones rosa, rojo, magenta o violeta.

En un tubo de ensaye se adiciona 1 mL del extracto, se le adicionan 2 gotas del

Si se encuentran presentes saponinas de tipo triterpenoides se formará una coloración

● La formación de coloraciones que van del azul al violeta indica la presencia de

En una cápsula de porcelana chica, adicionar 1 mL del extracto, 2 o 3 gotas de piridina,

● Si se encuentran presentes glicósidos cardiotónicos, se formará una coloración roja

Reacción con hidróxido de amonio.

En una placa muesca adicionar 1 mL de extracto, añadirle una gota de hidróxido de

● La formación de una coloración roja que aparece en los 2 primeros minutos se

Reacción ácido sulfúrico.

● La formación de una coloración roja indica la presencia de antraquinonas.

En un tubo de ensaye se adiciona 1 mL del extracto con 3 mL de hidróxido de potasio

● Si la fase acuosa alcalina presenta color rojo indica presencia de benzoquinonas, si es

● Si la coloración pasa a roja, será positiva para derivados de antrona.

Reacción de hidroximato férrico.

Adicionar 1 mL del extracto a una cápsula de porcelana pequeña, se le adicionan dos

● La formación de una coloración roja, violeta o rosa se considera positiva.

Pesar 3 g de planta y pasarla a un vaso de precipitados de 100 mL, agregar de 25 a 50

Prueba de la altura y estabilidad de la espuma

En un tubo de ensaye colocar 1 mL de extracto y agregarle 1 mL de agua agitar

Se toman 2 mL del extracto acuoso se mide el pH y si es necesario se lleva a pH de

11 con hidróxido de sodio al 5%. Dividir el extracto en 2 tubos:

Tubo 1. Reacción de Fehling:

Adicionar 0.5 mL de la solución A y 0.5 mL de la solución B del reactivo de Fehling y 1

Tubo 2. Reacción de Benedict:

Adicionar 0.5 mL de reactivo de Benedict y 1 mL de extracto.

Preparar un blanco de cada reactivo en los cuales, en lugar de extracto, se adiciona

● Sí los azúcares se encuentran presentes, se forman en ambos tubos con extracto un

Un mL del extracto acuoso se diluye con 2 mL de agua y se adicionan 3 gotas de

Tubo 1. adicionar 2 gotas del reactivo de gelatina.

● La formación de un precipitado blanco indica la presencia de taninos. Derivados del

Tubo 2. adicionar 1 gota del reactivo de cloruro férrico al 1%

● La formación de coloración de azul a negro indica la presencia de derivados del ácido

Después adicionar una gota de ferrocianuro de potasio al 1%.

● La formación de una coloración azul-verde, verde fuerte indica la presencia de

Tubo 3. Permanecerá como testigo.

En un tubo de ensayo pasar 0.5 mL del extracto acuoso y adicionarle 1 mL de ácido

REACTIVO PRECIPITADO O PRECIPITADO