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MARCO TEORICO

La tincin de Gram es un mtodo que no tie igualmente todas las


clulas, es un proceso denominado tincin diferencial. La tincin de este
tipo ms extensamente utilizada es la tincin de Gram, denominada as
por el bacterilogo dans Hans Christian Gram, quien la desarrollo.
Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas. Debido a su
importancia en taxonoma bacteriana ya que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias,
describiremos aqu con cierto detalle la tincin de Gram. Las clulas
fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien primero con una solucin
de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son
lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado
todas las clulas, tanto las Gram negativas como las Gram positivas,
estn teidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una
solucin de yodo (I2) yoduro potsico (KI). El ingrediente activo es aqu
el yodo, el yoduro potsico simplemente hace soluble el yodo en agua.
El yodo entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con
el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas Gram positivas como las
Gram negativas se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo
despus de la decoloracin, usando bien alcohol o bien acetona,
sustancias en las que es soluble el complejo yodo cristal violeta.
Algunos organismos (Gram positivos) no se decoloran mientras que
otros (Gram negativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos
tipos de clulas est, por lo tanto, en la resistencia a la decoloracin.
Despus de la decoloracin las clulas Gram positivas son todava
azules, pero las Gram negativas son incoloras. Para poner de manifiesto
las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la
fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram
negativas son rojas mientras que las Gram positivas permanecen azules.
Deben destacarse dos aspectos cruciales de la tincin de Gram:
1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento de
yodo. El
yodo por s solo tiene poca afinidad con las clulas.
2) La decoloracin debe realizarse con poco agua para evitar que
pierdan la
tincin las clulas gram positivas. El proceso de decoloracin debe ser
corto y
es esencial un clculo preciso del tiempo para obtener resultados
satisfactorios. Finalmente, el carcter de gram positivo no es siempre un
fenmeno del todo o nada. Algunos organismos son ms gram positivos
que otros y algunos son gram variables, es decir, unas veces gram
positivos y otras gramnegativos.

La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes


en el laboratorio bacteriolgico.
Microorganismos Gram. Positivos
Las eubacterias Gram. Positivas son clulas con una gruesa pared
celular de peptidoglucano. Ests clulas poseen una membrana
citoplasmtica con fosfolpidos y protenas. Por fuera de la membrana
citoplasmtica se encuentra la pared celular que est compuesta por
una ancha capa de peptidoglicano. A su vez, estas cadenas se
encuentran unidas entre s mediante pptidos, que son pequeas
cadenas de aminocidos que se entrecruzan. Estos puentes peptdico
son caractersticos de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez
cuanto ms completo sea el entrecruzamiento. El peptidoglicano es una
malla porosa que otorga forma y rigidez a la clula, y evita que la clula
estalle en medios hipotnicos. Al ser porosa permite el paso de
nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalticas y
productos de secrecin hacia el exterior de la clula.
Microorganismos Gram Negativos
Las eubacterias Gram. Negativas son clulas con una delgada capa de
peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana
externa. Las clulas se encuentran envueltas por una membrana
citoplasmtica formada por una bicapa fosfolipdica y protenas. Por
encima de esta membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano
que se halla unida a unas lipoprotenas de anclaje que fijan la membrana
externa.
El Mordiente:
El mordiente es una sustancia empleada en tintorera que sirve para fijar
los colores en los productos textiles. La funcin del mordiente es
favorecer la fijacin del colorante en las fibras. Este trmino es usado
principalmente en la industria textil para designar a aquellas sales
metlicas (de aluminio, hierro, plomo) tambin sustancias orgnicas
(casena, gluten, albmina).Tambin existen mordientes que sirven para
fijar colorantes en tinciones biolgicas de clulas animales o vegetales.
Que en esta oportunidad ser para los microorganismos como Bacillus
sp, Staphylococcus sp, y E. coli
La observacin microscpica puede realizarse a partir de una muestra
(examen directo) y se debe tener en cuenta.

1.- Examen al Fresco. (Microorganismos vivos) Se utiliza normalmente


para ver movilidad de las bacterias.
En el caso de hongos y protozoos, permite determinar adems
caractersticas morfolgicas.

6. Fundamente como la Gram positiva mantiene el color


primario.

La tincin de Gram es una tincin diferencial que permite


distinguir bacterias Gram positivas de Gram negativas, que es
posible gracias a la naturaleza fsica de sus paredes celulares. El
peptidoglicano no se tie propiamente, ms bien acta como una
barrera de permeabilidad para evitar la prdida de cristal de
violeta. Durante el proceso las bacterias se tien primero con
cristal y luego se trata con yoduro (lugol) para favorecer la
retencin del colorante. Cuando a continuacin se decolaran las
bacterias Gram positivas con etanol o acetona, se cree que el
alcohol contrae los poros de la gruesa capa de peptidoglicano. En
consecuencia, el complejo colorante-iodo no es eliminado durante
la fase de decoloracin y las bacterias Gram positivas continuaran
de color azul. Por el contrario la capa de peptidoglicano de las
bacterias Gram negativas es muy fina, sin tantos enlaces y con
poros de mayor tamao, adems, tambin es posible que el
tratamiento con alcohol extraiga suficientes lpidos de la envoltura
de las clulas Gram negativas, como para aumentar su porosidad.
Por estos motivos, el alcohol elimina ms fcilmente el complejo
cristal violeta-yodo de las bacterias Gram negativas.
Bibliografa:

Prescott, L.M.; J.P. Harley & D.A. Klein.1999. Microbiologa. Cuarta edicin., Mac GrawHill-Interamericana. Madrid.

Michael T. Madigan 2009. Brock Biologia de los Microorganismos. Duodecima edicin,


Pearson.