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IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVAS

INTRODUCCION

Dentro de las eubacterias existen grupos de bacterias que pueden ser


diferenciados en relacin a la estructura de la pared celular. Para poder
diferenciar a estos grupos no es necesario utilizar complejos sistemas de
identificacin, y basta con un microscopio ptico y unas cuantas soluciones
de colorantes. La forma ms sencilla de iniciar una identificacin del
microorganismo que se desea estudiar es realizar una coloracin o tincin
de Gram. La tincin de Gram es una tincin diferencial porque no todas las
clulas se tien de la misma manera y permite discriminar entre dos
grandes grupos de eubacterias, las eubacterias Gram positivas y Gram
negativas.

IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVAS

1
IDENTIFICACIN DE LAS
BACTERIAS GRAM

POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS


I.

OBJETIVOS
Reconocer los microorganismos Gram positivos y Gram negativos
mediante la coloracin que adquieren luego de realizar la experiencia.

II.

FUNDAMENTO TERICO

BACTERIAS GRAM POSITIVAS


Las Gram positivas son clulas que contienen una membrana citoplasmtica
con fosfolpidos y protenas. Por fuera de la membrana citoplamtica se
encuentra la pared celular que est compuesta por una ancha capa de
peptidoglicano. Este peptidoglicano es una macromolcula gigante formada
por cadenas de un dmero compuesto por N-acetilglucosamina y Nacetilmurmico. A su vez, estas cadenas se encuentran unidas entre s
mediante pptidos, que son pequeas cadenas de aminocidos que se
entrecruzan. Estos puentes peptdicos son caractersticos de las distintas
bacterias y presentan mayor rigidez cuanto ms completo sea el
entrecruzamiento. El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y
rigidez a la clula, y evita que la clula estalle en medios hipotnicos. Al ser
porosa permite el paso de nutrientes desde el exterior y el movimiento de
enzimas catalticas y productos de secrecin hacia el exterior de la clula.
Las bacterias Gram positivas se tien de azul oscuro o violeta por la tincin
de Gram: de aqu el nombre de "Gram-positivas". Esta caracterstica est
ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un
tipo natural de organizacin bacteriana. Son uno de los principales grupos de
bacterias, y cuando se tratan como taxn se utiliza tambin el nombre de
Posibacteria.

IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVAS

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Caractersticas presentes en una bacteria
Gram-positiva:

Membrana citoplasmtica.
Capa gruesa de peptidoglicano.
cidos teicoicos y lipoteicoicos, que sirven como agentes quelantes y en

ciertos tipos de adherencia.


Polisacridos de la cpsula.

anthracis (bastones prpuras) en


una
muestra
de fluido
cerebroespinal.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS


Se tien de un color rosado tenue: de ah el nombre de "Gram-negativas".
Esta caracterstica est ntimamente ligada a la estructura de la envoltura
celular. Son uno de los principales grupos de bacterias y cuando se tratan
como taxn se utiliza tambin el nombre de Negibacteria.
Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran nmero de especies. Algunos
de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Haemophilus
influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas
aeruginosa),

enfermedades

urinarias

(Escherichia

mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens).

coli,

Proteus

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Imagen microscpica de una


bacteria
Gram
Negativa [[Pseudopulmonales
aeruginosa]] (los puntos rosas-

Caractersticas:
Su envoltura celular est compuesta por una membrana citoplasmtica
(membrana interna), una pared celular delgada de peptidoglicano, que rodea
a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared celular de estas
bacterias. Entre la membrana citoplasmtica interna y la membrana externa
se localiza el espacio periplsmico relleno de una sustancia denominada
periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutricin en estas
bacterias.

DIFERENCIAS ENTRE GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVA

IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVAS

1 las Gram-negativas pueden presentar


Tanto las bacterias Gram-positivas como

una capa superficial cristalina denominada capa S. En las bacterias Gramnegativas, la capa S est unida directamente a la membrana externa. En las
bacterias Gram-positivas, la capa S est unida a la capa de pptidoglicano

III.
A)

B)

MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES
Lmina Portaobjetos.
Pipeta.
Propipeta
Asa de siembra.
Piseta.
REACTIVOS
Violeta de genciana.
Lugol.
Safranina.
Alcohol Acetona.
Muestras.

IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVAS

IV.

PARTE EXPERIMENTAL

1. Lavamos y secamos las lminas portaobjetos.


2. Esterilizamos el asa de siembra, colocndola en el mechero Bunsen al
rojo vivo.
3. Sacamos una pisca de cada muestra de la placa Petri con el asa y la
colocamos en el centro de la porta objetos.
4. Adicionamos una gota de agua y con la misma asa la homogenizamos
por toda la placa.
5. Luego la fijamos con el mechero por los lados para sellarlo (ida y vuelta).

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1 genciana (cristal violeta), el cual es el


6. Se adiciona una gota de violeta de

colorante primario. En este paso todas las clulas se tien de morado. Lo


dejamos fijando por un minuto y luego enjuagamos con agua destilada.

7. Se adiciona una gotas de lugol que reacciona con el cristal violeta y


forma un complejo cristal violeta-yoduro.
8. Lavamos con una solucin alcohol acetona el cual acta lavando el
complejo cristal violeta-yoduro de las bacterias Gram negativas. De esta
manera las bacterias Gram positivas continan moradas y las Gram
negativas quedan incoloras.

9. Hacemos la tincin de contraste con safranina.

IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVAS

V.

CONCLUSIONES

Las bacterias Gram positivas se tien de color azul purpura y las


bacterias Gram negativas de color rojo fucsia.

VI.

RECOMENDACIONES
Esterilizar el asa microbiolgica con fuego del mechero bunsen, de
manera cuidadosa
Dejar el ambiente de trabajo limpio y desinfectado.
Utilizar los elementos de proteccin (guantes esterilizados, cofia,
mascarilla) ya que estamos en contacto con microorganismos.

VII.

BIBLIOGRAFA
Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio, Evelyn
Rodrguez Cavallini
http://es.scribd.com/doc/51627228/PRACTICA-3-La-Coloracion-deGram

IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVA Y GRAM NEGATIVAS

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Bacteriologia Clinica- J.K. STRUKERS.
3 Edicin.
Introduccin a la Microbiologa. Tortora. Funke. Case. 9 Edicin.