Tipos de cromatografía

La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la

separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de
cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase
móvil (una muestra constituida por una mezcla que contiene el compuesto
deseado en el disolvente) a través de una fase estacionaria fija sólida. La fase
estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra, de forma que los
componentes la atraviesan a diferentes velocidades y se separan en el tiempo.
Cada uno de los componentes de la mezcla presenta un tiempo característico de
paso por el sistema, denominado tiempo de retención. Cuando el tiempo de
retención del compuesto deseado difiere del de los otros componentes de la
mezcla, éste se puede separar mediante la separación cromatográfica.
Cromatografía sobre geles porosos
Es un tipo de cromatografía que se aplica, fundamentalmente, a la separación de
productos macromoleculares sobre geles hinchables por agua o por cualquier otro
líquido previamente escogido. El fundamento de este tipo de cromatografía
consiste en que al hincharse el gel queda una cadena muy abierta con grupos
terminales generalmente polares que son capaces de adsorber agua u otros
disolventes polares. Según el número de ligaduras entre las grandes cadenas
existe un tamaño crítico (límite de exclusión) de molécula que puede entrar en el
interior del gel, mientras que las 7 moléculas de mayor tamaño pasarán a través
del mismo, con lo que, en principio, se origina una separación de moléculas de
acuerdo con su diferente tamaño. El fenómeno puede considerarse como una
filtración a través de un tamiz molecular y por eso a esta técnica se la llama
también “cromatografía con tamiz molecular” ,así mismo se la ha denominado,
Penetración sobre gel, exclusión molecular y tamizado molecular.

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN

En las cromatografías clásicas, en las que la fase móvil es un líquido que fluye a
traves de un sólido por el efecto de la gravedad para alcanzar alta resolución seria
necesario emplear columnas excesivamente largas, lo que se traduciría en un
desarrollo muy lento de los cromatogramas. Estos inconvenientes se han resuelto
con la cromatografia de alta resolución, en la que se trabaja con pequeñas
columnas, muy empaquetadas y forzando el paso de la fase móvil mediante
elevadas presiones, con lo que se consiguen separaciones muy efectivas en un
plazo muy corto de tiempo. Dependiendo de la fase estacionaria, el mecanismo de
separación puede ser reparto, adsorción, tamaño molecular (geles) e incluso
cambio ionico, aunque los métodos mas utilizados están basados en reparto y
adsorción. El esquema fundamental de un cromatografo de alta resolución esta
constituido por un deposito y un dispositivo de bombeo de la fase móvil que opera
a elevada presión (hasta 500 atm.), un sistema de inyección de la muestra,
columnas resistentes, generalmente e acero inoxidable, rellenas de fase
estacionaria, un detector y un sistema de registro gráfico. La columna y los
detectores van introducidos en termostatos. Los detectores más utilizados en esta
técnica están basados en absorciometria UV y en medida de índices de refracción,
siendo los cromatogramas obtenidos semejantes a los de cromatografia gaseosa
con detector diferencial.

Cromatografía de reparto en columna

Esta técnica es semejante a la mencionada anteriormente en cuanto a materiales
utilizados, métodos operativos, etc. La diferencia reside en la fase estacionaria
utilizada y, en consecuencia, en el mecanismo de separación. En cromatografía de
reparto la fase estacionaria es un líquido, poco miscible con la fase móvil. Los
solutos se distribuyen entre las dos fases dependiendo de su solubilidad en cada
una de ellas, es decir, según su coeficiente de reparto. Aunque el mecanismo
fundamental de la separación es la extracción o reparto, es prácticamente
imposible evitar adsorciones por parte del sólido soporte, por lo que muchas de las
separaciones son empíricas, no pudiendo realizarse un exacto tratamiento teórico.
Los sólidos soportes más utilizados son el silicagel, el polvo de celulosa y la tierra
de diatomeas; menos aplicación tienen el almidón y el relleno de bolas de vidrio.

Cromatografía de capa fina

La llamada “capa fina” consiste en una placa de vidrio, rectangular o cuadrada,
denominadas cromatoplacas, o simplemente placas sobre cuya superficie se
deposita una capa uniforme muy delgada (en ocasiones de algunas micras de
espesor) de una substancia absorvente, casi siempre silicagel o alúmina, en
condiciones tales que resulte uniformemente extendida y suficientemente
adherida. En general, de hace una papilla acuosa con el adsorbente, que se
deposita sobre la placa mediante un aplicador adecuado. Las placas se secan en
estufa para activar la superficie del adsorbente y se encuentran aptas para
efectuar la cromatografía. A las ventajas de resistencia a la temperatura y a los
reactivos agresivos de la cromatografía en capa fina, hay que añadir una mayor
nitidez y sensibilidad de los cromatogramas, así como una mayor rapidez en su
desarrollo. Además, los cromatogramas obtenidos pueden conservarse
indefinidamente y archivarse si se pulveriza la placa revelada con una dispersión
de un plástico transparente y especial donde quede grabado el cromatograma
sobre la película endurecida del plástico, que se separa fácilmente del soporte.
Las aplicaciones son semejantes a las de la cromatografía de papel.
Cromatografía de intercambio iónico
La cromatografía de intercambio iónico (o cromatografía iónica) es un proceso que
permite la separación de iones y moléculas polares basado en las propiedades de
carga de las moléculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de molécula
cargada, incluyendo grandes proteínas, pequeños nucleótidos y aminoácidos. La
solución que debe inyectarse es usualmente llamada "muestra" y los componentes
separados individualmente son llamados analitos. Es usada a menudo en
purificación de proteínas, análisis de agua u control de calidad.