Tema 5: métodos de estudio II.

lunes, 24 de octubre de 2022 13:32

Fraccionamiento celular:
- Centrifugación: sedimentación diferencial; es una técnica de
sedimentación acelerada gracias al uso de la fuerza centrífuga, la
cuál aumenta la fuerza de la gravedad
Utilizando esta técnica podemos ver organulos individuales.

Se puede hacer una purificación adicional, (si se desea una

purificación máxima) a través de un gradiente de densidad (se
creará una separación por densidades).

- Cultivos celulares: células adaptadas a una reproducción in vitro,

controlada, de un proceso que ocurre in vivo.
Problemas: se contaminan fácilmente, etc.
Se usan para el desarrollo de fármacos, etc.
TIPOS:
- Primarios: células que vienen directamente de un tejido;
llega un punto donde dejan de proliferarse.
Vida finita (porque no crecen más); dependen de una
base sólida, poder adherirse a algún sitio (el recipiente
que se utiliza); conserva su fenotipo diferenciado.
Inicialmente formado por una población heterogénea
(superpoblada con fibroblastos).
- Secundario: provienen del primario; son células que han sido
previamente cultivadas (a partir de un primer tejido).
En el primario se crea una monocapa, se pierde la
capacidad de proliferación, y algunas de éstas células
son transferidas a un nuevo medio, (este nuevo medio
es el cultivo secundario).
Vida útil finita.
Dependen del recipiente.
Población de células más homogénea.
- Líneas establecidas: adaptadas a un crecimiento prolongado
in vitro; se puede trabajar durante más tiempo con estas.
- Línea celular finita: a partir de células normales: vida útil
larga; sensescencia (envejecimiento celular).
- Línea celular continua: Células normales "mutadas":
vida infinita; transformación; líneas celulares que se
dividen indefinidamente.
Derivado de un cultivo primario o secundario.
Se "inmortalizan" espontáneamente (mutación) o
adrede.
Población de células homogénea.
Genéticamente muy inestables.

Condiciones:
Se tienen que incubar (bomba de CO2).

Técnicas de localización microscópica de moléculas específicas:

- Citoquímica: permite estudiar la composición química de la célula
(citoplasma), usualmente a través de reacciones colorimétricas.
Reacciones enzimáticas: peroxidasas, fosfatadas,
esterasas, etc.
Reacciones no enzimáticas: lípidos, glucógeno, etc.

- Imnumocitoquímica: reacciones anticuerpo-antígeno (cómo los

grupos sanguíneos) en tejidos fijados con formalina; se puede ver
el nivel de reacción que ocurre.

- Autoradiografía: técnica de tinción que permite localizar

macromoléculas fijadas por isótopos radioactivos.

- Gangliocentinela: aplicaciones, sobretodo, en cáncer de mama,

pene, cabeza y cuello, cólon y piel (melanomas). Consiste en
buscar el primer ganglio linfático de drenaje directo del tumor,
pues este presentaría la máxima probabilidad de afectación por
las células metastásicas.
Se inyecta un radio-trazador (tecnecio 99), se realiza una
gammagrafía (para localizar el punto de drenaje) y se extrae el
ganglio en quirófano.