¿Qué son los esferoides?

Los esferoides son agregados celulares tridimensionales (3D) que

pueden recrear tejidos y microtumores. En los últimos años se ha
producido un progreso significativo en el desarrollo de agregados de
células tumorales in vitro para su uso como modelos de entornos
tisulares in vivo. Cuando estos agregados se siembran en un pocillo de
una microplaca de fondo redondo de baja adherencia forman un
esferoide definido.
Se cree que los esferoides recrean el comportamiento del tumor más
eficazmente que los cultivos celulares bidimensionales (2D) normales
porque, al igual que los tumores, contienen tanto células expuestas en la
superficie como profundamente enterradas, células en proliferación o no,
y un centro hipóxico con una capa de células exterior bien oxigenada.
Dichos modelos de esferoides 3D se están utilizando con éxito en
entornos de cribado para evaluar mejor la seguridad de los fármacos e
identificar posibles tratamientos contra el cáncer.
Z-stack atravesando una profundidad de 250 µm de un esferoide. Podemos ver las células del
centro del esferoide a esta profundidad gracias a nuestro módulo especializado de disco
confocal que penetra en el tejido profundo.

Aplicación de los esferoides para la

investigación del cáncer y el cribado
de fármacos
Uno de los objetivos más significativos en la investigación del cáncer es
entender la formación de las células tumorales. En comparación con los
cultivos celulares 2D, los esferoides recrean tumores sólidos con mucha
más exactitud. Ayudan a visualizar los cambios fisiológicos que
diferencian a las células tumorales de las células sanas. Los modelos de
esferoides tumorales multicelulares proporcionan más información del
microambiente tumoral, lo que permite a los investigadores visualizar las
interacciones entre células, cómo absorben los nutrientes las células
tumorales y cómo proliferan.

Los esferoides también son perfectos para el cribado preclínico de

fármacos y la validación durante la monitorización de las respuestas
celulares a las intervenciones terapéuticas. Específicamente, pueden
revelar la capacidad (o incapacidad) de la infiltración de los fármacos en
el tumor, así como sus efectos inhibitorios sobre las metástasis.

La investigación con células madre es otra aplicación importante de los

esferoides, especialmente durante el cultivo de células madre
embrionarias (embryonic stem cell, ESC) y neuronales (neural stem cell,
NSC). Recientemente, los investigadores cultivaron células madre
mesenquimales (mesenchymal stem cell, MSC) en esferoides y
demostraron sus efectos regenerativos y antiinflamatorios, lo que
representa su potencial para la medicina regenerativa y los tratamientos
con células.

Comparados con otros modelos de cultivo celular 3D, los esferoides

ofrecen varias ventajas, como su relevancia para la biología del tumor, el
bajo coste, menos trabajo que los modelos animales, la reproducibilidad,
la facilidad de integración en el cribado de alto rendimiento y las
técnicas avanzadas de adquisición de imágenes.

Flujo de trabajo para el análisis de

esferoides 3D para el cribado de alto
rendimiento
La adquisición y el análisis de imágenes de esferoides son cruciales para
entender la formación y el comportamiento de los microambientes
tumorales. También pueden ayudar a obtener más información y datos
realistas a partir del cribado de fármacos antineoplásicos. Aquí hemos
desarrollado y optimizado métodos para la formación de esferoides 3D,
así como métodos para la adquisición y el análisis de imágenes
confocales para el cribado de alto rendimiento.
 
 
Los esferoides se pueden crecer en placas de 96 o 384 pocillos, tratarlos
con compuestos y teñirlos con colorantes que muestren los procesos y
vías celulares en funcionamiento. En algunos casos, es posible adquirir
imágenes de los esferoides sin necesidad de lavados. También se pueden
fijar si se desea.
 
1. Cultivo de los esferoides – Las células cancerosas se pueden
cultivar directamente en una placa de fondo redondo de adherencia
ultrabaja (ULA), u otro material de laboratorio para desarrollar la
morfología típica de un esferoide. Otro material de laboratorio
permite crecer varios esferoides en un único pocillo.
 
2. Tratamiento con compuestos – Tras la formación del esferoide,
se añaden a los pocillos compuestos a las concentraciones
deseadas y, a continuación, se incuban durante uno o varios días,
dependiendo del mecanismo que se esté estudiando.
 
3. Tinción de marcadores – Una vez finalizado el tratamiento con
compuestos, se añaden los colorantes directamente a los medios.
Se pueden emplear colorantes que no requieren lavado para evitar
perturbar los esferoides, aunque estos se pueden lavar
cuidadosamente incluso con automatización, si fuera necesario.
 
4. Adquisición de imágenes del esferoide – Se pueden capturar
imágenes individualmente dentro del cuerpo del esferoide o como
Z-stack (múltiples imágenes tomadas a diferentes profundidades)
utilizando un equipo especializado de adquisición de imágenes.
 
5. Análisis de las células cancerosas – Se puede utilizar el software
de adquisición y análisis de imágenes celulares para realizar un
análisis cuantitativo de las imágenes de las células para
monitorizar la expresión de diferentes marcadores y cuantificar las
lecturas biológicas.

Aplicación y ensayos
Disponer de métodos de adquisición y análisis de imágenes 3D de última
generación es crucial para caracterizar y monitorizar los esferoides. Este
intrincado flujo de trabajo puede beneficiarse enormemente de la
adquisición de imágenes de alto contenido y del software de análisis de
imágenes. En los recursos siguientes puede encontrar más información
sobre nuestros métodos para la investigación con esferoides.

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